不同加工方法對(duì)杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影響

吳兵，龍飛，衛(wèi)瑩芳，許萍，周元靂

·品種品質(zhì)·

不同加工方法對(duì)杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影響

吳兵，龍飛，衛(wèi)瑩芳，許萍，周元靂

目的：考察不同加工方法對(duì)杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影響，為優(yōu)化杜仲產(chǎn)地加工方法提供科學(xué)依據(jù)。方法：在產(chǎn)地將三批新鮮藥材分別進(jìn)行“直接曬干”、“發(fā)汗—曬干”、“ 微煮—發(fā)汗—曬干”、“微煮—切制—發(fā)汗—曬干”實(shí)驗(yàn)。并采用高效液相色譜測(cè)定不同加工方法杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量變化。結(jié)果：不同加工方法樣品松脂醇二葡萄糖苷含量的高低：“微煮—發(fā)汗—曬干”＞“發(fā)汗—曬干”＞“微煮—切制—發(fā)汗—曬干”＞“直接曬干”。結(jié)論：“發(fā)汗”在杜仲在產(chǎn)地加工中是必要的；微煮后再“發(fā)汗”的杜仲質(zhì)量較佳。

杜仲；產(chǎn)地加工；發(fā)新汗；微煮；松脂醇二葡萄糖苷；高效液相色譜

杜仲是杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥樹皮，具有補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，安胎的功效[1]。歷版藥典均規(guī)定采收后的杜仲皮應(yīng)“刮去粗皮，堆置發(fā)汗至內(nèi)皮呈紫褐色，曬干”。在目前栽培杜仲的10余省[2]中，不少產(chǎn)地采用直接曬干的加工方法。同時(shí)，傳統(tǒng)產(chǎn)地加工中，杜仲在“發(fā)汗”前尚有“微煮”步驟。另?yè)?jù)報(bào)道，一種新方法[3]已被運(yùn)用于同為皮類藥材的厚樸加工中，該方法直接將厚樸鮮皮進(jìn)行蒸煮、切制、發(fā)汗、干燥加工。這種方法是否可以運(yùn)用于杜仲藥材加工中？針對(duì)以上問題，本文針對(duì)產(chǎn)地不同加工方法杜仲中有效成分松脂醇二葡萄糖苷進(jìn)行比較研究，為確定杜仲適宜的產(chǎn)地加工方法提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

Agilent 1200高效液相色譜儀 (SPDM20AT檢測(cè)器，LC-Solution 工作站)；德國(guó)Sartorius公司BP121S電子分析天平(萬(wàn)分之一)；德國(guó)Sartorius公司BP211D電子分析天平(十萬(wàn)分之一)；松脂醇二葡萄糖苷(PDG)對(duì)照品（購(gòu)自成都貝斯特試劑有限公司 批號(hào)：S-047-110830，供含量測(cè)定用）；色譜甲醇（德國(guó)默克公司）；水為重蒸餾水；其余試劑均為分析純。

杜仲樣品采集于四川省都江堰市虹口鄉(xiāng)，三批胸徑分別為8cm、10cm、18cm，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室副教授龍飛鑒定為杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥樹皮。

2 方法與結(jié)果

2.1 產(chǎn)地加工

將三批樣品各分取2份，刮去粗皮，按照下述方法加工處理后備用。

2.1.1 直接曬干樣品 將鮮杜仲皮攤開，直接曬干。

2.1.2 不同發(fā)汗樣品 發(fā)汗—曬干 將鮮杜仲皮內(nèi)面相對(duì)，覆上棕墊，進(jìn)行“發(fā)汗”至內(nèi)皮呈紫褐色，曬干。

微煮—發(fā)汗—曬干 將鮮杜仲皮于沸水中微煮5min，晾干，余同“發(fā)汗—曬干”法。

微煮—切制—發(fā)汗—曬干 將鮮杜仲皮于沸水中微煮5min，晾干，將皮切制成長(zhǎng)約3cm，寬約2cm的小方塊，裝入密封袋，放入木箱中“發(fā)汗”至內(nèi)皮呈紫褐色，曬干。

2.2 水分含量測(cè)定

按《中國(guó)藥典》2015版一部附錄Ⅸ H第一法測(cè)定經(jīng)不同加工方法的三批樣品水分含量, 各樣品平行測(cè)定2 次。結(jié)果見表1。

表1 杜仲不同加工樣品水分含量(n=2)

結(jié)果所示，各樣品的水分含量在7.62～11.18%之間，均符合《中國(guó)藥典》2010版一部杜仲項(xiàng)下規(guī)定的杜仲的水分不得超過13.0%。

2.3 PDG含量測(cè)定

《中國(guó)藥典》2005年版和2010年版均采用索氏提取法制備供試品，該法操作較繁瑣費(fèi)時(shí)。本文以藥典杜仲項(xiàng)下含測(cè)方法為基礎(chǔ)，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[4～6]，并通過方法學(xué)研究，對(duì)提取方法進(jìn)行改進(jìn)。

2.3.1 色譜條件 色譜柱為Amethyst C18柱(250mm ×4.6mm，5μm)，以甲醇-水（25：75）為流動(dòng)相，流速1.0ml/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)277nm，進(jìn)樣10μl。色譜圖見圖1。

圖1 對(duì)照品（A）和供試品（B）HPLC圖

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 取PDG對(duì)照品適量約5mg，精密稱定，加甲醇制成含PDG 0.5mg/mL的溶液，搖勻，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取不同加工方法的三批樣品（各樣品分取兩份）約3g，剪成碎片，揉成絮狀，各取約2g,精密稱定，加入三氯甲烷適量20ml，超聲提取30分鐘，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，再加甲醇20ml超聲45分鐘，過濾，甲醇洗滌3次，將濾液于50℃水浴條件下?lián)]甲醇至適量，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得供試品溶液[4]。

2.3.4 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液2、4、6、8、10μl，按“2.3.1”色譜條件，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以Y為峰面積，X為進(jìn)樣量（μg），得到PDG的線性回歸方程為：Y=454.1X-391.46，相關(guān)系數(shù)r= 0.999 0。結(jié)果表明，PDG在1～5μg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 含量測(cè)定 按上述色譜條件，精密吸取混合對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算樣品中PDG的量。結(jié)果見表2。

表2 杜仲不同加工樣品PDG質(zhì)量分?jǐn)?shù)(n=2)

結(jié)果表明，樣品中PDG含量在0.16%～0.22%，均符合《中國(guó)藥典》杜仲含量測(cè)定項(xiàng)下“本品含松脂醇二葡萄糖苷(C32H42O16)不得少于0.10%”的規(guī)定；樣品中PDG的高低分別為：“微煮—發(fā)汗—曬干” ＞“發(fā)汗—曬干”＞“微煮—切制—發(fā)汗—曬干”＞“直接曬干”。

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，直接曬干的樣品中PDG含量較低，而發(fā)汗后樣品中PDG含量增加，說明杜仲產(chǎn)地加工中進(jìn)行“發(fā)汗”是必要的；經(jīng)微煮后發(fā)汗樣品PDG含量較未微煮發(fā)汗樣品增加，可能此步驟抑制了分解PDG的某些酶類。

3.2 本文參考厚樸藥材的新加工方法[3]，將鮮杜仲皮進(jìn)行 “微煮—切制—發(fā)汗—曬干”加工實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，PDG含量較“微煮—發(fā)汗—曬干”及“發(fā)汗—曬干”低，顯示在切制后再“發(fā)汗”有一定損失。

3.3 索氏提取法制備杜仲供試品較費(fèi)時(shí)且繁瑣，本研究結(jié)合文獻(xiàn)[5]采用超聲法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的索氏提取法提取杜仲中的PDG，簡(jiǎn)單、方便、可行。此外，還有人提出以乙腈－磷酸水溶液(15：85)為流動(dòng)相，可使PDG出峰時(shí)間相對(duì)縮短，鋒行窄而對(duì)稱且分離度高[6]。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2015 年版一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015.

[2] 何方,王承南,張康健,等.杜仲產(chǎn)區(qū)的劃分[J].經(jīng)濟(jì)林研究,2010,28(2)：87.

[3] 馮斌,陳文文,張大永.厚樸及其加工工藝：中國(guó),200810055725.5 [P].2008-12-31.

[4] 姜新義,楊中林,李萍.杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量測(cè)定的樣品處理方法優(yōu)化[J].藥學(xué)進(jìn)展,2009,33(1)：30.

[5] 李曄,劉峰,李彤暉,等.杜仲藥材含量測(cè)定方法的研究[J]．西北藥學(xué)雜志,2010,25(5)：348.

[6] 王月茹,謝偉,王西芳,等.HPLC測(cè)定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥,2009,29(6)：78.

（責(zé)任編輯：胡慧玲）

Study on the influence of different processing methods on pinoresinol diglucoside (PDG) content in Duzhong

/ WU Bing, LONG Fei, WEI Ying-fang, XU Ping, ZHOU Yuan-li(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To investigate the influence of different processing methods on pinoresinol diglucoside (PDG) content in Duzhong, and provide evidence for the optimization of Duzhong processing method.Method:Three batches raw material medicine were processed by four methods including "Direct drying", "Fahan-Drying”, "Slightly decocted in boiling water-Fahan-Drying", " Slightly decocted in boiling water-Cutting- Fahan-Drying ", respectively. The pinoresinol diglucoside content was detected by HPLC.Result:The content of PDG in processed Duzhong was in the order of "Slightly decocted in boiling water-Fahan-Drying" ＞ "Fahan-Drying " ＞ " Slightly decocted in boiling water-cutting- Fahan-Drying "＞"Direct drying".Conclusion:”Fahan” is necessary in Duzhong Processing. Duzhong has better quality after being processed by "Fahan" and"Slightly decocted in boiling water".

Duzhong; processing method; Fahan; slightly decocted in boiling water; pinoresinol diglucoside; HPLC

R282.4

A

1674-926X(2016)05-004-03

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

吳兵（1966-），男，主要從事中藥品種、質(zhì)量與資源研究 Email：466945108@qq.com

龍飛（1977-），男，博士，主要從事的研究方向：中藥品種、質(zhì)量與資源研究

Email：514195017@qq.com

2015-11-11