吉非替尼聯(lián)合自體DC/CIK細(xì)胞治療對晚期非小細(xì)胞肺癌臨床研究

琚芳芳，李寶平，張雷，薛利利山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腫瘤生物治療科，山西太原　030001

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吉非替尼聯(lián)合自體DC/CIK細(xì)胞治療對晚期非小細(xì)胞肺癌臨床研究

琚芳芳，李寶平，張雷，薛利利
山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腫瘤生物治療科，山西太原030001

［摘要］目的探討靶向治療吉非替尼聯(lián)合自體樹突狀細(xì)胞（DC）/細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）細(xì)胞回輸治療晚期非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者的TGF-β1、免疫功能、安全性及療效的影響。方法隨機(jī)選取2013年7月—2015年1月于該院接受治療的100例晚期非小細(xì)胞肺癌患者，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為治療組和對照組各50例。對照組單純采用口服吉非替尼250 mg/d靶向治療，治療組在此基礎(chǔ)上給予至少3次DC/CIK細(xì)胞輸注。隨訪時間為12個月，對比觀察兩組以下指標(biāo)：血清TGF-β1、外周血淋巴細(xì)胞表型、不良反應(yīng)、總生存期（OS）和中位生存期（mOS）。結(jié)果血清TGF-β1：兩組治療后血清TGF-β1水平均較治療前下降（P＜0.05），治療組下降較對照組明顯（P＜0.05）。外周血淋巴細(xì)胞表型：經(jīng)過治療，治療組外周血CD 3+、CD 4+、CD 8+和CD 4+/ CD 8+對對照組相較有明顯差異，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。不良反應(yīng)：治療組接受DC和CIK自體細(xì)胞輸注后出現(xiàn)發(fā)熱7例，經(jīng)相應(yīng)處理后緩解。兩組皮疹和腹瀉發(fā)生率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。治療組OS為9.1～18.1（12.1±3.4）個月，mOS為11.9個月，對照組分別為7.4～11.5（9.6±1.2）和9.5個月，兩組相較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論在吉非替尼靶向治療基礎(chǔ)上聯(lián)合自體DC/CIK細(xì)胞回輸治療晚期NSCLC，可以減輕不良反應(yīng)，改善免疫功能，延長患者生存期，并具有較好的安全性。

［關(guān)鍵詞］非小細(xì)胞肺癌；吉非替尼；樹突狀細(xì)胞；細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞

肺癌已成為我國惡性腫瘤發(fā)病率及死亡率均排第1位的惡性腫瘤［1］，其中非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者占所有肺癌患者的80％，約有80％的非小細(xì)胞肺癌患者在確診時已為晚期，失去手術(shù)治療機(jī)會，且對化療耐受性較差。目前靶向治療已認(rèn)為是治療晚期NSCLC的主流方案，療效廣受好評。吉非替尼作為選擇性的表皮生長因子受體（EGFR）酪氨酸激酶抑制劑，廣泛適用于經(jīng)化療后或局部晚期或轉(zhuǎn)移性NSCLC。據(jù)相關(guān)報道，吉非替尼對于晚期NSCLC有效緩解率接近20％，疾病控制率（DCR）為42％～54％。另外近年來，基于DC（樹突狀細(xì)胞）和CIK（細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞）的細(xì)胞免疫療法開始應(yīng)用于NSCLC治療，其效果日益受到肯定?；诖?，本文從聯(lián)合用藥角度著眼，隨機(jī)選取2013年7月—2015 年1月收治的100例晚期非小細(xì)胞肺癌患者作為研究對象，探討常規(guī)化療藥物吉非替尼聯(lián)合DC、CIK對NSCLC臨床效果、免疫功能及安全性的影響，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

隨機(jī)選取于山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腫瘤生物治療科就診的100例初治的晚期非小細(xì)胞肺癌患者，均經(jīng)電子支氣管鏡下活檢或CT引導(dǎo)下穿刺活檢明確診斷。其中8例接受基因檢測，納入標(biāo)準(zhǔn)：①KPS評分＞60分；②可預(yù)計生存期≥6個月；③有可測量的病灶存在；④肝腎功能、血常規(guī)檢查正常；⑤全部患者及家屬知情同意，且經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)通過，排除有化療禁忌癥、嚴(yán)重心、腦疾病及精神疾病患者等。隨機(jī)數(shù)字對照法分為治療組和對照組各50例，其中治療組男性26例，女性24例；年齡62～85歲，平均（68.4±3.4）歲；病理類型：鱗癌21例，腺癌19例，其他10例。TNM分期：5例患者為III B期患者，其余35例患者均為IV期患者；對照組男性25例，女性25例；年齡63～86歲，平均（67.4±3.5）歲；病理類型：鱗癌21例，腺癌20例，其他9例。TNM分期：5例患者為III B期患者，其余34例患者均為IV期患者。

1.2治療方法

2組治療前均給予血常規(guī)、肝腎功能及合并癥等進(jìn)行檢查，對相應(yīng)的合并癥進(jìn)行針對性干預(yù)治療。2組均給予吉非替尼（批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字：J20100014，規(guī)格：0.25 g×10片），口服治療，250 mg /次，1次/d。治療期間密切觀察病情變化。治療組在此基礎(chǔ)上配合細(xì)胞免疫療法鞏固治療，包括DC（樹突狀細(xì)胞）和CIK（細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞），具體操作是先采集患者外周單核細(xì)胞，分離后置于培養(yǎng)瓶，適量加入細(xì)胞因子刺激液活化增殖，經(jīng)1～2周的培養(yǎng)后回輸。28 d為1個療程。DC細(xì)胞注射液中DC細(xì)胞數(shù)＞2.0×107/mL，于采血后第8、9、10、11、12、13、14、15 d（機(jī)采細(xì)胞為第1天），在淋巴結(jié)富集區(qū)10 cm范圍內(nèi)的腋窩或腹股溝皮內(nèi)注射。CIK細(xì)胞數(shù)＞1×109/mL，于采血后第12、13、14、15天通過肘靜脈回輸，60滴/min。

1.3評價指標(biāo)

治療組治療3個周期就，隨訪比較治療前后血清TGF-β1、不良反應(yīng)、總生存期及中位生存期（mOS）。其中總生存期（OS）指病情確診至死亡或隨訪結(jié)束期。

1.4統(tǒng)計方法

該研究采集的數(shù)據(jù)一律納入SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行整理和分析，涉及定量數(shù)據(jù)的采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間對比行t檢驗(yàn)；計數(shù)資料采取部分比表示，進(jìn)行Χ2檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1兩組治療前后血清TGF-β1水平

兩組治療后血清TGF-β1水平均較治療前下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），治療組下降更明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1　兩組治療前后血清TGF-β1比較［μg/L，（±s）］

表1　兩組治療前后血清TGF-β1比較［μg/L，（±s）］

注：與同組治療前相比，*P＜0.05；與對照組同期相比，#P＜0.05。

組別TGF-β1治療組（n=50）治療前治療后對照組（n=50）治療前治療后87.08±1.98 （28.98±2.05）*#89.23±4.02 （65.43±1.67）*

2.2兩組治療前后外周血CD 3+、CD 4+、CD 8+和CD 4+/CD 8+

對照組治療后外周血CD 3+、CD4+、CD 8+和CD 4+/ CD 8+均較治療前下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），治療組后上述指標(biāo)無明顯變化；治療組治療后上述指標(biāo)均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2　兩組治療前后外周血CD 3+、CD 4+、CD 8+和CD 4+/ CD 8+比較［％，（±s）］

表2　兩組治療前后外周血CD 3+、CD 4+、CD 8+和CD 4+/ CD 8+比較［％，（±s）］

注：與同組治療前相比，*P＜0.05；與對照組同期相比，#P＜0.05。

組別CD3+CD4+CD8+　CD4+/CD8+治療組（n=50）治療前治療后對照組（n=50）治療前治療后55.34±2.89 （57.61±3.91）#34.29±5.87 （29.26±5.43）#27.73±3.87 （23.87±4.21）#1.65±0.78 （2.34±0.52）#56.23±6.74 （34.68±3.15）*34.72±6.34 （26.65±1.32）*25.67±3.98 21.67±2.75 2.19±0.83 （1.59±0.34）*

2.3不良反應(yīng)

治療組出現(xiàn)皮疹11例（22％）、腹瀉4例（8％），對照組皮疹20例（40％）、腹瀉8例（16％），兩組皮疹和腹瀉發(fā)生率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。治療組接受DC皮內(nèi)注射時有5例出現(xiàn)低熱，體溫可自行降至正常；在自體DC+CIK回輸后有7例出現(xiàn)發(fā)熱，其中超過38℃有3例，給予地塞米松5 mg對癥處理后癥狀緩解。

2.4生存期

兩組全部完成治療及隨訪，截至末次隨訪2013年6月1日，兩組未出現(xiàn)因DC /CIK細(xì)胞回輸及服用吉非替尼治療死亡病例和嚴(yán)重并發(fā)癥，治療組OS為9.1～18.1（12.1±3.4）個月，mOS為11.9個月，對照組分別為7.4～11.5（9.6±1.2）和9.5個月。

3　討論

腫瘤治療，在數(shù)十年間經(jīng)歷了手術(shù)、放療、化療、靶向治療，到免疫治療這幾個發(fā)展階段。目前研究證實(shí)，約50％的晚期非小細(xì)胞肺癌患者在初診時年齡已在65歲以上［2］，老年患者在化療、放療過程中很難從中獲益，且不良反應(yīng)多。靶向治療中吉非替尼是一種表皮生長因子受體的小分子酪氨酸激酶抑制劑藥物（epidermal growth factor receptor- tyrosine kinase inhibitor，EGFRTKI），臨床上可單獨(dú)運(yùn)用于經(jīng)化療后病情繼續(xù)惡化的晚期非小細(xì)胞肺癌患者。吉非替尼還具有給藥方便、肝臟代謝、不經(jīng)過腎臟代謝、不良反應(yīng)輕微等優(yōu)勢，但是也具有易產(chǎn)生耐藥、不能延長生存期等不足［3-4］。腫瘤免疫治療可分為細(xì)胞治療和PD-1等免疫抑制劑等方法，細(xì)胞治療運(yùn)用最為成熟的就是DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞。DC細(xì)胞是功能強(qiáng)大的抗原呈遞細(xì)胞，在腫瘤免疫的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)中起到關(guān)鍵作用［5］。DC結(jié)合T細(xì)胞可大量分泌IL-12、IL-18激活T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)CTL應(yīng)答，從而清除腫瘤，增強(qiáng)NK細(xì)胞毒作用。另外，DC還有助于加速CD8+T細(xì)胞活化，間接分泌細(xì)胞因子或直接殺傷，增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答。而CIK細(xì)胞是一種高效活性細(xì)胞，是惡性腫瘤過繼免疫治療的重要手段之一。細(xì)胞治療可以調(diào)控宿主和腫瘤之間的相互作用，改善腫瘤微環(huán)境，清除腫瘤微小病灶，從而達(dá)到提高患者生存治療，延長生存期［6］。此外研究發(fā)現(xiàn)［7-8］，CIK細(xì)胞對逆轉(zhuǎn)非替尼耐藥也有一定的效果。該研究顯示，觀察組由治療前的（87.08±1.98）μg/L，明顯降至治療后的（28.98± 2.05）μg/L，接近正常參考值，而對照組改善幅度明顯要小于觀察組（P＜0.05），說明吉非替尼聯(lián)合DC /CIK對抑制腫瘤活性的效果強(qiáng)于單純吉非替尼用藥。從該文另外一項數(shù)據(jù)來看，治療組治療前后CD 3+、CD 4+、CD 8+和CD 4+/CD 8+未出現(xiàn)明顯的變化流式細(xì)胞儀檢測治療后T淋巴細(xì)胞亞群水平低于正常人群，與文獻(xiàn)報道一致，說明吉非替尼聯(lián)合DC /CIK并未引起免疫反應(yīng)，雖然CD 8+前后有較大的下降，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明聯(lián)合療法對促進(jìn)抗腫瘤免疫恢復(fù)有積極的效果。隨訪發(fā)現(xiàn)兩組治療后均未出現(xiàn)嚴(yán)重的不良后果，不過治療組不良反應(yīng)相比少于對照組，且中位生存期較對照組有所延長，以上說明細(xì)胞免疫療法聯(lián)合靶向治療的思路對于晚期NSCLC在延長生存期有著積極的效果，值得肯定。

綜上，對于晚期NSCLC患者，可使用靶向藥物吉非替尼聯(lián)合腫瘤細(xì)胞治療，不僅改善機(jī)體免疫功能，還起到延長患者生存期的作用，具有很好的安全性及耐受性。

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Clinical Research on Gefitinib Combined with Autologous DC/CIK Cells in Treatment of Advanced Non-small Cell Lung Cancer

JU Fang-fang，LI Bao-ping，ZHANG lei，XUE Li-li
Department of Tumor Biotherapy，The Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan，Shanxi Province，030001 China

［Abstract］Objective To discuss the effect of molecular targeted therapy of gefitinib combined with autologous dendritic cells /cytokine induced kill cell adoptive therapy for patients with advanced non-small cell lung cancer on their TGF-β1，immunologic function and safety. Methods 100 cases of patients with advanced non-small cell lung cancer treated in our hospital from July 2013 to January 2015 were selected and randomly divided into two groups with 50 cases in each，the control group received molecular targeted therapy of oral administration of 250 mg/d gefitinib，the treatment group were given DC/CIK cell infusion at least 3 times on this basis，and the follow-up time was 12 months，and the serum TGF-β1，peripheral blood lymphocyte phenotype，adverse reaction，overall survival and median survival time of the two groups were compared and observed. Results The serum TGF-β1levels after treatment of the two groups decreased compared with those before treatment（P＜0.05），and the decrease of the treatment group was more obvious than that of the control group（P＜0.05），after treatment，there were obvious differences in the peripheral blood CD 3+，CD 4+，CD 8+ and CD 4+/ CD 8+ between the two groups with statistical significance（P＜0.05）. Conclusion After autologous DC/CIK cell infusion，the treatment group relived after the corresponding treatment，and the differences in the incidence rates of rash and diarrhea between the two groups had statistical significance by comparison（P＜0.05），and the differences in the OS and mOS between the treatment group and the control group had statistical significance［9.1-18.1（12.1±3.4），11.9 months，vs 7.4-11.5（9.6±1.2），9.5 months］（P＜0.05）. Molecular targeted therapy of gefitinib combined with autologous DC/CIK cell infusion in treatment of advanced non-small cell lung cancer can relieve the adverse reactions，improve the immunologic function，prolong the survival time of patients and has good safety.

［Key words］Non-small cell lung cancer；Gefitinib；Dendritic cell；Cytokine induced killer cell

［中圖分類號］R5

［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］A

［文章編號］1674-0742（2016）05（b）-0061-03

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.14.061

［作者簡介］琚芳芳（1986.2-），女，山西臨汾人，碩士研究生，研究方向：惡性腫瘤的綜合生物治療。

收稿日期：（2016-02-19）