肉桂酸及其衍生物對(duì)雙孢蘑菇致腐微生物的體外抑菌效果比較

柯莉娜,胡泳華,高煥娟,潘志針,王　勤*

(1.廈門大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,濱海濕地生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建廈門361102;2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院農(nóng)業(yè)生物資源研究所,福建福州350003)

肉桂酸及其衍生物對(duì)雙孢蘑菇致腐微生物的體外抑菌效果比較

柯莉娜1,胡泳華1,高煥娟1,潘志針2,王勤1*

(1.廈門大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,濱海濕地生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建廈門361102;2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院農(nóng)業(yè)生物資源研究所,福建福州350003)

摘要：雙孢蘑菇(Agaricus bisporus (Lange) Sing)組織細(xì)嫩,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,采后呼吸代謝旺盛,為微生物的生長(zhǎng)繁殖提供了有利條件,但容易引起一些不良的生理反應(yīng),加速組織的衰老和腐敗,極大地降低了雙孢蘑菇的商品價(jià)值.本文從腐爛的雙孢蘑菇中分離鑒定得到6株細(xì)菌和8株真菌,分別為黏質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens,2株)、產(chǎn)酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca,1株)、不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter guillouiae,1株)、沙雷氏菌屬(Serratia sp.,1株)和阿氏腸桿菌(Enterobacter asouriae,1株)以及哈茨木霉(Trichoderma harzianum,5株)、多變根毛霉(Rhizomucor variabilis,1株)、綠色木霉(T. viride,1株)和米根霉(Rhizopus oryzae,1株).分別采用瓊脂擴(kuò)散法和生長(zhǎng)速率法測(cè)定了肉桂酸及其衍生物對(duì)上述細(xì)菌和真菌的抑制作用,研究結(jié)果表明肉桂酸及衍生物對(duì)這些菌株有不同程度的抑制作用,抑制效果的強(qiáng)弱依次為4-甲基肉桂酸> 4-甲氧基肉桂酸>肉桂酸> 4-羥基肉桂酸.本研究結(jié)果可為雙孢蘑菇的采后防腐提供依據(jù).

關(guān)鍵詞：肉桂酸衍生物;雙孢蘑菇;細(xì)菌;真菌

雙孢蘑菇(Agaricusbisporus(Lange) Sing)色澤潔白,組織細(xì)嫩,味道鮮美,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,不僅是一種高檔的菌類蔬菜,而且是一種具有保健功能的營(yíng)養(yǎng)食品.雙孢蘑菇含有17種氨基酸,所含的蛋白質(zhì)幾乎高于所有的豆類和蔬菜[1].雙孢蘑菇在采收后,雖然離開了培養(yǎng)基中水分和養(yǎng)分的供給,同化作用基本停止,但是生命活動(dòng)仍在繼續(xù)，仍然是活的有機(jī)體;由于其含水量高,采后呼吸代謝旺盛,極易出現(xiàn)失水萎蔫、褐變、開傘,同時(shí)也為微生物的生長(zhǎng)繁殖提供了有利條件,因此易引發(fā)一些不良的生理反應(yīng),破壞正常的組織代謝,加速組織的衰老和腐敗,極大地降低了雙孢蘑菇的商品價(jià)值[2].陳少珍等[3]分離鑒定了蘑菇黑斑病病原菌,李河等[4]分離鑒定了褐腐病病原菌,Graupner等[5]通過質(zhì)譜成像及基因組分析研究了雙孢蘑菇軟腐病病原菌Janthinobacteriumagaricidamnosum中抗真菌毒力因子的特征,馮偉林等[6]研究了不同覆土基質(zhì)微生物的結(jié)構(gòu)特征對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量、質(zhì)量的影響.目前對(duì)雙孢蘑菇中微生物的研究主要集中于蘑菇的病害菌,而對(duì)于引起蘑菇腐爛的微生物并未見報(bào)道.

肉桂酸是一種天然提取物,安全無毒,微有桂皮氣味.目前對(duì)肉桂酸及其衍生物的研究包括了酪氨酸酶抑制劑[7]、抑菌作用[8]、保鮮作用[9].我們的前期研究發(fā)現(xiàn)肉桂酸及其衍生物可以延緩雙孢蘑菇的褐變,同時(shí)雙孢蘑菇在采后易發(fā)生腐爛,而由于微生物作用導(dǎo)致的腐爛是否能夠同時(shí)被肉桂酸及其衍生物所抑制尚不清楚.因此,本研究首先從腐爛蘑菇中分離鑒定致腐菌株,繼而研究肉桂酸及其衍生物對(duì)這些菌株的抑制作用,該研究結(jié)果可為今后肉桂酸及其衍生物在采后雙孢蘑菇防微生物腐爛的應(yīng)用提供理論和實(shí)踐基礎(chǔ).

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試菌株

菌株均由福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院農(nóng)業(yè)生物資源研究所分離得到.從腐爛蘑菇中分離到的6株細(xì)菌菌株編號(hào)分別為:FJAT-17802、FJAT-17804、FJAT-17805、FJAT-17806、FJAT-17807、FJAT-17808.從腐爛蘑菇中分離到的8株真菌菌株編號(hào)分別為:FJAT-30524、FJAT-30525、FJAT-30526、FJAT-30527、FJAT-30528、FJAT-30529、FJAT-30530、FJAT-30531.

1.1.2培養(yǎng)基

細(xì)菌培養(yǎng)采用的是LB培養(yǎng)基,真菌培養(yǎng)采用的是PDA培養(yǎng)基.

1.1.3試劑

肉桂酸、4-甲基肉桂酸和4-羥基肉桂酸為上海生工生物工程股份有限公司產(chǎn)品;4-甲氧基肉桂酸為Sigma-Aldrich公司產(chǎn)品;脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、Taq酶(5 U/μL)為上海博尚生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司產(chǎn)品;其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?蒸餾水為去離子重蒸水(ddH2O).

1.1.4引物

細(xì)菌通用16S rRNA引物:9F(5′-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1542R(5′-AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-3′);真菌通用引物:ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)和ITS5(5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′).上述引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成.

1.2方法

1.2.1細(xì)菌菌株鑒定

采用龍?chǎng)┑萚10]的方法,進(jìn)行修改后如下:將菌種在固體LB培養(yǎng)基上劃線活化,30 ℃培養(yǎng)2 d.收集細(xì)菌提取DNA,采用25 μL PCR反應(yīng)體系(10×Buffer 2.5 μL，10 mmol/L dNTP 0.5 μL，引物各1 μL，5 U/μL Taq酶0.3 μL,ddH2O 18.7 μL,DNA模板1 μL)進(jìn)行擴(kuò)增.PCR反應(yīng)程序?yàn)?94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s,55 ℃退火45 s,72 ℃延伸1 min 30 s,35個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min.用1.5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))的瓊脂糖凝膠對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)出有條帶的菌株P(guān)CR產(chǎn)物送至上海博尚生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行測(cè)序,將結(jié)果進(jìn)行16S rRNA鑒定,所得序列在NCBI網(wǎng)站上進(jìn)行序列比對(duì)分析.

1.2.2真菌菌株鑒定

采用修改后的華娟等[11]的方法:將菌種在添加硫酸鏈霉素的固體PDA培養(yǎng)基(每200 mL培養(yǎng)基中加入1 mL 40 mg/mL的硫酸鏈霉素)上劃線活化,28 ℃培養(yǎng)2 d.采用尿素提取法提取菌株的DNA,采用25 μL PCR反應(yīng)體系(10×Buffer 2.5 μL，10 mmol/L dNTP 0.5 μL，引物各1 μL，5 U/μL Taq酶0.25 μL，ddH2O 18.75 μL，DNA模板1 μL)進(jìn)行擴(kuò)增.PCR反應(yīng)程序?yàn)?94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性1 min,55 ℃退火1 min,72 ℃延伸1 min,30個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min.電泳檢測(cè)、PCR產(chǎn)物測(cè)序及序列比對(duì)分析同上.

1.2.3肉桂酸及其衍生物對(duì)細(xì)菌的抑制作用檢測(cè)

采用瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定抑菌圈大小[12].將-20 ℃冷凍保藏的供試菌在固體LB培養(yǎng)基上劃線活化,置于37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h.從活化后的各菌落中挑取單菌落,接種于25 mL的液體LB培養(yǎng)基中,于37 ℃、200 r/min下?lián)u床培養(yǎng)24 h,制備菌懸液.將滅菌后的固體LB培養(yǎng)基(含1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同)的瓊脂)約15 mL倒入滅菌后的平皿中,配制底層培養(yǎng)基,過夜保證無污染.將滅菌后的LB培養(yǎng)基(含0.7%的瓊脂)冷卻至50 ℃,接種實(shí)驗(yàn)菌(菌密度為106mL-1),搖勻,倒在底層平板上，配制上層培養(yǎng)基.用打孔器在平板上打孔,孔直徑為0.7 cm,每個(gè)平板7個(gè)孔,分別設(shè)置5個(gè)效應(yīng)物濃度(1.25,2.5,5,10,20 mmol/L)、1個(gè)陰性對(duì)照(二甲基亞砜)、1個(gè)陽性對(duì)照(2 000 U/mL慶大霉素),37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h,觀察結(jié)果,并用游標(biāo)卡尺測(cè)定抑菌圈大小,每個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù).

1.2.4肉桂酸及其衍生物對(duì)真菌的抑制作用檢測(cè)

采用生長(zhǎng)速率法[13].將-20 ℃冷凍保藏的供試菌在固體PDA培養(yǎng)基上劃線活化,置于30 ℃恒溫活化48 h.將約20 mL滅菌后的PDA培養(yǎng)基(含1%的瓊脂)與400 μL梯度稀釋的效應(yīng)物混合倒入平皿中.然后將培養(yǎng)好的真菌打成直徑為0.7 cm的菌餅(初始菌餅)貼于平皿中央,使有菌絲的一面朝下,每個(gè)平皿一個(gè)濃度(1.25,2.5,5,10,20 mmol/L),以未添加效應(yīng)物組作為對(duì)照,30 ℃恒溫培養(yǎng)48 h,觀察結(jié)果,并用游標(biāo)卡尺采用十字交叉法測(cè)定菌落直徑,每個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù),計(jì)算抑制率,公式如下:

抑制率=(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/

(對(duì)照菌落直徑-初始菌餅直徑)×100%.

1.2.5數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示.

2結(jié)果與分析

2.1腐爛雙孢蘑菇中細(xì)菌的分離純化及鑒定

從腐爛蘑菇中分離出6株細(xì)菌(圖1),經(jīng)16S rRNA鑒定,FJAT-17802和FJAT-17804為黏質(zhì)沙雷氏菌(Serratiamarcescens),其中FJAT-17802序列長(zhǎng)度1 400 bp,FJAT-17804序列長(zhǎng)度1 013 bp；FJAT-17805為產(chǎn)酸克雷伯菌(Klebsiellaoxytoca),序列長(zhǎng)度1 395 bp；FJAT-17806為不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacterguillouiae),序列長(zhǎng)度1 396 bp；FJAT-17807為沙雷氏菌屬(Serratiasp.),序列長(zhǎng)度1 405 bp；FJAT-17808為阿氏腸桿菌(Enterobacterasburiae),序列長(zhǎng)度1 407 bp.

(a)～(f)分別為FJAT-17802、FJAT-17804、FJAT-17805、FJAT-17806、FJAT-17807和FJAT-17808．圖1　腐爛雙孢蘑菇中細(xì)菌的分離純化鑒定Fig.1The bacteria isolated from rotten A． bisporus

2.2腐爛雙孢蘑菇中真菌的分離純化及鑒定

從腐爛的雙孢蘑菇中分離得到8株真菌(圖2).經(jīng)鑒定，F(xiàn)JAT-30524為哈茨木霉(Trichodermaharzianum),序列長(zhǎng)度639 bp;FJAT-30525為哈茨木霉,序列長(zhǎng)度629 bp;FJAT-30526為多變根毛霉(Rhizomucorvariabilis),序列長(zhǎng)度655 bp;FJAT-30527為綠色木霉(T.viride),序列長(zhǎng)度638 bp;FJAT-30528為哈茨木霉,序列長(zhǎng)度640 bp;FJAT-30529為哈茨木霉,序列長(zhǎng)度642 bp;FJAT-30530為哈茨木霉,序列長(zhǎng)度625 bp;FJAT-30531為米根霉(Rhizopusoryzae),序列長(zhǎng)度650 bp.

(a)～(h)分別為FJAT-30524、FJAT-30525、FJAT-30526、FJAT-30527、FJAT-30528、FJAT-30529、FJAT-30530和FJAT-30531.圖2　雙孢蘑菇中真菌的分離純化鑒定Fig.2The fungi isolated from rotten A． bisporus

2.3肉桂酸及其衍生物對(duì)腐爛雙孢蘑菇中細(xì)菌的抑制作用

采用瓊脂擴(kuò)散法研究肉桂酸及其衍生物對(duì)從腐爛的雙孢蘑菇中分離出的細(xì)菌的抑制作用,其中黏質(zhì)沙雷氏菌以FJAT-17802為代表.肉桂酸及其衍生物對(duì)阿氏腸桿菌的作用如圖3(a)所示：肉桂酸對(duì)阿氏腸桿菌無抑制作用;4-甲基肉桂酸和4-甲氧基肉桂酸對(duì)其有輕微抑制作用,但效果不顯著;而4-羥基肉桂酸對(duì)其的抑制作用不顯著.肉桂酸及其衍生物對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌的作用如圖3(b)所示：4-甲基肉桂酸和4-甲氧基肉桂酸對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌的抑制效果不顯著,而肉桂酸和4-羥基肉桂酸對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌的生長(zhǎng)無影響.肉桂酸及其衍生物對(duì)沙雷氏菌屬的作用如圖3(c)所示：當(dāng)肉桂酸濃度達(dá)到5 mmol/L時(shí),對(duì)沙雷氏菌屬的抑制效果比陽性對(duì)照好;而4-甲氧基肉桂酸對(duì)沙雷氏菌屬有輕微抑制作用,但效果不顯著;4-甲基肉桂酸和4-羥基肉桂酸對(duì)沙雷氏菌屬的生長(zhǎng)無影響.

圖3　肉桂酸及衍生物對(duì)腐爛雙孢蘑菇中阿氏腸桿菌(a)、黏質(zhì)沙雷氏菌(b)、沙雷氏菌屬(c)的抑制作用Fig.3Antimicrobial activities of cinnamic acid and its derivatives to E. asburiae (a), S. marcescens (b) and Serratia sp. (c) from rotten A. bisporus

此外，我們也研究了肉桂酸及其衍生物對(duì)不動(dòng)桿菌屬和產(chǎn)酸克雷伯菌的抑制效果,研究結(jié)果表明,它們對(duì)這2種細(xì)菌的生長(zhǎng)并無抑制作用.

2.4肉桂酸及其衍生物對(duì)腐爛雙孢蘑菇中真菌的抑制作用

采用生長(zhǎng)速率法研究肉桂酸及其衍生物對(duì)腐爛的雙孢蘑菇中篩選鑒定得到的真菌的抑制作用,其中哈茨木霉以FJAT-30524為代表.肉桂酸及其衍生物對(duì)綠色木霉的作用如圖4(a)所示：對(duì)綠色木霉的抑制作用強(qiáng)弱依次為4-甲基肉桂酸>4-甲氧基肉桂酸>肉桂酸,當(dāng)濃度達(dá)到20 mmol/L時(shí),抑制率分別為50.00%，47.89%和33.33%.肉桂酸及其衍生物對(duì)哈茨木霉的作用如圖4(b)所示：對(duì)哈茨木霉的抑制作用強(qiáng)弱依次為4-甲基肉桂酸>4-甲氧基肉桂酸>肉桂酸>4-羥基肉桂酸,當(dāng)濃度達(dá)到20 mmol/L時(shí),抑制率分別為100%，39.19%，10.00%和4.00%.肉桂酸及其衍生物對(duì)米根霉的作用如圖4(c)所示：當(dāng)濃度達(dá)到20 mmol/L時(shí),肉桂酸、4-甲基肉桂酸和4-甲氧基肉桂酸對(duì)米根霉的抑制率均達(dá)到100%.肉桂酸及其衍生物對(duì)多變根毛霉的作用如圖4(d)所示：隨著濃度的升高,4-甲基肉桂酸和4-甲氧基肉桂酸對(duì)多變根毛霉的抑制率均呈上升趨勢(shì),而4-甲基肉桂酸的抑制效果優(yōu)于4-甲氧基肉桂酸,當(dāng)濃度達(dá)到20 mmol/L時(shí),抑制率分別為48.61%和18.82%.此外，肉桂酸對(duì)多變根毛霉的生長(zhǎng)無影響,4-羥基肉桂酸對(duì)綠色木霉、米根霉、多變根毛霉均為無抑制作用.

3討論

本實(shí)驗(yàn)鑒定得到的黏質(zhì)沙雷氏菌菌落有黏性，呈中心顆粒狀,有惡臭氣味,廣泛存在于水、土壤和食品中,在28 ℃下培養(yǎng)有玫瑰紅色色素產(chǎn)生,所產(chǎn)紅色素會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間的變化而變化,培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng),顏色越淡[14].克雷伯菌屬機(jī)會(huì)致病菌,呼吸道常居菌群,在人及動(dòng)物腸道中亦常見,其中產(chǎn)酸克雷伯菌已被確認(rèn)為病原菌[15],而本實(shí)驗(yàn)分離得到的產(chǎn)酸克雷伯菌是否具有致病性還需進(jìn)一步驗(yàn)證.腸桿菌科細(xì)菌分布廣,寄主范圍大,與人類關(guān)系密切.不動(dòng)桿菌屬為非發(fā)酵菌，是條件致病菌,其腐生性致病性需進(jìn)一步驗(yàn)證.

圖4　肉桂酸及衍生物對(duì)腐爛雙孢蘑菇中綠色木霉(a)、哈茨木霉(b)、米根霉(c)和多變根毛霉(d)的抑制作用Fig.4Antimicrobial activities of cinnamic acid and its derivatives to T. viride (a), T. harzianum (b), R. oryzae (c) and R. variabilis (d) from rotten A. bisporus

哈茨木霉被認(rèn)為是具有重要價(jià)值的生防菌,主要通過識(shí)別寄主后纏繞寄主真菌的菌絲,隨后產(chǎn)生細(xì)胞壁降解酶和抗生素，以及對(duì)空間和營(yíng)養(yǎng)的競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制，達(dá)到防治植物病原菌的目的[16].綠色木霉也屬于生防菌,對(duì)多數(shù)植物病原菌有抑制作用.多變根毛霉多見于醫(yī)學(xué)性致皮膚病的病菌,但在2008年,廣東從泰國(guó)進(jìn)口的腐爛榴蓮中首次分離到多變根毛霉[17],而早在1992年,楊堅(jiān)[18]就對(duì)蘋果腐爛菌群進(jìn)行了分析,從中分離了5株毛霉屬真菌.米根霉菌絲發(fā)達(dá),對(duì)于其是否導(dǎo)致新鮮蘑菇腐爛以及是否通過產(chǎn)生L-乳酸和富馬酸等有機(jī)酸代謝產(chǎn)物來加快蘑菇腐爛[19],或者這些代謝產(chǎn)物是否能殺死其他腐生菌從而達(dá)到蘑菇保鮮的作用等仍需進(jìn)一步探討.

本實(shí)驗(yàn)從腐爛的雙孢蘑菇中分離鑒定得到6種細(xì)菌和8種真菌,探討了肉桂酸及其衍生物對(duì)這些菌株的作用,結(jié)果顯示這些菌株對(duì)4-羥基肉桂酸均不敏感.4-甲基肉桂酸對(duì)阿氏腸桿菌、哈茨木霉、多變根毛霉、綠色木霉和米根霉的抑制效果均優(yōu)于其他化合物,4-甲氧基肉桂酸的效果僅次于4-甲基肉桂酸,而肉桂酸對(duì)沙雷氏菌屬有很好的抑制效果.我們推測(cè)由于取代基的不同導(dǎo)致了肉桂酸及其衍生物的抑菌效果不同：由于4-甲氧基和4-甲基的結(jié)構(gòu)較為相近,因此這2種化合物的抑菌效果也較為相近;而羥基的水溶性較好,使得該物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞較為不易從而導(dǎo)致4-羥基肉桂酸的抑菌效果相對(duì)較差.我們的研究結(jié)果將為肉桂酸及其衍生物在采后雙孢蘑菇防腐的應(yīng)用提供進(jìn)一步的理論和實(shí)踐基礎(chǔ).

參考文獻(xiàn)：

[1]MEND D,SONG T,SHEN L,et al．Postharvest application of methyl jasmonate for improving quality retention ofAgaricusbisporusfruit bodies[J]．Journal of Agricultural and Food Chemistry,2012,60(23):6056-6062.

[2]JIANG T．Effect of natamycin in combination with pure oxygen treatment on postharvest quality and selected enzyme activities of button mushroom (Agaricusbisporus)[J]．Journal of Agricultural and Food Chemistry,2012,60(10),2562-2568.

[3]陳少珍,黃思良,黃卓忠,等.蘑菇黑斑病病原菌分離與鑒定[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,40(1):43-46.

[4]李河,周國(guó)英,劉君昂.雙孢蘑菇褐腐病病原菌的分離及分子鑒定[J].食用菌學(xué)報(bào),2009,16(2):74-76.

[5]GRAUPNER K,SCHERLACH K,BRETSCHNEIDER T,et al．Imaging mass spectrometry and genome mining reveal highly antifungal virulence factor of mushroom soft rot pathogen[J]．Angewandta Chemie International Edition,2012,51(52):13173-13177.

[6]馮偉林,金群力,范麗軍,等.不同覆土基質(zhì)微生物結(jié)構(gòu)特征研究及其對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響[J].菌物學(xué)報(bào),2014,33(2):425-432.

[7]SHI Y,CHEN Q X,WANG Q,et al．Inhibitory effects of cinnamic acid and its derivatives on the diphenolase activity of mushroom (Agaricusbisporus) tyrosinase[J]．Food Chemistry,2005,92(4):707-712.

[8]梁盛年,段志芳,付莉,等.幾種肉桂酸衍生物與肉桂酸抑菌作用比較研究[J].食品科技,2005(9):71-73.

[9]HU Y H,CHEN C M,XU L,et al．Postharvest application of 4-methoxy cinnamic acid for extending the shelf life of mushroom (Agaricusbisporus)[J]．Postharvest Biology and Technology,2015,104:33-41.

[10]龍?chǎng)?陳存社.16S rRNA測(cè)序在細(xì)菌鑒定中的應(yīng)用[J].北京工商大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2006,24(5):10-12.

[11]華娟,李淋玲,程華,等.羅田栗實(shí)致腐真菌的分離鑒定及拮抗菌篩選[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2013,29(25):102-107.

[12]ZHU Y J,ZHOU H T,HU Y H,et al．Antityrosinase and antimicrobial activities of 2-phenylethanol,2-phenylacetaldehyde and 2-phenylacetic acid[J]．Food Chemistry,2011,124(1):298-302.

[13]XU J G,ZHAO X M,HAN X W,et al．Antifungal activity of oligochitosan againstPhytophthoracapsiciand other plant pathogenic fungiinvitro[J]．Pesticide Biochemistry and Physiology,2007,87(3):220-228.

[14]黃文芳.黏質(zhì)沙雷氏菌(Serrtiamarcescens)的研究Ⅰ:黏質(zhì)沙雷氏菌9-2菌株分離、分類鑒定和形態(tài)特征[J].華南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2003(3):108-111.

[15]盂靜,王銳.牛奶中一株產(chǎn)酸克雷伯菌的檢出[J].食品工程,2010(3):53-56.

[16]石一瑁,申屠旭萍,俞曉平.重寄生菌哈茨木霉的研究及其在植病生防中的應(yīng)用[J].生物技術(shù)通報(bào),2008(增刊1):76-78.

[17]王衛(wèi)芳,胡佳,陳曉玲,等.廣東口岸從泰國(guó)進(jìn)境榴蓮上截獲果腐病菌多變根毛霉[J].植物檢疫,2009(4):60.

[18]楊堅(jiān).蘋果腐爛菌群分析[J].食品科學(xué),1992(11):48-50.

[19]付永前,黃和,李霜,等.固定化米根霉發(fā)酵生產(chǎn)有機(jī)酸的現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)[J].現(xiàn)代化工,2008,28(12):88-91.

Antimicrobial Activities of Cinnamic Acid and Its Derivatives to Microorganisms Isolated from Rotten Agaricus bisporus

KE Lina1,HU Yonghua1,GAO Huanjuan1,PAN Zhizhen2,WANG Qin1*

(1.Key Laboratory of the Ministry of Education for Coastal and Wetland Ecosystems,School of Life Sciences,Xiamen University,Xiamen 361102,China;2.Agricultural Bioresource Institute,Fujian Academy of Agricultural Sciences,Fuzhou 350003,China)

Abstract:Agaricus bisporus has a vigorous respiration after harvesting,due to its delicate tissue and the high nutritional value,which provides favorable conditions for the growth of microbes,causing some bad physiological reaction,accelerating the aging and corruption,and greatly reducing the commodity value of A． bisporus．We identified six bacterial strains and eight fungal strains from rotten A． bisporus,which are Serratia marcescens(2),Klebsiella oxytoca(1),Acinetobacter guillouiae(1),Serratia sp.(1),Enterobacter asburiae(1),and Trichoderma harzianum(5),Rhizomucor variabilis(1),T. viride(1) and Rhizopus oryzae(1)．Moreover,antimicrobial activities of cinnamic acid and its derivatives were investigated．The results showed that cinnamic acid and its derivatives exhibited different degrees of the growth inhibition on microbia．The strength of inhibition effects decreases following the sequence of 4-methyl cinnamic acid,4-methoxy cinnamic acid,cinnamic acid and 4-hydroxy cinnamic acid．These results may provide theoretical and practical basis in the application of antimicrobial rotting of postharvest A． bisporus in the future.

Key words:cinnamic acid derivatives;Agaricus bisporus;bacteria;fungi

doi：10.6043/j.issn.0438-0479.2016.03.005

收稿日期：2015-09-29錄用日期：2015-12-28

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(31271952);中國(guó)博士后科學(xué)基金(2015M570556)

*通信作者：qwang@xmu.edu.cn

中圖分類號(hào):Q 936

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：0438-0479(2016)03-0330-06

引文格式：柯莉娜,胡泳華,高煥娟，等.肉桂酸及其衍生物對(duì)雙孢蘑菇致腐微生物的體外抑菌效果比較.廈門大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2016,55(3)：330-335.

Citation：KE L N,HU Y H,GAO H J,et al．Antimicrobial activities of cinnamic acid and its derivatives to microorganisms isolated from rottenAgaricusbisporus.Journal of Xiamen University(Natural Science)，2016,55(3)：330-335．(in Chinese)