含釩蛋黃粉對(duì)大鼠生長(zhǎng)、氧化應(yīng)激狀態(tài)及其相關(guān)基因表達(dá)的影響

崔仁勇　王建萍　張克英　丁雪梅　曾秋鳳　白世平　羅玉衡

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)所，教育部抗病營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，雅安625014)

含釩蛋黃粉對(duì)大鼠生長(zhǎng)、氧化應(yīng)激狀態(tài)及其相關(guān)基因表達(dá)的影響

崔仁勇王建萍張克英*丁雪梅曾秋鳳白世平羅玉衡

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)所，教育部抗病營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，雅安625014)

摘要：釩是一種重金屬，過(guò)量的攝入會(huì)造成蛋雞氧化應(yīng)激，降低雞蛋品質(zhì)并殘留到雞蛋中，影響雞蛋的安全。本研究主要通過(guò)給大鼠飼喂含釩的蛋黃粉，考察其對(duì)大鼠生長(zhǎng)性能、氧化應(yīng)激狀態(tài)及其相關(guān)基因表達(dá)的影響，為評(píng)價(jià)釩(有機(jī)釩)的生物安全性提供依據(jù)。選用27只4周齡雌性Wistar大鼠單籠飼養(yǎng)，設(shè)3個(gè)處理，每個(gè)處理9只，分別在飼糧中添加600 g/kg采食3種釩水平(0、5和10 mg/kg)飼糧的蛋雞所產(chǎn)雞蛋制備的蛋黃粉。經(jīng)實(shí)測(cè)，3種飼糧分別含釩0.107、0.137和0.164 mg/kg。試驗(yàn)期35 d。結(jié)果表明：3個(gè)處理大鼠生長(zhǎng)性能、器官指數(shù)，血漿甘油三酯、丙二醛(MDA)、尿素氮含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性，肝臟、腎臟超氧化物歧化酶活性、MDA含量、總抗氧化能力，肝臟ALT、AST活性、谷胱甘肽含量和谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶活性，以及肝臟、腎臟組織結(jié)構(gòu)、腎臟釩殘留量均無(wú)顯著差異(P>0.05)。與處理1相比，處理2、3大鼠肝臟醌氧化還原酶1(NQO1)活性顯著下降(P<0.05)，NQO1和核因子E2相關(guān)因子2 mRNA相對(duì)表達(dá)量也顯著下降(P<0.05)。結(jié)果提示：大鼠飼糧中添加600 mg/kg不同釩含量的蛋黃粉對(duì)大鼠生長(zhǎng)性能和機(jī)體氧化還原狀態(tài)的影響無(wú)顯著差異，但含釩0.137、0.164 mg/kg可以降低NQO1酶活性并下調(diào)抗氧化應(yīng)答相關(guān)基因的表達(dá)。

關(guān)鍵詞：蛋黃粉；釩；大鼠；氧化應(yīng)激；醌氧化還原酶1；核因子E2相關(guān)因子2

釩作為生物體的一種必需微量元素，參與蛋白質(zhì)、核酸、糖及脂類(lèi)物質(zhì)的代謝，具有其特殊的營(yíng)養(yǎng)生理功能，其在微量條件下，能維持機(jī)體正常的生長(zhǎng)和發(fā)育，參與葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)等[1-2]。但作為重金屬的一種，釩在過(guò)量條件下會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生較嚴(yán)重的毒性效應(yīng)，如造成動(dòng)物體重減少，采食量降低，降低心率并造成心臟損傷、肺纖維、肝腎氧化損傷[3-5]，引起胚胎畸形等，甚至直接引起死亡。在鼠上的研究表明，釩引起大鼠中毒濃度為0.25 mg/L，致死濃度為6.00 mg/L[5]。有研究表

明，釩會(huì)隨著蛋雞飼糧被攝入，最終轉(zhuǎn)運(yùn)到雞蛋中，且雞蛋中釩殘留劑量會(huì)隨著飼糧釩的增加而增加，而蛋黃是雞蛋中釩的主要沉積部位[6]。雞蛋作為人類(lèi)日常廉價(jià)的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)源，含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，殘留于雞蛋中的釩是否會(huì)對(duì)人體健康造成潛在的安全隱患，目前還未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)將含釩飼糧飼喂蛋雞的雞蛋所得蛋黃粉配制成大鼠基礎(chǔ)飼糧，予以飼喂大鼠，從而評(píng)價(jià)含釩蛋黃粉(有機(jī)釩)是否能影響大鼠的生長(zhǎng)和健康。

1材料與方法

1.1材料、試劑和儀器

分別收集蛋雞攝入含釩量為0、5和10 mg/kg的飼糧12周后所產(chǎn)雞蛋，小心去除蛋殼和蛋白，冷凍干燥后制得蛋黃粉。取27只3周齡清潔級(jí)Wistar大鼠(購(gòu)于成都達(dá)碩生物有限公司)，分籠飼養(yǎng)，溫度(23±2) ℃，相對(duì)濕度(55±2)%，自由飲水、進(jìn)食，適應(yīng)環(huán)境7 d后，開(kāi)始正式試驗(yàn)。谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、尿素氮(UN)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、甘油三酯(TG)、總抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(GST)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；醌氧化還原酶1(NQO1)試劑盒購(gòu)自武漢基因美公司；核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)和NQO1引物、提取、反轉(zhuǎn)錄以及定量試劑購(gòu)自天根生物有限公司；其他試劑均為分析純。

超純水制備儀(美國(guó)密理博公司)；電子天平；微波消解儀；電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS，7500a，美國(guó)安捷倫公司)，為滿足對(duì)金屬元素的測(cè)定要求用外標(biāo)物——10-12g/L Li、Y、Ce、Tl和Co的2% HNO3調(diào)節(jié)液對(duì)儀器靈敏度(Li、Y和Tl)、氧化物水平(CeO/Ce)和雙電荷(Ce+2/Ce)進(jìn)行優(yōu)化；酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR(C1000，成都伯樂(lè)科技有限公司)。

1.2基礎(chǔ)飼糧

基礎(chǔ)飼糧以玉米淀粉、蛋黃粉為主配制而成，其中粗蛋白質(zhì)、總能、粗脂肪水平參照Imura等[7]設(shè)計(jì)，粗纖維、維生素以及礦物質(zhì)添加量參考Reeves等[8]。飼糧制成塊狀，方便大鼠啃食?；A(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)

大鼠試驗(yàn)設(shè)3個(gè)處理，分別在大鼠基礎(chǔ)飼糧中加入600 g/kg 3種來(lái)源的蛋黃粉，依次為處理1、2和3。經(jīng)實(shí)測(cè)，3種蛋黃粉含釩量分別為0.006、0.053和0.080 mg/kg，所配試驗(yàn)飼糧分別含釩0.107、0.137和0.164 mg/kg。

1.4動(dòng)物飼養(yǎng)與管理

試驗(yàn)選用21日齡斷奶Wistar大鼠27只，單只飼養(yǎng)于20 cm×15 cm×20 cm鐵制籠中，自由采食及飲水，預(yù)飼7 d后，按體重?zé)o差異原則分成3個(gè)處理，分別飼喂3種試驗(yàn)飼糧。在每天上午和下午各記錄1次房間溫度及相對(duì)濕度值，觀察大鼠的活動(dòng)狀態(tài)及精神狀態(tài)。試驗(yàn)期35 d。

表1　基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(飼喂基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供The premix provided the following per kg of the diet：Cu 6 mg,Fe 35 mg,Mn 11 mg,Zn 35 mg,Se 0.17 mg,I 0.21 mg,Na 1.3 g,VA 10 000 IU,VD33 000 IU,VE 22.5 IU,VK 3 mg,VB13 mg,VB27.5 mg,VB64.5 mg,VB1230 μg,煙酸 niacin 300 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 15 mg，葉酸 folic acid 1.5 mg,生物素 biotin 120 μg，抗氧化劑 antioxidant 60 μg。

2)粗蛋白質(zhì)和粗脂肪為實(shí)測(cè)值，其余為計(jì)算值。CP and EE were measured values, while the others were calculated values.

1.5樣品采集與測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將所有大鼠稱(chēng)重后，通過(guò)摘眼球采血，收集2 mL血液到含0.2%肝素鈉的抗凝管中，混勻，然后3 500 r/min離心10 min，收集上清液，分裝于200 μL EP管中，保存于-20 ℃冰箱中待測(cè)。采血后，將大鼠脊髓脫臼處死，然后取約0.2 g肝臟放于滅菌的1.5 mL EP管中，保存于-80 ℃超低溫冰箱中，用于基因測(cè)定。取肝臟、腎臟、肺臟、脾臟以及心臟進(jìn)行稱(chēng)重，分別計(jì)算相應(yīng)的器官指數(shù)，計(jì)算公式為：

器官指數(shù)(%)=100×相應(yīng)的器官重量/

大鼠活體重量。

取1/2肝臟、腎臟固定于4%的多聚甲醛溶液中，用于組織切片觀察。將余下的肝臟、腎臟裝袋，保存在-20 ℃冰箱中，用于抗氧化等生化指標(biāo)以及釩殘留量的測(cè)定。

1.5.1血漿生化指標(biāo)測(cè)定

將凍存的血漿樣放置室溫待其完全解凍后，按南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。血漿ALT活性采用改良賴(lài)氏法測(cè)定，AST活性采用酶動(dòng)力法測(cè)定，UN含量采用脲酶法測(cè)定，MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定，TG含量采用脂酶比色法測(cè)定。

1.5.2肝臟、腎臟抗氧化指標(biāo)測(cè)定

取肝臟和腎臟組織各1.0 g于冰生理鹽水中，制成10%組織勻漿，3 500 r/min離心10 min，取上清液用于以下指標(biāo)的測(cè)定。

肝臟、腎臟SOD活性采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，MDA含量采用TBA法測(cè)定，T-AOC采用還原

法測(cè)定；肝臟TG含量及ALT、AST活性測(cè)定方法同血漿；肝臟GSH含量采用微量酶標(biāo)法測(cè)定，GST活性采用化學(xué)比色法測(cè)定，NQO1采用酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)測(cè)定。

1.5.3肝臟、腎臟組織切片觀察

將放在4%多聚甲醛中的肝臟、腎臟組織，脫水，石蠟包埋，做切片，蘇木精-伊紅常規(guī)染色，顯微鏡下觀察并記錄病理組織變化。

1.5.4肝臟、腎臟釩殘留測(cè)定

稱(chēng)取一定量保留的肝臟和腎臟樣品，進(jìn)行微波消解[9]，然后采用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測(cè)定組織中的釩含量[10]。

1.5.5肝臟基因測(cè)定

將凍存于-80 ℃冰箱中的肝臟樣品取出，液氮條件下用去除RNA酶的研缽磨細(xì)，加入細(xì)胞裂解液，提取其中的RNA，將得到的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，加入引物后進(jìn)行熒光定量，測(cè)定Nrf2與NQO1 mRNA在肝臟中的相對(duì)表達(dá)量。Nrf2引物參考Habeos等[11]，NQO1引物采用Primer Premier 6.0設(shè)計(jì)[12](表2)。RNA提取、反轉(zhuǎn)錄以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR過(guò)程均參照天根生物試劑盒進(jìn)行，基因的相對(duì)表達(dá)量用2-△△CT計(jì)算[13]。

表2　實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物

1.6統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)均采用SAS 9.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析結(jié)果以平均值和集合標(biāo)準(zhǔn)誤表示。使用單因素方差分析的一般線性模型(GLM)過(guò)程進(jìn)行分析，并以Duncan氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以P<0.05為顯著性標(biāo)準(zhǔn)，P<0.10為有顯著性差異的趨勢(shì)。

2結(jié)果

2.1生長(zhǎng)性能

從表3可以看出，試驗(yàn)期末3個(gè)處理大鼠體重、體增重、總采食量、單位體重采食量及飼料轉(zhuǎn)化率均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

2.2器官指數(shù)

從表4可以看出，試驗(yàn)期末3個(gè)處理大鼠肝臟、腎臟、肺臟、脾臟和心臟指數(shù)無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3　含釩蛋黃粉對(duì)大鼠生長(zhǎng)的影響

同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same column, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表4　含釩蛋黃粉對(duì)大鼠器官指數(shù)的影響

2.3血漿生化指標(biāo)

從表5可以看出，3個(gè)處理大鼠血漿AST、ALT活性及MDA、UN、TG含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表5　含釩蛋黃粉對(duì)大鼠血漿生化指標(biāo)的影響

2.4肝臟、腎臟釩殘留

從表6可以看出，與處理1相比，處理2、3肝臟、腎臟釩殘留量(鮮重基礎(chǔ))無(wú)顯著差異(P>0.05)，但處理2和3之間肝臟釩殘留量存在顯著差異(P<0.05)。

2.5肝臟、腎臟組織切片

從圖1可以看出，圖1-A表現(xiàn)出肝索完整、清晰，細(xì)胞核完整，細(xì)胞無(wú)空泡化；圖1-B表現(xiàn)出肝索較完整，細(xì)胞核無(wú)變化，極少量肝細(xì)胞有空泡樣出現(xiàn)輕微脂肪變性；圖1-C可以觀察到血竇較明顯，竇腔內(nèi)可見(jiàn)較多枯否氏細(xì)胞和一些血細(xì)胞。

圖1-D、圖1-E、圖1-F為腎臟皮質(zhì)結(jié)構(gòu)，可以看出，3個(gè)處理的腎小球無(wú)顯著變化；而從圖1-G、圖1-H、圖1-I可以看出，3個(gè)處理的腎小管也無(wú)明顯差異?？偟脕?lái)說(shuō)3個(gè)處理的腎臟無(wú)顯著性變化，無(wú)發(fā)生病變的現(xiàn)象發(fā)生。

表6　含釩蛋黃粉對(duì)大鼠肝臟、腎臟釩殘留量的影響(鮮重基礎(chǔ))

Table 6　Effects of egg yolk powder including vanadium on liver and kidney vanadium residual of rats (based on fresh weight)　g/kg

表6　含釩蛋黃粉對(duì)大鼠肝臟、腎臟釩殘留量的影響(鮮重基礎(chǔ))

項(xiàng)目Items肝臟Liver腎臟Kidney處理1Treatment124.40ab63.98處理2Treatment218.54b71.02處理3Treatment337.22a55.97集合標(biāo)準(zhǔn)誤PooledSEM4.797.40P值P-value0.040.38

A、B、C分別為處理1、2、3的肝臟切片；D、E、F分別為處理1、2、3腎小球切片，G、H、I分別為處理1、2、3腎小管切片。A, B and C were liver slices of treatments 1, 2 and 3, respectively. D, E and F were glomerular slices and G, H and I were kidney tubular slice of treatments 1, 2 and 3, respectively.

圖1含釩蛋黃粉對(duì)大鼠肝臟和腎臟組織病理變化的影響

Fig.1Effects of egg yolk powder including vanadium on liver and kidney tissue pathological changes of rats (400×)

2.6肝臟、腎臟生化指標(biāo)

從表7和表8可以看出，3個(gè)處理大鼠肝臟、腎臟SOD活性、MDA含量和T-AOC以及肝臟ALT、AST、GST活性和GSH含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。但與處理1相比，處理2、3顯著降低了大鼠肝臟NQO1活性(P<0.05)。

2.7肝臟NQO1、Nrf2 mRNA表達(dá)

從表9可以看出，與處理1相比，處理2、3顯著下調(diào)了肝臟NQO1和Nrf2 mRNA的表達(dá)(P<0.05)。

表7　含釩蛋黃粉對(duì)大鼠肝臟、腎臟氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響

表8　含釩蛋黃粉對(duì)大鼠肝臟生化指標(biāo)的影響

表9　含釩蛋黃粉對(duì)肝臟NQO1、Nrf2 mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

3討論

3.1含釩蛋黃粉對(duì)大鼠生長(zhǎng)性能的影響

釩作為機(jī)體必需的微量元素[14]，低劑量時(shí)可以促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)與發(fā)育[1]。Daniel等[15]研究指出，當(dāng)飼糧釩含量低于23 mg/kg時(shí)，大鼠的生長(zhǎng)狀態(tài)不受影響。前人研究表明，引起哺乳動(dòng)物中毒的釩酸鹽劑量為17 mg/kg BW[16]，而偏釩酸銨對(duì)大鼠的中毒劑量為11.2 mg/kg BW，釩對(duì)人體產(chǎn)生毒性傷害的臨界值為3 mg/d[17]。本試驗(yàn)3個(gè)處理飼糧釩含量依次為0.107、0.137和0.164 mg/kg，釩含量都較低，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)3個(gè)處理大鼠的精神狀態(tài)無(wú)變化，采食量正常，試驗(yàn)期末大鼠體重及體增重均無(wú)顯著差異。本試驗(yàn)3個(gè)處理中大鼠單位體重釩攝入量最高為0.38 mg/kg，日均釩攝入量最高為1.49×10-3mg/d，遠(yuǎn)小于中毒劑量，說(shuō)明含釩蛋黃粉對(duì)大鼠生長(zhǎng)不會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響。假設(shè)蛋雞采食含釩10 mg/kg的飼糧后所產(chǎn)雞蛋供人食用，每人每日吃1枚雞蛋(60 g)，則可能攝入約0.001 mg釩，遠(yuǎn)低于產(chǎn)生毒性傷害的臨界值。

3.2含釩蛋黃粉對(duì)大鼠健康的影響

器官指數(shù)能直觀地表現(xiàn)動(dòng)物機(jī)體器官的變化程度，反映動(dòng)物的健康狀況。Faulkner等[18]指出釩(偏釩酸銨)引起大鼠中毒的最低劑量為11.2～16.8 mg/kg。Domingo等[19]研究指出飼糧中添加釩的量在50 mg/kg以下，對(duì)大鼠的肝臟、腎臟、脾臟、心臟等器官指數(shù)都沒(méi)有影響。本試驗(yàn)3個(gè)處理大鼠飼喂釩含量依次為0.107、0.137、0.164 mg/kg的飼糧，對(duì)肝臟、腎臟、脾臟、心臟、肺臟均無(wú)顯著影響，結(jié)果與前人報(bào)道一致，此結(jié)果說(shuō)明給蛋雞飼喂含釩5和10 mg/kg飼糧，其所得雞蛋粉配制的飼糧釩殘留量都較低，不足以引起大鼠器官指數(shù)的變化。

血漿中AST和ALT活性變化，可以反映動(dòng)物體肝臟的健康狀況，而UN含量變化可以反映腎臟結(jié)構(gòu)的變化，TG含量能反映動(dòng)物體肝臟脂肪代謝功能，MDA含量變化則能說(shuō)明機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化的程度。孫素玲等[20]給大鼠以飲水形式每天飼喂5 mg/kg的釩(偏釩酸銨)，大鼠血清中ALT、AST活性與對(duì)照組無(wú)差異。Liu等[4]給1日齡肉雞飼喂含釩5 mg/kg飼糧直到42日齡，發(fā)現(xiàn)在試驗(yàn)第14、28和42天肉雞血漿SOD活性、T-AOC、MDA含量無(wú)顯著性變化。本試驗(yàn)中大鼠血漿ALT、AST活性以及TG、UN、MDA含量均無(wú)顯著性差異，與前人研究結(jié)果一致。

組織中釩的殘留量的變化反映釩在組織中的沉積規(guī)律以及沉積部位，可以作為釩產(chǎn)生作用的參考指標(biāo)，而組織形態(tài)觀察則能直觀了解組織器官的結(jié)構(gòu)變化，從而反映動(dòng)物組織的功能的變化。Daniel等[15]研究表明大鼠攝入較低劑量的釩(每天飲水?dāng)z入1 mg/L的釩酸鈉)對(duì)大鼠的組織釩殘留量無(wú)顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)飼喂3種蛋黃粉后大鼠肝臟和腎臟釩殘留量無(wú)顯著差異。

Liu等[4]給肉雞飼糧中添加5 mg/kg釩，觀察肉雞器官的組織形態(tài)，肉雞肝腎形態(tài)結(jié)構(gòu)無(wú)影響，說(shuō)明低劑量的釩對(duì)動(dòng)物機(jī)體的肝腎結(jié)構(gòu)無(wú)明顯影響。從本試驗(yàn)3個(gè)處理的肝腎切片可以看出，處理2、3對(duì)大鼠肝臟、腎臟的組織結(jié)構(gòu)無(wú)明顯的損傷影響，可能是釩含量較低，不足以引起組織損傷[4]。肝腎抗氧化能力的變化反映肝腎對(duì)抗外界氧化物的能力。GSH和GST是抗氧化系統(tǒng)中的重要物質(zhì)，GSH含量和GST活性能反映機(jī)體抗氧化能力的變化。SOD活性、T-AOC以及MDA含量是抗氧化能力最基本的指標(biāo)。高價(jià)的釩能引起機(jī)體的氧化應(yīng)激，影響肝腎的抗氧化能力[21]，從而造成肝腎損傷。Liu等[4]給1日齡肉雞飼喂含釩5 mg/kg飼糧，證實(shí)在試驗(yàn)第14、28和42天肉雞肝臟SOD活性、T-AOC、GSH和MDA含量無(wú)顯著性變化。本試驗(yàn)3個(gè)處理的肝臟、腎臟MDA含量、SOD活性和T-AOC以及肝臟GSH含量、GST活性無(wú)顯著差異，說(shuō)明蛋黃粉中的釩未達(dá)到影響大鼠肝臟和腎臟生化指標(biāo)的水平。

在人和鼠上進(jìn)行的體內(nèi)和體外的大量試驗(yàn)證實(shí)了釩可誘導(dǎo)肺臟、肝臟、腎臟、小腸上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激和氧化損傷[7,21]。Nrf2是一個(gè)基本的堿性亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子，是調(diào)節(jié)機(jī)體活性氧平衡的關(guān)鍵核因子。NQO1屬于Ⅱ相解毒酶，其受到Nrf2的調(diào)控，在氧化應(yīng)激條件下，其活性會(huì)增加[22]。研究發(fā)現(xiàn)釩(NH4VO3)能降低人類(lèi)肝臟細(xì)胞(HepG2和Hepa 1c1c7)中NQO1 mRNA的表達(dá)，加大氧化應(yīng)激[22]。Nrf2還是抗氧化酶系統(tǒng)的調(diào)控因子，SOD、NQO1、GST活性均受其調(diào)節(jié)。本試驗(yàn)處理2、3顯著降低了肝臟NQO1活性，降低了Nrf2和NQO1 mRNA的表達(dá)量，其生物學(xué)意義有待進(jìn)一步研究。

4結(jié)論

3種含釩蛋黃粉對(duì)大鼠生長(zhǎng)性能、血漿生化指標(biāo)及肝腎病理等影響無(wú)顯著差異，但含釩0.137和0.164 mg/kg可顯著降低大鼠肝臟NQO1活性，降低肝臟NQO1和Nrf2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

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(責(zé)任編輯田艷明)

Effects of Egg Yolk Powder Including Vanadium on Growth,Oxidative Stress Status and Its Related Gene Expression of Wistar Rats

CUI RenyongWANG JianpingZHANG Keying*DING XuemeiZENG Qiufeng BAI ShipingLUO Yuheng

(Key Laboratory of Animal Disease-Resistance of China Ministry of Education, Institute of Animal Nutrition,Sichuan Agricultural University, Ya’an 625014, China)

Abstract:As a kind of heavy metal, excessive intake of vanadium can cause oxidative stress to laying hens, reduce egg quality and make residue in eggs, which affects the safety of eggs. The objective of this study was to explore the effects of feeding egg yolk powder including vanadium to Wistar rats on their growth, oxidative stress status and its related gene expression, and to evaluate the biosecurity of organic vanadium. A total of 27 female Wistar rats (4 weeks old) were allocated to 3 treatments with 9 rats each, and fed three kinds of diets supplemented with 600 g/kg egg yolk powders which were prepared with eggs from laying hens fed diets containing 0, 5 and 10 mg/kg vanadium, respectively. The three diets actually contained 0.107, 0.137 and 0.164 mg/kg vanadium. The experiment lasted for 35 d. The results showed that there were no significant differences on growth performance, organ indices, contents of plasma triglyceride, malonaldehyde (MDA) and urea nitrogen, activities of plasma alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST), liver and kidney superoxide dismutase (SOD) activity, MDA content, and total antioxidant capacity (T-AOC), activities of liver ALT and AST, liver glutathione content, and liver glutathione S-transferase activity, as well as histomorphology of liver and kidney and vanadium residual in kidney of rats among 3 treatments (P>0.05). However, compared with treatment 1, liver quinone oxidoreductase 1 (NQO1) activity of rats in treatments 2 and 3 was significantly decreased (P<0.05), and the relative expression levels of liver NQO1 and nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) mRNA were significantly decreased (P<0.05), too. The results indicate that the dietary supplementation of 600 mg/kg egg yolk powders with different vanadium content has no significantly different effects on growth performance and oxidation-reduction state of Wistar rats. However, the NQO1 activity, mRNA expression of NQO1 and Nrf2 are down-regulated as the vanadium content increasing (0.137 and 0.164 mg/kg).[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(6)：1956-1964]

Key words:egg yolk powder; vanadium; rat; oxidative stress; NQO1; Nrf2

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.06.039

收稿日期：2016-01-07

基金項(xiàng)目：四川省科技支撐項(xiàng)目(2011NZ0073，2014NZ0002)；科技部科技支撐項(xiàng)目(2014BAD13B04)；四川省教育廳項(xiàng)目(13ZB0290)

作者簡(jiǎn)介：崔仁勇(1987—)，男，四川南充人，碩士，研究方向?yàn)榧仪轄I(yíng)養(yǎng)。E-mail： 497759752@qq.com *通信作者：張克英，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail: zkeying@sicau.edu.cn

中圖分類(lèi)號(hào)：S815

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-267X(2016)06-1956-09

*Corresponding author, professor, E-mail: zkeying@sicau.edu.cn