沙蔥總黃酮對(duì)肉羊抗氧化能力的影響

木其爾　敖長(zhǎng)金　薩茹麗　王特日格樂(lè)　陳仁偉　特木其樂(lè)　王翠芳

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，呼和浩特010018)

沙蔥總黃酮對(duì)肉羊抗氧化能力的影響

木其爾敖長(zhǎng)金*薩茹麗王特日格樂(lè)陳仁偉特木其樂(lè)王翠芳

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，呼和浩特010018)

摘要：本試驗(yàn)旨在研究基礎(chǔ)飼糧中添加沙蔥總黃酮對(duì)肉羊體內(nèi)總抗氧化能力(T-AOC)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活力以及丙二醛(MDA)含量的影響，以闡明沙蔥總黃酮對(duì)肉羊的抗氧化作用，并確定沙蔥總黃酮在肉羊飼糧中的最適添加量。試驗(yàn)選用60只6月齡左右、體重(39.9±3.2) kg的小尾寒羊?yàn)樵囼?yàn)動(dòng)物，按照出生月齡和體重相近的原則，隨機(jī)分為4組，每組15只羊。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，3個(gè)試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加11、22、33 mg/kg的沙蔥總黃酮。預(yù)試期為15 d，正試期為60 d，試驗(yàn)期第0、15、30、45、60天時(shí)空腹頸靜脈采血，分離血清,試驗(yàn)期結(jié)束后每組分別隨機(jī)選取3只羊，進(jìn)行屠宰，取肝臟和脾臟樣品，分別測(cè)定血清及組織抗氧化指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1)飼糧添加11～33 mg/kg沙蔥總黃酮可顯著提高血清(第45天開(kāi)始)及肝臟T-AOC(P<0.05)，而對(duì)脾臟T-AOC無(wú)顯著影響(P>0.05)。2)飼糧添加11～33 mg/kg沙蔥總黃酮對(duì)血清、肝臟及脾臟T-SOD活力，血清CAT活力，血清、脾臟GSH-PX活力有一定的提高，其中33 mg/kg沙蔥總黃酮的作用最強(qiáng)，血清中第30天后效果明顯；而對(duì)肝臟、脾臟CAT活力，肝臟GSH-PX活力均無(wú)顯著影響(P>0.05)。3)飼糧添加11～33 mg/kg沙蔥總黃酮可降低血清、肝臟MDA含量，血清MDA含量第15天后效果明顯，對(duì)脾臟MDA含量無(wú)顯著影響(P>0.05)。結(jié)果提示，飼糧添加11～33 mg/kg沙蔥總黃酮可顯著提高肉羊體內(nèi)抗氧化指標(biāo)，并其效果具有時(shí)間和劑量依賴(lài)性，飼喂30 d后沙蔥總黃酮開(kāi)始發(fā)揮其體內(nèi)抗氧化能力。

關(guān)鍵詞：沙蔥；黃酮；肉羊；抗氧化能力

沙蔥(AlliummongolicumRegel),隸屬被子植物門(mén)(Angiospermae)，百合科(Liliaceae)，是一種具有很多生物活性的蔥屬植物，別名為蒙古韭。沙蔥作為荒漠草原及沙丘地帶特色植物具有很強(qiáng)的抗旱、抗寒性，其分布也很廣泛。目前在我國(guó)，其主要分布的地區(qū)有新疆、青海、甘肅、內(nèi)蒙古西部等地區(qū)[1]。尤其在鄂爾多斯、阿拉善、錫林郭勒等地，沙蔥是人人皆知的美味佳肴，其風(fēng)味獨(dú)特，營(yíng)養(yǎng)豐富，是內(nèi)蒙古地區(qū)的一大特色野生植物。沙蔥富含蛋白質(zhì)[2]、氨基酸[3]、脂肪[4]、礦物質(zhì)[5]、微量元素、多糖、黃酮類(lèi)化合物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[6-7]，同時(shí)食之可降血壓、開(kāi)胃、提高免疫力，具有抗氧化、抗衰老、抗菌抗病毒作用[8-11]，以此被譽(yù)為“菜中靈芝”。所有的生命在其生理過(guò)程中都會(huì)產(chǎn)生游離氧及氧化自由基，研究表明這些自由基與生命體的病變及疾病的產(chǎn)生有著最直接的關(guān)系[12]。目前自由基的清除大多數(shù)情況下會(huì)選擇合成藥物，例如，二丁基羥基甲苯(butylated hydroxytoluene，BHT)、丁基羥基茴香醚(butyl hydroxy anisd，BHA)等。黃酮類(lèi)化合物作為天然多酚類(lèi)物質(zhì)，其藥理及生物功效活躍，并且經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)具有很強(qiáng)的清除自由基、抗氧化活性，優(yōu)于或相當(dāng)于BHT和BHA的抗氧化能力。黃酮類(lèi)化合物作為沙蔥中的一個(gè)重要組成成分，趙春艷[13]研究發(fā)現(xiàn)沙蔥總黃酮對(duì)小鼠機(jī)體抗氧化能力有一定的提高作用。黃酮類(lèi)化合物的抗氧化作用與它獨(dú)具有的結(jié)構(gòu)也有不可分割的關(guān)系，結(jié)構(gòu)中的多酚羥基及C2-C3雙鍵等結(jié)構(gòu)可對(duì)生物機(jī)體提供氧和電子，也可螯合金屬離子，通過(guò)螯合可減弱這些離子的助氧化作用[14]。研究發(fā)現(xiàn)，綿羊瘤胃微生物中體外添加16～21 mg/kg沙蔥總黃酮能提高綿羊瘤胃微生物發(fā)酵參數(shù)的產(chǎn)氣量、pH、氨態(tài)氮、菌體蛋白、揮發(fā)性脂肪酸[15]。目前，沙蔥總黃酮的提取工藝、純化分離、結(jié)構(gòu)及其相關(guān)生物活性通過(guò)體外試驗(yàn)研究得以鑒定并被闡明[16]。但是有關(guān)沙蔥總黃酮對(duì)肉羊體內(nèi)抗氧化能力的相關(guān)研究尚無(wú)報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)包玲玲[15]前期的體外試驗(yàn)研究結(jié)果為基礎(chǔ)選取沙蔥總黃酮類(lèi)化合物的飼喂?jié)舛忍荻?分別在基礎(chǔ)飼糧中添加11、22、33 mg/kg的沙蔥總黃酮，篩選沙蔥總黃酮的最佳的添加范圍，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究沙蔥總黃酮對(duì)肉羊血清、肝臟、脾臟抗氧化能力的影響，為沙蔥總黃酮作為天然飼料添加劑應(yīng)用于肉羊生產(chǎn)提供可靠的依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1沙蔥總黃酮的制備

試驗(yàn)所用沙蔥總黃酮由本實(shí)驗(yàn)室制備，其提取最佳工藝借鑒薩茹麗[16]的方法。提取方法選擇超聲波法，提取時(shí)間15 min，提取溫度40 ℃，乙醇濃度為75%，料液比為1∶30，沙蔥總黃酮得率為12.85 mg/g沙蔥粉。為黃色粉末，難溶于水。根據(jù)薩茹麗[16]的結(jié)構(gòu)鑒定，其結(jié)構(gòu)中有單糖、3′,4′-環(huán)氧基-7-0-5-甲氧基黃酮醇、7-0-5,4′-二甲氧基-3氧基羥基黃酮、糖類(lèi)、盧丁、木犀草素-5′-0-糖葡萄糖-4-羥基苯丙酸、異槲皮苷糖類(lèi)、金合歡素及黃酮類(lèi)物質(zhì)。

1.1.2試劑及儀器

總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒、總超氧化物歧化酶(T-SOD)試劑盒、過(guò)氧化氫酶(CAT)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

主要儀器有多功能酶標(biāo)儀(A-5082，奧地利TECAN公司)、37 ℃恒溫箱(HH-400，北京恒星來(lái)廣營(yíng)醫(yī)療器械廠(chǎng))、可調(diào)溫水浴鍋。

1.2方法

1.2.1試驗(yàn)動(dòng)物的選擇

本試驗(yàn)選取60只6月齡左右、(39.9±3.2) kg小尾寒羊?yàn)閯?dòng)物模型，采用單因素多水平完全區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，按照出生月齡相近體重相近的原則，隨機(jī)分為4組(每個(gè)組15只羊)，即對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組。

1.2.2沙蔥總黃酮添加量選擇及飼糧組成

對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，根據(jù)前期沙蔥總黃酮瘤胃穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果添加22 mg/kg沙蔥總黃酮在瘤胃中發(fā)揮其最佳作用為基礎(chǔ)，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加11、22、33 mg/kg的沙蔥總黃酮?；A(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1　基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供The premix provided the following per kg of the diet：Fe (as ferrous sulfate) 25 mg，Zn (as zinc sulfate) 29 mg，Cu (as copper sulfate) 8 mg，Mn (as manganese sulfate) 30 mg，I (as potassium iodide) 0.04 mg，Co (as cobalt sulfate) 0.1 mg，VA 3 200 IU，VD31 200 IU，VE 20 IU。

2)消化能為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值。DE was a calculated value, while the others were measured values.

1.2.3試驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期共75 d，其中預(yù)試期15 d，在預(yù)試期對(duì)試驗(yàn)羊進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng)、消毒、防疫。正試期60 d，每天06:00、18:00進(jìn)行飼喂，先粗后精，自由飲水。

1.2.4試驗(yàn)樣品采集及預(yù)處理

正試期的第0、15、30、45、60天，每組15只羊晨飼前進(jìn)行頸靜脈采血5 mL，置于無(wú)抗凝劑采血管中。將采好的血靜置40 min，自然凝固，血清析出之后，800×g離心10 min。用干燥EP管收集血清，即刻使用或-20 ℃保存待用。試驗(yàn)期結(jié)束之后，每組根據(jù)日采食量、平均日增重等條件相近原則選取3只羊進(jìn)行屠宰試驗(yàn)，采集0.1～0.2 g肝組織，通過(guò)預(yù)冷的生理鹽水進(jìn)行清洗，除去表面血液及殘留物，濾紙拭干，準(zhǔn)確稱(chēng)重，置于5 mL凍存管中備用。使用時(shí)研磨，用勻漿介質(zhì)制成10%的肝勻漿。

1.2.5測(cè)定方法

測(cè)定血清、肝臟、脾臟T-AOC，T-SOD、CAT、GSH-PX活力及MDA含量。

試驗(yàn)具體步驟及計(jì)算方法嚴(yán)格按照南京建成生物工程研究所提供的T-AOC、T-SOD、CAT、GSH-PX、MDA測(cè)試盒的說(shuō)明操作。測(cè)定組織抗氧化指標(biāo)時(shí)，必須先測(cè)定組織內(nèi)的蛋白質(zhì)含量，之后按照測(cè)試盒的說(shuō)明進(jìn)行測(cè)定。組織蛋白質(zhì)含量測(cè)定及計(jì)算方法按照南京建成生物工程研究所提供的蛋白質(zhì)定量測(cè)試盒進(jìn)行操作。

飼糧營(yíng)養(yǎng)水平的測(cè)定方法：飼料粗蛋白質(zhì)含量的采用凱氏定氮法進(jìn)行測(cè)定；采用范氏(Van Soest)洗滌纖維分析法測(cè)定中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)含量；通過(guò)高錳酸鉀滴定法測(cè)定鈣含量；磷含量用鉬黃比色法進(jìn)行測(cè)定。

1.3數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)分析使用SAS 9.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，各組間差異采用單因素方差分析，以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著，P>0.05表示差異不顯著。

2結(jié)果

2.1沙蔥總黃酮對(duì)肉羊血清抗氧化能力的影響

2.1.1血清T-AOC

由表2可知，第0天，試驗(yàn)Ⅰ組的T-AOC相對(duì)比其他組高，試驗(yàn)Ⅱ組與試驗(yàn)Ⅲ組比對(duì)照組高，但組間差異均不顯著(P>0.05)。第15天，對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ組及試驗(yàn)Ⅱ組T-AOC相對(duì)于第0天均有升高趨勢(shì)，差異不顯著(P>0.05)；對(duì)照組的高于3個(gè)試驗(yàn)組，但是差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)Ⅲ組的較第0天時(shí)有所降低，差異不顯著(P>0.05)。第30天，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組的T-AOC均有所升高，但是組間差異不顯著(P>0.05)；其中試驗(yàn)Ⅱ組的T-AOC最高。第45天，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組的T-AOC顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，其中試驗(yàn)Ⅲ組的活力最高，其次為試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅰ組，但是試驗(yàn)組之間差異不顯著(P>0.05)。第60天，3個(gè)試驗(yàn)組T-AOC顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，但是3個(gè)試驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)；第60天與第0天相比，對(duì)照組及各試驗(yàn)組的T-AOC均顯著升高(P<0.05)。由此可看出，飼糧添加沙蔥總黃酮30 d后開(kāi)始對(duì)肉羊血清T-AOC起作用。

表2　沙蔥總黃酮對(duì)肉羊血清總抗氧化能力的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同或無(wú)大寫(xiě)字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同大寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)；同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同或無(wú)小寫(xiě)字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。表3至表6同。

In the same row, values with the same or no capital letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.05); in the same column, values with the same or no small letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as Table 3 to Table 6.

2.1.2血清T-SOD活力

由表3可知，第0天，試驗(yàn)Ⅱ組的血清T-SOD活力最高，但與其他各組之間均差異不顯著(P>0.05)。第15天，對(duì)照組、3個(gè)試驗(yàn)組的T-SOD活力均升高，組間差異不顯著(P>0.05)；其中，試驗(yàn)Ⅱ組最高。第30天，3個(gè)試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，但試驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。第45天，對(duì)照組的T-SOD活力有所降低，試驗(yàn)組均保持著上升趨勢(shì)，并顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；試驗(yàn)Ⅲ組的高于其他試驗(yàn)組，但差異不顯著(P>0.05)。第60天，試驗(yàn)Ⅲ組最高，顯著高于對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組(P<0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。由此可看出，沙蔥總黃酮對(duì)血清T-SOD活力的影響是隨著劑量的增多而增大，同時(shí)也可發(fā)現(xiàn)沙蔥總黃酮在飼喂30 d后開(kāi)始起作用。

表3　沙蔥總黃酮對(duì)肉羊血清總超氧化物歧化酶活力的影響

2.1.3血清CAT活力

由表4可知，各試驗(yàn)組隨著沙蔥總黃酮的添加量增多而CAT活力上升的趨勢(shì)，同時(shí)也可看出，時(shí)間也是影響CAT活力的因素之一。第0天，各組之間CAT活力差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)Ⅱ組的最高。第15天，試驗(yàn)Ⅲ組的CAT活力顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，并高于試驗(yàn)Ⅰ組及試驗(yàn)Ⅱ組，但差異不顯著(P>0.05)。第30天，3個(gè)試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，但試驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。第45天，3個(gè)試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，3個(gè)試驗(yàn)組中試驗(yàn)Ⅱ組的最高，但試驗(yàn)組間差異不顯著(P>0.05)。第60天，3個(gè)試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，各試驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。由此可看出，飼糧添加沙蔥總黃酮對(duì)血清CAT活力起到了提高的作用，飼喂45 d后起作用。

表4　沙蔥總黃酮對(duì)肉羊血清過(guò)氧化氫酶活力的影響

2.1.4血清GSH-PX活力

由表5可知，飼糧添加沙蔥總黃酮15 d后血清GSH-PX活力顯著增加(P<0.05)，并隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而加強(qiáng)。第0天，各組間差異不顯著(P>0.05)。第15天，試驗(yàn)Ⅰ組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；試驗(yàn)Ⅱ組及試驗(yàn)Ⅲ組的GSH-PX活力顯著高于對(duì)照組及試驗(yàn)Ⅰ組(P<0.05)。第30天，3個(gè)試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；試驗(yàn)Ⅲ組的GSH-PX活力最高，并高于試驗(yàn)Ⅰ組及對(duì)照組(P<0.05)。第45天，3個(gè)試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。第60天，試驗(yàn)Ⅱ組及試驗(yàn)Ⅲ組的GSH-PX活力顯著高于對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ組(P<0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。由此可看出，沙蔥總黃酮對(duì)于肉羊血清GSH-PX活力的影響效果顯著，并隨著飼養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而加強(qiáng)。

表5　沙蔥總黃酮對(duì)肉羊血清谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力的影響

2.1.5血清MDA含量

由表6可知，第0天，各組的血清MDA含量均無(wú)顯著差異(P>0.05),試驗(yàn)Ⅰ組的MDA含量相比較其他組高。第15天，3個(gè)試驗(yàn)組的含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；3個(gè)試驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異(P<0.05)，并且第15天的MDA含量顯著低于第0天(P<0.05)。第30天，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組的MDA含量仍保持降低的趨勢(shì)，其含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組低于對(duì)照組，但是差

異不顯著(P>0.05)。第45天，3個(gè)試驗(yàn)組均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；3個(gè)試驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。第60天，3個(gè)試驗(yàn)組均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，其中試驗(yàn)Ⅲ組顯著低于對(duì)照組及試驗(yàn)Ⅱ組(P<0.05)，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。由此可看出，沙蔥總黃酮對(duì)血清MDA含量均有抑制作用，且從15 d后開(kāi)始能起作用。

表6　沙蔥總黃酮對(duì)肉羊血清丙二醛含量的影響

2.2沙蔥總黃酮對(duì)肉羊組織抗氧化能力的影響

2.2.1肝臟

由表7可知，3個(gè)試驗(yàn)組的肝臟T-AOC顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，各試驗(yàn)組之間差異不顯著(P>0.05)。對(duì)于肝臟T-SOD活力，試驗(yàn)Ⅲ組顯著高于對(duì)照組及其他試驗(yàn)組(P<0.05)，其次試驗(yàn)Ⅱ組高于對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ組，但差異不顯著(P>0.05)。沙蔥總黃酮對(duì)肝臟CAT活力的影響不顯著(P>0.05)。對(duì)于GSH-PX活力，各試驗(yàn)組均高于對(duì)照組，但差異均不顯著(P>0.05)。對(duì)于肝臟MDA含量，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組均低于對(duì)照組，差異不顯著(P>0.05)，而試驗(yàn)Ⅲ組的含量則顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，各試驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。

2.2.2脾臟

由表8可知，各試驗(yàn)組的脾臟T-AOC高于對(duì)照組，但是差異不顯著(P>0.05)。對(duì)于脾臟T-SOD活力，試驗(yàn)Ⅱ組及試驗(yàn)Ⅲ組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，高于試驗(yàn)Ⅰ組，差異不顯著(P>0.05)，試驗(yàn)Ⅲ組與試驗(yàn)Ⅱ組之間差異不顯著(P>0.05)。對(duì)于脾臟CAT活力，試驗(yàn)組高于對(duì)照組，均有上升的趨勢(shì)，但是與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。試驗(yàn)Ⅱ組脾臟GSH-PX活力最高，顯著高于對(duì)照組及其他試驗(yàn)組(P<0.05)，試驗(yàn)Ⅰ組顯著高于對(duì)照組及試驗(yàn)Ⅲ組(P<0.05)。對(duì)于脾臟MDA含量，沙蔥總黃酮有一定的抑制作用，均有下降的趨勢(shì)，但是各組間差異不顯著(P>0.05)。

表7　沙蔥總黃酮對(duì)肉羊肝臟抗氧化能力的影響

同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同或無(wú)小寫(xiě)字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same column, values with the same or no small letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

表8　沙蔥總黃酮對(duì)肉羊脾臟抗氧化能力的影響

3討論

3.1沙蔥總黃酮對(duì)肉羊血清及組織中的T-AOC的影響

T-AOC是衡量生物機(jī)體內(nèi)抗氧化能力的最佳指標(biāo)之一，同時(shí)機(jī)體T-AOC的強(qiáng)弱直接影響機(jī)體的健康，T-AOC反映機(jī)體抗氧化防御體系對(duì)體內(nèi)自由基的代謝狀態(tài)[17]。機(jī)體體內(nèi)抗氧化劑之間的相互協(xié)作、細(xì)胞外自由基的清除反應(yīng)以及生物的衰老、疾病等都是能夠通過(guò)體內(nèi)T-AOC來(lái)做出反映[18-19]。黃酮類(lèi)化合物為天然多酚類(lèi)物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)中有多個(gè)羥基，其3個(gè)苯環(huán)形成的結(jié)構(gòu)屬于共軛芳香體系，所以生物活性很高[20]。黃酮類(lèi)化合物的獨(dú)特結(jié)構(gòu)可產(chǎn)生共軛效應(yīng)，通過(guò)此效應(yīng)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生一定的轉(zhuǎn)變，使得分子結(jié)構(gòu)內(nèi)的氫鍵得到穩(wěn)定，從而會(huì)使機(jī)體體內(nèi)抗氧化能力提高[21]。除此之外沙蔥總黃酮也可能直接與體內(nèi)自由基產(chǎn)生結(jié)合反應(yīng)來(lái)保護(hù)機(jī)體免受氧化。趙春艷[13]通過(guò)沙蔥總黃酮類(lèi)化合物飼喂小鼠，研究血清及肝臟抗氧化能力的試驗(yàn)指出，飼喂14 d后試驗(yàn)組的血清T-AOC要顯著高于對(duì)照組，而肝臟的T-AOC在第7天的時(shí)候要顯著高于對(duì)照組，所有研究指明沙蔥總黃酮類(lèi)化合物是通過(guò)與體內(nèi)自由基或活性氧相結(jié)合，以免發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化。目前對(duì)于黃酮類(lèi)化合物對(duì)小鼠等小動(dòng)物的研究很多，但是對(duì)于肉羊體內(nèi)抗氧化能力的測(cè)定尚少見(jiàn)，這也一定程度上局限了黃酮類(lèi)化合物對(duì)于畜牧生產(chǎn)中的應(yīng)用，對(duì)開(kāi)發(fā)新型天然飼料添加劑的步伐也成為了羈絆。因此將黃酮類(lèi)化合物的試驗(yàn)研究面向肉羊體內(nèi)抗氧化能力的測(cè)定是對(duì)于畜牧生產(chǎn)及飼料開(kāi)發(fā)奠定科學(xué)基礎(chǔ)。

李德生等[22]研究發(fā)現(xiàn)，大豆黃酮顯著提高了泌乳母豬血清T-AOC；王文君等[23]發(fā)現(xiàn)蘆薈黃酮極顯著提高小鼠肝臟的T-AOC；楊現(xiàn)艷[24]指出，沙棘籽渣黃酮對(duì)更年期大鼠血清及肝臟的T-AOC有一定的提高作用。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，飼糧中添加不同水平的沙蔥總黃酮，以15 d為1個(gè)試驗(yàn)階段飼喂60 d后對(duì)肉羊的血清及組織的T-AOC的影響是不同的。沙蔥總黃酮可顯著提高肉羊血清T-AOC，并隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。對(duì)于肝臟的T-AOC也有一定影響，并各試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組T-AOC，而對(duì)于脾臟的T-AOC的影響其效果不顯著，飼喂沙蔥總黃酮后脾臟T-AOC有上升趨勢(shì)。這一結(jié)果與很多學(xué)者在小動(dòng)物上的研究的結(jié)果一致。沙蔥總黃酮提高肉羊血清及肝臟T-AOC的原因，一方面可能為沙蔥總黃酮直接與體內(nèi)活性氧或自由基發(fā)生反應(yīng)從而保護(hù)機(jī)體受到損傷。另一方面與沙蔥總黃酮的結(jié)構(gòu)有關(guān)，其所含的3′,4′-環(huán)氧基-7-0-5-甲氧基黃酮醇和7-0-5,4′-二甲氧基-3氧基羥基黃酮結(jié)構(gòu)是抗氧化活性中的關(guān)鍵基團(tuán)，進(jìn)入體內(nèi)后發(fā)生反應(yīng)，提高T-AOC。

3.2沙蔥總黃酮對(duì)肉羊血清及組織中的T-SOD、CAT、GSH-PX活力的影響

生命在活動(dòng)中不斷發(fā)生氧化還原反應(yīng)，體內(nèi)的這個(gè)反應(yīng)是通過(guò)氧化防御系統(tǒng)來(lái)維持平衡，這個(gè)防御系統(tǒng)包含酶促體系和非酶促體系。其中酶促體系包括T-SOD、CAT、GSH-PX，這是防御系統(tǒng)中的最主要的酶，也是有效的自由基清除劑。體內(nèi)的活性氧自由基是在SOD的作用下清除，SOD可催化超氧陰離子(·O2-)生成過(guò)氧化氫(H2O2)，同時(shí)在與別的酶的協(xié)同作用下最終生成水，減弱活性氧對(duì)機(jī)體的危害。GSH-PX為體內(nèi)過(guò)氧化物分解酶，GSH-PX、CAT與SOD相互作用使H2O2分解為水，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能的完整。灌胃胡楊葉黃酮10、20、30 mg/(kg·d)可顯著提高小鼠血清及肝臟中T-SOD、GSH-PX活力[25]。灌胃墨旱蓮黃酮類(lèi)提取物(FEE)≥1.0 mg/mL時(shí)，對(duì)小鼠血清T-SOD、GSH-PX活力有顯著影響，F(xiàn)EE≥5.0 mg/mL時(shí)，對(duì)T-SOD、GSH-PX活力的影響是極顯著的，所以能有效防止細(xì)胞受氧化的損傷[26]。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，沙蔥總黃酮對(duì)血清T-SOD、CAT、GSH-PX活力有一定的影響，33 mg/kg沙蔥總黃酮組對(duì)血清T-SOD、CAT、GSH-PX活力有顯著提高，并飼喂30 d后其含量顯著提高。除此之外，其他試驗(yàn)組對(duì)T-SOD、CAT、GSH-PX活力也有一定影響，均能使血清T-SOD、CAT、GSH-PX活力有所提高。對(duì)于肝臟和脾臟CAT活力、肝臟GSH-PX活力的影響不顯著。33 mg/kg沙蔥總黃酮組顯著提高肝臟及脾臟T-SOD活力，22 mg/kg沙蔥總黃酮組可顯著提高脾臟GSH-PX活力。沙蔥總黃酮可能通過(guò)調(diào)節(jié)體內(nèi)抗氧化酶相關(guān)基因的表達(dá)，從而促進(jìn)酶合成，提高酶促系統(tǒng)的防御能力。

3.3沙蔥總黃酮對(duì)肉羊血清及組織中MDA含量的影響

MDA是體內(nèi)自由基與生物膜中的多不飽和脂肪酸(PUFA)發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)而形成的脂質(zhì)過(guò)氧化物，MDA破壞細(xì)胞膜的完整性、也會(huì)引起細(xì)胞突變、對(duì)抗氧化防御系統(tǒng)造成損傷，最終對(duì)機(jī)體引起疾病，甚至導(dǎo)致死亡。也有研究證明，機(jī)體產(chǎn)生的動(dòng)脈硬化等疾病與MDA含量有密切關(guān)系，在體內(nèi)膽固醇代謝過(guò)程中，MDA與低密度脂蛋白(LDL)相結(jié)合而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)膽固醇堆積[27]。MDA的含量能直接地反映體內(nèi)自由基水平及脂質(zhì)過(guò)氧化程度。山稔子黃酮類(lèi)提取物通過(guò)灌胃研究對(duì)小鼠血清MDA含量的影響發(fā)現(xiàn)，它能顯著降低小鼠血清MDA含量[28]。蔡少妃等[29]研究發(fā)現(xiàn)，大豆異黃酮也能對(duì)去卵巢大鼠血清中MDA含量有顯著降低作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，沙蔥總黃酮均有顯著降低血清MDA含量的作用，其中33 mg/kg沙蔥總黃酮組顯著低于對(duì)照組。而33 mg/kg沙蔥總黃酮組對(duì)肝臟MDA含量有顯著降低的作用。各試驗(yàn)組對(duì)脾臟MDA含量則無(wú)顯著影響。沙蔥總黃酮能夠有效抑制肉羊體內(nèi)MDA含量的主要原因在于沙蔥總黃酮的C6-C3-C6結(jié)構(gòu)，這類(lèi)結(jié)構(gòu)可供氧和供電子能力，從而有效清除機(jī)體內(nèi)的自由基，保護(hù)機(jī)體免遭脂質(zhì)過(guò)氧化物的損傷。

4結(jié)論

飼糧添加11～33 mg/kg沙蔥總黃酮可顯著提高肉羊體內(nèi)抗氧化指標(biāo)，并其效果具有時(shí)間和劑量依賴(lài)性，飼喂30 d后沙蔥總黃酮開(kāi)始發(fā)揮其體內(nèi)抗氧化能力。

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(責(zé)任編輯王智航)

Effects of Flavonoids fromAlliummongolicumRegel on Antioxidant Capacity of Meat Sheep

MU QierAO Changjin*SA RuliWANG TerigeleCHEN RenweiTE MuqileWANG Cuifang

(College of Animal Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China)

Abstract:This experiment was conducted to investigate the effects of dietary supplementation of flavonoids from Allium mongolicum Regel on total antioxidant capacity (T-AOC), the activities of total superoxide dismutase (T-SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GSH-PX), and malondialdehyde (MDA) content of meat sheep to determine the optimal level. Sixty 6-month-old meat sheep with similar body weight [(39.9±3.2) kg] were randomly assigned to 4 groups with 15 sheep per group. Control group was fed a basal diet, and the 3 experimental groups were fed the basal diet supplemented with 11, 22 and 33 mg/kg flavonoids from Allium mongolicum Regel, respectively. Preliminary feeding period was 15 d, and the experimental period was 60 d. Blood was collected at days 0, 15, 30, 45, 60 via jugular venipuncture, and serum was harvested. Three sheep were randomly selected from each of the four groups for slaughter after experiment, and samples of liver and spleen were collected to determine the antioxidant indices. The results showed as follows: 1) dietary supplementation of 11 to 33 mg/kg flavoniods from Allium mongolicum Regel significantly increased T-AOC in serum (from day 45) and liver (P<0.05)， but had no significant effect on that in spleen (P>0.05). 2)Dietary supplementation of 11 to 33 mg/kg flavoniods from Allium mongolicum Regel had positive effect on the activities of T-SOD in serum, liver and spleen, CAT in serum, and GSH-PX in serum and spleen; the supplemental level of 33 mg/kg showed the highest effects, and the effects became obvious after day 30 in serum; however, it had no significant effects on CAT in liver and spleen, and GSH-PX in liver (P>0.05). 3) Dietary supplementation of 11 to 33 mg/kg flavoniods from Allium mongolicum Regel could decrease the content of MDA in serum and liver, and the effects became obvious after day 15 in serum, however, it had no significant effects on the content of MDA in spleen (P>0.05). The results indicate that dietary supplementation of 11 to 33 mg/kg flavoniods from Allium mongolicum Regel can significantly improve antioxidant capacity of meat sheep, and the antioxidant capacity is in time-dependent and dose-dependent manners. Flavoniods from Allium mongolicum Regel begin to play its role after fed for 30 d.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(6)：1823-1831]

Key words:Allium mongolicum Regel; flavoniods; meat sheep; antioxidant capacity

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.06.025

收稿日期：2016-03-24

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金地區(qū)科學(xué)基金項(xiàng)目(31260558，31160474)；“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2013BDA10B04)

作者簡(jiǎn)介：木其爾(1989—)，女，蒙古族，內(nèi)蒙古赤峰人，博士研究生，從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與畜產(chǎn)品品質(zhì)研究。E-mail: hamuqier1989@126.com *通信作者：敖長(zhǎng)金，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail： changjinao@aliyun.com

中圖分類(lèi)號(hào)：S826；S816.7

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-267X(2016)06-1823-09

*Corresponding author, professor, E-mail: changjinao@aliyun.com