中藥復(fù)方制劑對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的防治觀察

郭永剛，胡立磊，樊國燕，湯法銀（.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南鄭州4500；.河南醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南鄭州459）

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中藥復(fù)方制劑對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的防治觀察

郭永剛1，胡立磊2，樊國燕1，湯法銀1
（1.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南鄭州450011；2.河南醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南鄭州451191）

1　材料與方法

1.1菌種雞致病性大腸桿菌，由河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院藥理藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離鑒定保存。

1.2藥物金銀花、黃連、黃芩、魚腥草4味中藥（購自安徽亳州中藥材市場）；丁胺卡那注射液（齊魯制藥廠，規(guī)格0.2 g/2 mL，注射用水稀釋至5

mg/mL）。

1.3試驗(yàn)動物1日齡艾維茵肉仔雞，常規(guī)飼養(yǎng)管理和疫苗接種，自由采食飲水，試驗(yàn)期間飼喂的飼料自行配制生產(chǎn)，為不含任何抗菌藥物的配合飼料。

1.4中藥煎制金銀花、黃連、黃芩、魚腥草4味中藥按一定比例稱取，加水浸泡30 min，加熱至沸騰，保持微沸狀態(tài)1 h，分離煎出液，藥渣再煎煮1次，合并煎出液，濾過，濃縮成1 g/mL含生藥藥液，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5菌種活化將本實(shí)驗(yàn)室分離保存的雞致病性大腸桿菌接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)20 h，選擇典型菌落接種于營養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)20 h后，采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，將菌液稀釋至濁度為1×1010CFU/mL備用。

1.6感染細(xì)菌劑量測定50只14日齡雛雞隨機(jī)均分為5組，A、B、C、D組為細(xì)菌感染組，E組為對照組。將1×1010CFU/mL的菌液稀釋為1×109、5×108、1×108和5×107CFU/mL，細(xì)菌感染組雛雞每只腹腔注射稀釋后的菌液1 mL，對照組雛雞腹腔注射生理鹽水溶液1 mL，觀察接菌后72 h內(nèi)雛雞的死亡率，確定最佳感染細(xì)菌劑量。

1.7對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的預(yù)防試驗(yàn)將180只18日齡雛雞隨機(jī)均分為6組，A、B、C組分別為中藥提取物高、中、低劑量組，每只雞每天飲水給藥分別為2、1 mL和0.5 mL；D組為丁胺卡那霉素預(yù)防組，每只雛雞每天皮下注射稀釋后丁胺卡那霉素0.5 mL；以上4組先給藥5 d，然后各組每只雛雞腹腔注射5×108CFU/mL大腸桿菌菌液1 mL，再繼續(xù)給藥3 d；E組為感染對照組，不給藥，感染時(shí)間劑量同上；F組為空白對照組。試驗(yàn)觀察7 d。記錄雛雞的臨床癥狀變化，對死亡雞剖檢，做細(xì)菌分離培養(yǎng)，以確定死因。并計(jì)算各組雛雞的發(fā)病率、死亡率及保護(hù)率。

1.8對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的治療試驗(yàn)將180 只18日齡雛雞隨機(jī)均分為6組，分組及感染情況同1.7。感染細(xì)菌的雛雞出現(xiàn)臨床癥狀后，飲水給藥進(jìn)行治療。其中A、B、C組每只雛雞每天分別給中藥提取物4、2 mL和1 mL，D組每只雛雞每天皮下注射稀釋后丁胺卡那1 mL，連用5 d。試驗(yàn)觀察7 d。計(jì)算各組雛雞的發(fā)病率、死亡率及保護(hù)率。

2　結(jié)果與分析

2.1臨床與剖檢癥狀感染后18～24 h除健康對照組外，各組試驗(yàn)雞只均出現(xiàn)不同程度臨床癥狀，主要表現(xiàn)為精神沉郁，食欲下降，羽毛松亂，閉眼縮頸，腹瀉，嚴(yán)重者出現(xiàn)死亡。剖檢死亡雞只可見心包發(fā)炎，心包腔中有纖維素性滲出物；肝臟充血腫大，肝漿膜有滲出物。

2.2細(xì)菌的攻毒劑量細(xì)菌感染組雛雞的死亡數(shù)及死亡率結(jié)果見表1。感染細(xì)菌劑量以使感染組的死亡率控制在50%～60%為宜，因此確定預(yù)防和治療試驗(yàn)的細(xì)菌感染劑量為每只雞5×108CFU/mL菌液1 mL。

表1　攻毒劑量測定試驗(yàn)結(jié)果

2.3預(yù)防試驗(yàn)結(jié)果細(xì)菌感染后，感染對照組雛雞在18～24 h相繼發(fā)病，癥狀顯著，并有雞只逐漸死亡；各用藥組雛雞發(fā)病時(shí)間明顯延后，且癥狀相對較輕。試驗(yàn)結(jié)果見表2，由表2可知，藥物預(yù)防組雛雞的發(fā)病率和死亡率明顯低于感染對照組，說明試驗(yàn)藥物能夠有效預(yù)防雞大腸桿菌病。中、低劑量中藥組雛雞發(fā)病率明顯高于丁胺卡那霉素組，但高劑量中藥組的保護(hù)率接近于丁胺卡那霉素組，表明對于人工誘發(fā)的雛雞大腸桿菌病，中藥可發(fā)揮與丁胺卡那霉素相近的預(yù)防作用。

表2　藥物對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的預(yù)防試驗(yàn)結(jié)果

表3　藥物對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的治療試驗(yàn)結(jié)果

2.4治療試驗(yàn)結(jié)果各組的治療結(jié)果見表3。由試驗(yàn)結(jié)果可知，藥物治療組雛雞的死亡率明顯低于感染對照組，說明試驗(yàn)藥物能夠有效的治療雛雞大腸桿菌病。隨著中藥劑量的增加，對雛雞大腸桿菌病的治療效果也增強(qiáng)，中藥高劑量組的有效率接近于丁胺卡那霉素組。

3　討論與結(jié)論

人工誘發(fā)雞大腸桿菌病模型的建立與試驗(yàn)動物日齡和攻毒劑量等因素密切相關(guān)。劉春明等選20日齡雛雞腹腔注射3×108CFU/mL大腸桿菌菌液0.5 mL建立大腸桿菌病理模型［2］。蔣紅等選15日齡雛雞腹腔注射2×1088CFU/mL大腸桿菌菌液0.8 mL建立大腸桿菌病理模型［3］。根據(jù)以上報(bào)道，本試驗(yàn)給14日齡雛雞腹腔注射5×108CFU/mL大腸桿菌菌液1 mL也成功建立了雛雞大腸桿菌病病理模型，感染動物的臨床表現(xiàn)與文獻(xiàn)［4］報(bào)道基本一致。

本試驗(yàn)所用復(fù)方制劑中，金銀花具有清熱解毒之功效，對其藥理研究表明，金銀花對痢疾桿菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌等有抑制作用；黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效，可用于抗菌、抗病毒、抗真菌；黃連清腸燥濕排除腸內(nèi)毒素；黃芪補(bǔ)脾益氣；魚腥草具有具有抗菌、抗病毒、提高機(jī)體免疫力。根據(jù)中獸醫(yī)的辨證論治理論認(rèn)為雞大腸桿菌病是由病菌內(nèi)侵、肺胃熱盛、血淤氣滯引起，因此適合應(yīng)用清熱解毒、涼血、燥濕藥物［5］。試驗(yàn)所用復(fù)方制劑中還加入抗病毒作用的中草藥，在治療大腸桿菌病的同時(shí)控制病毒病的并發(fā)與繼發(fā)感染。對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析可以看出，該中藥復(fù)方制劑對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的預(yù)防和治療效果，高劑量組接近于丁胺卡那霉素組，中、低劑量組隨著劑量減少其防治效果下降，但與感染對照組比較仍表現(xiàn)出一定的效果，表明該中藥復(fù)方制劑對雞大腸桿菌病的治療效果可能呈劑量依賴性，只有在一定劑量范圍內(nèi)才有顯著而穩(wěn)定的增強(qiáng)效應(yīng)，這與其他相關(guān)研究結(jié)果基本一致［6］。綜上所述，本研究表明試驗(yàn)所用中藥復(fù)方制劑可以用于雞大腸桿菌病的防治。

參考文獻(xiàn)：

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中圖分類號：S858.31

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號：0529- 6005（2016）03- 0053- 02

收稿日期：2014-08-14

基金項(xiàng)目：2014年河南省醫(yī)學(xué)教育教學(xué)改革項(xiàng)目WJLX（2014 041）；河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（102102110025）

作者簡介：郭永剛（1979-），男，講師，碩士，主要從事獸醫(yī)藥理與藥劑研究，E-mail：xiaoguonj@163.com

通訊作者：湯法銀，E-mail：finetang@126.com雞大腸桿菌病是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的主要細(xì)菌性疾病，不同品種和不同日齡的雞均可發(fā)病，但肉仔雞最易感染，以敗血癥最常見［1］。目前臨床上具有抗菌作用的化學(xué)藥物大量應(yīng)用對本病雖然起到了一定治療和預(yù)防作用，但已使大腸桿菌對很多抗菌藥物產(chǎn)生了耐藥性，而且藥物殘留還直接影響食品安全與出口貿(mào)易。中藥治療效果受菌株耐藥性的影響較小，且副作用小、幾乎無殘留，因此研究應(yīng)用中藥治療雞大腸桿菌病有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論，以金銀花、黃連、黃芩、魚腥草復(fù)方制劑對人工感染肉仔雞大腸桿菌病進(jìn)行治療及預(yù)防保護(hù)試驗(yàn)，以確定其臨床適宜劑型和給藥劑量，旨在為臨床合理使用中藥防治雞大腸桿菌病提供參考。