早發(fā)型重度子癇前期患者胎盤組織M-CSF、CRH和HO-2表達(dá)的研究

倫巍巍，張曦，朱建坡，程國(guó)梅鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南鄭州　450052

?

早發(fā)型重度子癇前期患者胎盤組織M-CSF、CRH和HO-2表達(dá)的研究

倫巍巍，張曦，朱建坡，程國(guó)梅
鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南鄭州450052

［摘要］目的研究早發(fā)型重度子癇前期患者胎盤組織中巨噬細(xì)胞集落刺激因子（MCSF）、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、血紅素氧化酶-2（HO-2）的表達(dá)，探討它們?cè)谠绨l(fā)型重度子癇前期發(fā)病機(jī)制中的作用。方法整群選擇選自2013年9月—2014年8月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院住院的孕婦73例，年齡22～37歲，孕周32～37周。早發(fā)型重度子癇前期患者25例，晚發(fā)型重度子癇前期患者23例，正常妊娠對(duì)照組25例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)照研究，應(yīng)用免疫組化方法研究M-CSF、CRH、HO-2的表達(dá)情況。結(jié)果①三期組孕婦之間年齡、終止妊娠孕周比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（見表1）。②與正常妊娠組比較，早發(fā)型及晚發(fā)型重度子癇前期組M-CSF表達(dá)水平均明顯升高；早發(fā)型組M-CSF表達(dá)水平明顯高于晚發(fā)型組。③與正常妊娠組比較，早發(fā)型及晚發(fā)型組CRH表達(dá)水平均明顯升高；早發(fā)型組CRH表達(dá)水平明顯高于晚發(fā)型組。④與正常妊娠組比較，早發(fā)型及晚發(fā)型組HO-2表達(dá)水平均明顯降低；早發(fā)型組HO-2表達(dá)水平低于晚發(fā)型組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論胎盤中MCSF、CRH的表達(dá)增加和HO-2表達(dá)降低可能與早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)病有關(guān)。

［關(guān)鍵詞］重度子癇前期；巨噬細(xì)胞集落刺激因子；促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素；血紅素氧化酶-2；胎盤

早發(fā)型重度子痢前期是指發(fā)生于孕34周以前的重度子癇前期［1］，多伴有胎兒生長(zhǎng)受限和很高的醫(yī)源性早產(chǎn)率，圍生兒死亡率高達(dá)13.3％［2］。早發(fā)型重度子癇前期因發(fā)病早，病程進(jìn)展快，常伴有較多并發(fā)癥合并癥，較早發(fā)生多臟器功能受損，嚴(yán)重威脅孕婦和胎兒安危，有較高的孕產(chǎn)婦和圍生兒病死率。因此，尋找早發(fā)型重度子癇前期的病因，如何從病因上著手控制并減少早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生是產(chǎn)科醫(yī)生面臨的難題，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

在患者知情同意的前提下，整群選取2013年9月—2014年8月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院住院部的孕婦73例，年齡22～37歲，孕周32～37周。共分為3組，其中早發(fā)型重度子癇前期患者25例；晚發(fā)型重度子癇前期23例；正常妊娠對(duì)照組（無高血壓及妊高癥家族史，因計(jì)劃生育、胎膜早破、早產(chǎn)等原因要求剖宮產(chǎn)的患者）25例，正常妊娠組與早發(fā)型及晚發(fā)型重度子癇前期組比較年齡、孕周均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1），該研究經(jīng)鄭大三附院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，經(jīng)孕婦口頭同意。重度子癇前期以發(fā)病孕周＜34周為早發(fā)型，≥34周為晚發(fā)型，選擇病例為農(nóng)村無業(yè)患者。重度子癇前期的診斷依據(jù)茍文麗、謝幸主編的《婦產(chǎn)科學(xué)》第八版［3］的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2研究方法

標(biāo)本采集：所有標(biāo)本均采集自剖宮產(chǎn)術(shù)中胎盤娩出后5 min內(nèi)的胎盤取母面中央絨毛組織1 cm×1 cm× 1 cm，中性福爾馬林溶液中固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋。

1.3M-CSF、CRH和HO-2的檢測(cè)

包埋后的蠟塊經(jīng)切片、常規(guī)HE染色后做免疫組化染色。試劑盒分別購(gòu)于中山公司、博士德公司及博奧森公司，測(cè)定其平均灰度值并應(yīng)用SPSS17.0分析軟件分析。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

2　結(jié)果

2.13組一般資料對(duì)比

正常妊娠組與子癇前期組，及早發(fā)型與晚發(fā)型重度子癇前期組比較年齡、終止妊娠孕周均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05（表1），且所有研究對(duì)象均為剖宮產(chǎn)分娩。

表1　正常對(duì)照組和早發(fā)型及晚發(fā)型重度子癇前期組年齡、終止妊娠孕周比較（±s）

表1　正常對(duì)照組和早發(fā)型及晚發(fā)型重度子癇前期組年齡、終止妊娠孕周比較（±s）

組別　年齡（歲）　分娩孕周（周）正常妊娠組（n=25）早發(fā)型組（n=25）晚發(fā)型組（n=23）F值P值28.71±7.20 29.25±4.16 29.64±4.27 0.098 0.906 34.96±2.17 34.25±1.93 35.23±1.06 1.084 0.347

2.23組研究對(duì)象胎盤組織中M-CSF的表達(dá)

M-CSF的陽性顆粒為棕黃色，主要表達(dá)于絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞、絨毛間質(zhì)細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞，早發(fā)型和晚發(fā)型重度子癇前期組M-CSF表達(dá)水平明顯高于正常妊娠組（P＜0.05），且早發(fā)型組高于晚發(fā)型組（P＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2　3組孕婦胎盤組織M-CSF表達(dá)水平的定量比較（±s）

表2　3組孕婦胎盤組織M-CSF表達(dá)水平的定量比較（±s）

注：△與正常妊娠組比較P＜0.05；*與早發(fā)型重度子癇前期組比較P＜0.05。

組別平均灰度正常妊娠組（n=25）早發(fā)型重度子癇前期組（n=25）晚發(fā)型重度子癇前期組（n=23）F值P值（87.62±10.83）* （100.60±14.05）△（96.28±12.27）△*14.314 0.001

2.33組孕婦胎盤組織中CRH的表達(dá)

CRH主要表達(dá)于胎盤絨毛合體滋養(yǎng)層細(xì)胞和胎盤小葉血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿和胞膜，早發(fā)型和晚發(fā)型重度子癇前期組CRH表達(dá)水平明顯高于正常妊娠組（P＜0.05），且早發(fā)型組高于晚發(fā)型組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

表3　3組孕婦胎盤組織CRH表達(dá)水平的定量比較（±s）

表3　3組孕婦胎盤組織CRH表達(dá)水平的定量比較（±s）

注：△與正常妊娠組比較P＜0.05；*與早發(fā)型重度子癇前期組比較P＜0.05。

組別平均灰度正常妊娠組（n=25）早發(fā)型重度子癇前期組（n=25）晚發(fā)型重度子癇前期組（n=23）F值P值（86.36±10.37）*（95.18±12.23）△（90.82±9.88）△*10.716 0.001

2.43組孕婦胎盤組織中HO-2的表達(dá)

HO-2主要表達(dá)于合體滋養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞以及終末絨毛毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿和胞膜，早發(fā)型和晚發(fā)型重度子癇前期組HO-2表達(dá)水平明顯低于正常妊娠組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；早發(fā)型組低于晚發(fā)型組，但二者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

表4　3組孕婦胎盤組織HO-2表達(dá)水平的定量比較（±s）

表4　3組孕婦胎盤組織HO-2表達(dá)水平的定量比較（±s）

注：△與正常妊娠組比較，P＜0.05。

例數(shù)平均灰度正常妊娠組（n=25）早發(fā)型重度子癇前期組（n=25）晚發(fā)型重度子癇前期組（n=23）F值P值86.74±8.25 （81.34±10.67）△（82.78±8.12）△4.501 0.013

3　討論

早發(fā)型重度子癇前期由于其發(fā)病早、孕周小、程度重，因此母兒圍生結(jié)局較晚發(fā)型差［4］。相對(duì)早發(fā)型重度子癇前期，整個(gè)晚發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生過程，看來更像是機(jī)體與疾病之間一個(gè)長(zhǎng)期耐受最終失衡的溫和過程。另外，近年還有研究認(rèn)為早發(fā)型重度子癇前期孕婦相對(duì)于正常孕婦胎盤組織中存在差異表達(dá)基因，并參與免疫反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng)等病理機(jī)制，與早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生密切相關(guān)［5］，并且還與遠(yuǎn)期心血管病發(fā)生相關(guān)［6］。研究認(rèn)為早發(fā)型及晚發(fā)型重度子癇前期的發(fā)病機(jī)理不同，相對(duì)于早發(fā)型的“胎盤淺著床”，晚發(fā)型是“母體因素”導(dǎo)致的疾病，孕婦有著共同的危險(xiǎn)因素如肥胖、糖尿病或慢性高血壓等，而胎盤是正常的［7］。

孕期蛻膜基質(zhì)細(xì)胞和滋養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生大量的MCSF，蛻膜中的其它細(xì)胞如CD16、CD56等細(xì)胞也產(chǎn)生M-CSF［6］。胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)M-CSF以及對(duì)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞的作用是妊娠免疫耐受建立與維持的重要機(jī)制。重度子癇前期患者的胎盤中細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞膨脹，并在短期內(nèi)大批轉(zhuǎn)化為合體滋養(yǎng)細(xì)胞，分泌大量的M-CSF；并且炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、激活而產(chǎn)生M-CSF，M-CSF又可通過其受體引起內(nèi)皮細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞釋放更多的M -CSF，導(dǎo)致重度子癇前期患者M(jìn)-CSF升高［8］。

CRH的擴(kuò)血管作用使胎兒的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)增加，有利于緩解胎兒的缺氧狀況，以保證胎兒營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)，這可能為胎兒缺氧的生理性保護(hù)作用。子癇前期時(shí)胎盤血管痙攣，胎盤缺血使胎兒缺血缺氧，胎兒的這一生理性保護(hù)作用促使CRH表達(dá)增［9］。Karteris等研究發(fā)現(xiàn)CRH可誘導(dǎo)內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）和環(huán)磷鳥苷（cGMP）的表達(dá)，通過激活NO/cGMP途徑而調(diào)節(jié)胎兒胎盤循環(huán)。

內(nèi)源性血紅素氧化酶（H0）是一種血紅素降解的起始酶和限速酶，HO-2在胎盤分布豐富，主要參與血管重鑄，維持胎盤血流動(dòng)力學(xué)的穩(wěn)定，維持胎盤氧化和抗氧化平衡狀態(tài)，保證正常的胎盤形成［10］。子癇前期患者胎盤組織中HO-2生成減少，胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)能力受到影響，引起胎盤著床淺，螺旋動(dòng)脈的重鑄受損，血小板黏附和聚集，造成胎盤缺血、缺氧；并且，HO-2的表達(dá)降低及缺氧又使HO-2的活性減弱，導(dǎo)致循環(huán)阻力升高并削弱了細(xì)胞的保護(hù)功能。Ekambaram等通過ELISA方法測(cè)定子癇前期患者臍血HO-2表達(dá)降低，與我們的研究結(jié)果一致［11］。

由于氧化應(yīng)激使子癇前期患者胎盤組織單核-巨噬細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞增生，分泌大量的M-CSF，而MCSF和M-CSFR結(jié)合后又促使單核細(xì)胞增殖和巨噬細(xì)胞分化，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。HO-2分解血紅素產(chǎn)生CO，有研究認(rèn)為低濃度的CO可以選擇性抑制LPS誘導(dǎo)的前炎癥因子TNF-α、IL-l8和巨噬細(xì)胞炎癥蛋白l8的表達(dá)，而TNF-α可誘導(dǎo)M-CSF的產(chǎn)生，子癇前期患者胎盤組織中HO-2表達(dá)降低，對(duì)TNF-α的抑制減弱，間接引起M-CSF升高。另外，HO-2表達(dá)減少，對(duì)自由基的清除能力降低，超氧陰離子增多，加劇了單核-巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的增生，也使M-CSF分泌增多，M-CSFR受體上調(diào)。

綜上所述，我們可以得出結(jié)論，M-CSF、HO-2和CRH通過胎盤血管重鑄障礙、血管內(nèi)皮損傷及氧化應(yīng)激等方面來參與子癇前期的發(fā)病過程，且三者相符相依相互影響，促進(jìn)疾病的進(jìn)一步發(fā)展，對(duì)于早發(fā)型重度子癇前期的預(yù)防我們也可以從以上幾點(diǎn)入手，爭(zhēng)取早日從病因上解決疾病的治療。

［參考文獻(xiàn)］

［1］Hall DR，Odendaal IJ，Steyn DW，et al.Expectant management of early onset，severe pre -oclampsia：maternal outcome［J］. BJOG，2000，107（10）：1252-1257，1258-1264.

［2］劉全，賀晶，董岳，等.早發(fā)性子癇前期的臨床特征和預(yù)后［J］.浙江大學(xué)學(xué)報(bào)醫(yī)學(xué)版，2005，34（6）：506-509.

［3］茍文麗、謝幸.婦產(chǎn)科學(xué)［M］.8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：64-73.

［4］楊孜，李蓉，石凌懿，等.早發(fā)型重度先兆子癇的臨床界定及保守治療探討［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2005（5）：17-20.

［5］宋英娜、楊劍秋、劉俊濤，等.早發(fā)型重度子癇前期孕婦胎盤組織中差異表達(dá)基因的研究［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2014 （49）：501-505.

［6］Brown MC，Best KE，Pearce MS，et al. Cardiovascular disease risk in women with pre-eclampsia：systematic review and meta-analysis［J］.Eur J Epidemiol，2013，28：1-19.

［7］Villa PM，H m l inen E，M ki A，et al. Vasoactive agents for the prediction of early-and late-onset preeclampsia in a high-risk cohort［J］.BMC Pregnancy and Childbirth，2013，13：110.

［8］Robertson SA. GM-CSF regulation of embryo development and pregnancy［J］. CytokineGrowth Factor Rev，2007，18：287-298.

［9］Xiong S，Sharkey AM，et al.Maternal uterine NK cell-activating receptor KIR2DS1 enhances placentation［J］. The Journal of Clinical Investigation，2013，123（10）：4264-4272.

［10］Levytska K，Kingdom J，Baczyk D，et al. Heme oxygenase-1 in placental development and pathology［J］.Placenta，2013，34：291-298.

［11］Ekambaram P，Jayachandran T，Dhakshinamoorthy，L. Differential expression of HSP90α and heme oxygenase in cord blood RBC during preeclampsia［J］.Toxicology mechanisms and methods，2013，23（1/9）：113-119.

Research on M-CSF，CRH and HO-2 Expressions of Placenta Tissues in Patients with Early Onset Severe Preeclampsia

LUN Wei-wei，ZHANG Xi，ZHU Jian-po，CHENG Guo-mei
Department of Obstetrics and Gynecology，The Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou，Henan Province，450052 China

［Abstract］Objective To research the macrophage colony stimulating factor，corticotropin releasing hormone and heme oxygenase-2 expressions of placenta tissues in patients with early onset severe preeclampsia and discuss their effects in the early onset severe preeclampsia pathogenesis. Methods The delivery women whose ages were between 22 and 37 and gestational weeks were between 32 and 37 hospitalized in our hospital from September 2013 to August 2014 were selected，among them，25 cases were with early onset severe preeclampsia，23 cases were with late onset severe preeclampsia，25 cases with normal pregnancy were selected as the control group，and the M-CSF，CRH and HO-2 expressions were researched by the immunohistochemical method. Results（1）The differences in the age and terminated gestational week between the three groups had no statistical significance，P＞0.05（2）The M-CSF expression level obviously increased in the early and late onset severe preeclampsia groups compared with that in the control group；the M-CSF expression level in the early onset group was obviously higher than that in the late onset group.（3）The CRH expression level in the early and late onset groups obviously increased compared with that in the control group，the CRH expression level in the early onset group was obviously higher than that in the late onset group.（4）The HO-2 expression level in the early and late onset groups obviously decreased compared with that in the control group；the HO-2 expression level in the early onset group was lower than that in the late onset group，and the difference had no statistical significance，P＞0.05. Conclusion The increase of MCSF and CRH expressions and decrease of HO-2 expression may be correlated with the onset of early onset severe preeclampsia.

［Key words］Severe preeclampsia；Macrophage colony stimulating factor；Corticotropin releasing hormone；Heme oxygenase-2；Placenta

［中圖分類號(hào)］R5

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1674-0742（2016）05（b）-0081-03

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.14.081

［作者簡(jiǎn)介］倫巍巍（1981.9-），女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：早發(fā)型重度子癇前期等相關(guān)婦產(chǎn)科臨床治療。

收稿日期：（2016-02-19）