解毒通絡(luò)合劑對代謝綜合征合并AMI大鼠BNP、NPY、SP含量的影響

項泳鋒，魏陵博，張月輝，戎冬梅，初　楠

解毒通絡(luò)合劑對代謝綜合征合并AMI大鼠BNP、NPY、SP含量的影響

項泳鋒1，魏陵博2，張月輝2，戎冬梅2，初楠2

1.山東中醫(yī)藥大學(xué)(濟南 250355)；2.山東省青島市海慈醫(yī)療集團

摘要：目的觀察解毒通絡(luò)合劑對代謝綜合征(MS)合并急性心肌梗死(AMI)大鼠腦鈉肽(BNP)、神經(jīng)肽Y(NPY)、P物質(zhì)(SP)含量的影響。方法將大鼠隨機為空白對照組、模型對照組、琥珀酸美托洛爾緩釋片(倍他樂克)組及解毒通絡(luò)合劑低、高劑量組，除空白對照組外，其他4組制作代謝綜合征模型，造模成功后開始灌胃，時間為4周，最后1次灌胃后予垂體后葉素注射造成AMI模型，用ELISA雙抗體夾心法檢測血清BNP、NPY、SP水平。結(jié)果伴MS大鼠心肌梗死后BNP明顯升高，高劑量解毒通絡(luò)合劑可以降低BNP含量；解毒通絡(luò)合劑低、高劑量組和倍他樂克組可以降低NPY的含量(P<0.01)，解毒通絡(luò)合劑高劑量組優(yōu)于倍他樂克組(P<0.01)；解毒通絡(luò)合劑高劑量組、倍他樂克組與模型對照組相比，SP含量顯著提高(P<0.01)。結(jié)論高劑量解毒通絡(luò)合劑能夠改善伴MS的AMI大鼠心力衰竭癥狀，降低其交感神經(jīng)活性。

關(guān)鍵詞：代謝綜合征；急性心肌梗死；解毒通絡(luò)合劑；腦鈉肽；神經(jīng)肽Y；P物質(zhì)

研究發(fā)現(xiàn)冠心病(CHD)熱毒證臨床表現(xiàn)類似于CHD合并代謝綜合征(MS)，而交感神經(jīng)的過度激活則被證明與高血壓、腹型肥胖、胰島素抵抗紀2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。腦鈉肽(BNP)為心臟分泌的短肽激素，在心力衰竭時BNP分泌增多，具有利鈉、利尿、擴血管降壓、抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)和交感神經(jīng)系統(tǒng)的作用；神經(jīng)肽Y(NPY)是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，具有調(diào)節(jié)血管的收縮,增強血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、內(nèi)皮素、NE等縮血管物質(zhì)而抑制舒血管物質(zhì)的作用；而且發(fā)生焦慮行為時，會反射性促使NPY mRNA表達，抑制交感神經(jīng)的過度興奮；P物質(zhì)(SP)是一種能被免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)共同識別的信號物質(zhì)，具有傳遞信息，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)等作用。本實驗以解毒通絡(luò)合劑灌胃伴代謝綜合征(MS)的大鼠，觀察解毒通絡(luò)合劑對代謝綜合征并急性心肌梗死(AMI)大鼠BNP、NPY、SP含量的影響

1材料與方法

1.1實驗動物選用體重200 g±20 g的Wistar大鼠66只，12周齡，均為雄性，由青島市藥物檢驗研究所動物中心提供，飼養(yǎng)于青島市藥物檢驗研究所動物房，金屬鼠籠，分籠飼養(yǎng)，每籠 5只，保持室內(nèi)環(huán)境恒溫20 ℃±2 ℃，濕度在50%～60%，通風(fēng)良好，標(biāo)準飼料，自由進食飲水。

1.2實驗藥物解毒通絡(luò)合劑：黃連12 g，酒大黃3 g，連翹15 g，野葛根30 g，水蛭6 g，地龍12 g，鉤藤15g，總計生藥93 g，為1 d成人使用劑量，由青島市海慈醫(yī)療集團藥劑科中藥制劑室制成生藥濃度為2.4 g/mL的中藥合劑，質(zhì)量標(biāo)準按照 2010 版《中國藥典》制定。琥珀酸美托洛爾緩釋片(倍他樂克，每片47.5 mg)，阿斯利康制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準字號H32025391。

1.3主要試劑及儀器血清BNP、NPY、SP試劑盒購自上海鑫樂生物科技有限公司；鏈脲佐菌素(STZ)、枸櫞酸鈉緩沖液購自青島捷世康生物科技有限公司；華法林鈉片(每片2.5 mg)，山東齊魯制藥有限公司生產(chǎn)(國藥準字號：H37021314)；維生素KM1注射液，山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(國藥準字號：H37021988)；25%烏拉坦，青島市藥物檢驗研究所提供。

BP-6動物無創(chuàng)血壓測試儀，成都泰盟科技有限公司；H-2000R離心機，江東儀器公司；xMark酶標(biāo)儀，伯樂科技生產(chǎn)；GNP-9050型隔水式恒溫培養(yǎng)箱，上海市三發(fā)科技有限公司；心電圖機，由美國Burdick公司生產(chǎn)。

1.4方法將66只Wistar大鼠常規(guī)喂養(yǎng) 1周，隨機挑選6只為空白對照組，余60只復(fù)制代謝綜合征大鼠模型。

1.4.1高血壓應(yīng)用華法林和維生素K1誘導(dǎo)動脈中層鈣化法[1]，6周后判定造模結(jié)果，收縮壓升高并持續(xù)18.67 kPa(140 mmHg)為造模成功。

1.4.2高血脂、高血糖采用高脂飼料喂養(yǎng)加注射鏈脲佐菌素法[2]制備，在高脂飼料喂養(yǎng)4周后禁食(不禁水)12 h，一次性腹腔注射STZ 30 mg/kg(用pH4.4的0.1 mol/L無菌枸櫞酸緩沖液配成0.25%濃度)，注射72 h后大鼠禁食(不禁水)12 h，斷尾取血，用羅氏血糖儀測定大鼠空腹血糖≥11.1 mmol/L[3-4]為造模成功。

1.4.3分組與灌胃將造模后的大鼠隨機分為4組，分別為模型對照組、倍他樂克組及解毒通絡(luò)合劑高、低劑量組，每組15只。倍他樂克組：給予倍他樂克4.07 mg/(kg·d)灌胃；解毒通絡(luò)合劑高劑量組給予解毒通絡(luò)合劑24 g生藥/(kg·d)灌胃；解毒通絡(luò)合劑低劑量組給予解毒通絡(luò)合劑16 g生藥/(kg·d)灌胃。正常對照組和模型對照組給予蒸餾水10 mL/(kg·d)灌胃，時間4周。

1.4.4標(biāo)本采集與檢測最后1次灌胃后，禁食 12 h，以25%烏拉坦7 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠，固定，連接心電圖機，進行正常心電圖檢測，將垂體后葉素注射液用生理鹽水配成2 U/mL，按照8 U/kg劑量經(jīng)舌下靜脈于10 s內(nèi)推完，觀察心電圖變化，心電圖出現(xiàn)Q波、ST段抬高、T波高聳或倒置證實心肌梗死形成。腹部正中切口，腹主動脈取血約5 mL，4 000 r/min離心10 min，將大鼠血清置于-70 ℃低溫下冷凍備用，采用ELISA試劑盒雙抗體夾心法檢測大鼠血清BNP、NPY、SP含量 。

2結(jié)果

2.1大鼠在灌胃后出現(xiàn)死亡的情況采血前模型對照組和解毒通絡(luò)合劑低劑量組各死亡8只，倍他樂克組死亡9只，中藥高劑量組死亡5只。

2.2實驗大鼠經(jīng)干預(yù)后BNP、NPY、SP含量的比較與空白對照組比較，模型對照組BNP明顯升高(P<0.01)；解毒通絡(luò)合劑高劑量組BNP含量與模型對照組比較顯著降低(P<0.01)，而倍他樂克組、解毒通絡(luò)合劑低劑量組與模型對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；解毒通絡(luò)合劑高劑量組、解毒通絡(luò)合劑低劑量組和倍他樂克組NPY含量與模型對照組比較顯著降低(P<0.01)，解毒通絡(luò)合劑高劑量組NPY含量與倍他樂克組、解毒通絡(luò)合劑低劑量組比較顯著降低(P<0.01)；與空白對照組比較，模型對照組SP含量降低(P<0.01)，解毒通絡(luò)合劑高劑量組、倍他樂克組SP含量與模型對照組比較顯著提高(P<0.01)，解毒通絡(luò)合劑高劑量組SP含量與倍他樂克組、解毒通絡(luò)合劑低劑量組比較顯著提高(P<0.05)。詳見表1。

表1　各組大鼠BNP、NPY、SP含量比較(±s)

3討論

研究發(fā)現(xiàn)冠心病(CHD)熱毒證臨床表現(xiàn)類似于CHD合并MS，還提示熱毒證的發(fā)生與交感神經(jīng)興奮有關(guān)[5]。MS是以中心性肥胖為基礎(chǔ)，包括血脂紊亂、高血壓、糖尿病或糖耐量異常及胰島素抵抗為主要臨床表現(xiàn)的癥候群，可直接促進動脈粥樣硬化性心血管疾病和 2 型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展[6]。研究證實，MS的大多組分，例如高血壓、腹型肥胖、胰島素抵抗、2型糖尿病都與交感神經(jīng)系統(tǒng)的過度激活密切相關(guān)[7]。

研究表明急性冠脈綜合征多伴有腦鈉尿肽合成量及釋放量顯著增多，從而導(dǎo)致病人血漿中腦鈉尿肽及去甲腎上腺素含量增加[8]。本研究也發(fā)現(xiàn)心肌梗死后動物BNP明顯升高，高劑量解毒通絡(luò)合劑可以降低BNP的含量，而倍他樂克緩釋片無此作用，提示解毒通絡(luò)合劑在減輕心肌梗死動物心力衰竭方面要優(yōu)于倍他樂克。

NPY 是由36個氨基酸殘基組成的神經(jīng)活性肽，交感神經(jīng)興奮可使其釋放增加，與情志因素密切相關(guān)[9]。中樞NPY為抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，外周的NPY則具有正向刺激作用，它和糖皮質(zhì)激素以及兒茶酚胺共同增強應(yīng)激反應(yīng)。心臟的NPY存在于竇房結(jié)等處，與交感神經(jīng)興奮性增高所致的心律失常相關(guān)，本研究表明中藥組能夠降低外周血清NPY的含量，高劑量組優(yōu)于倍他樂克組，說明解毒通絡(luò)合劑在降低動物交感神經(jīng)活性方面優(yōu)于倍他樂克。

P物質(zhì)是神經(jīng)激肽中含量最豐富的一種腦腸肽，廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸系統(tǒng)，具有痛覺傳遞、參與炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)、影響生殖內(nèi)分泌功能等作用[10]。研究表明[11]，動物心力衰竭或心肌受損時SP的含量會下降，與本研究結(jié)果相同，解毒通絡(luò)合劑高劑量組可以提高心肌梗死動物SP的含量，療效與倍他樂克組相同。

解毒通絡(luò)合劑以黃連、水蛭為君藥，《本草綱目》謂黃連去心竅惡血，水蛭破血逐瘀通經(jīng)。連翹、野葛根、鉤藤、地龍共為臣藥，冰片、熟大黃為佐使，全方咸以入血，以苦寒折之，辛寒散之，留者攻之，可以較好地解除熱壅血瘀證。藥理研究證實黃連、野葛根有類似抗β腎上腺素受體阻滯和鈣拮抗作用，并有較好的降糖作用，治療不穩(wěn)定型心絞痛有較好的療效，并可改善左室舒張功能異常[12]。本研究表明：對于伴MS的心肌梗死動物解毒通絡(luò)合劑可以更好地改善心力衰竭癥狀，降低交感神經(jīng)興奮性。

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(本文編輯郭懷印)

基金項目：山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計劃項目(No.2013ZDZK-104)

通訊作者：魏陵博，E-mail：w83776028@126.com

中圖分類號：R542.2R289.5

文獻標(biāo)識碼：A

doi：10．3969/j．issn．1672-1349．2016．02．007

文章編號：1672-1349(2016)02-0131-03

(收稿日期：2015-09-10)