PELP1和Ki67在子宮內(nèi)膜癌中的表達及臨床意義

王倩 李從鑄 朱彥

子宮內(nèi)膜癌為女性生殖道常見的惡性腫瘤之一，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%。發(fā)達國家中發(fā)病率居女性生殖道惡性腫瘤首位，死亡率居第二位。多見于老年婦女，高發(fā)年齡為50～60歲，年輕患者有增多趨勢。因此尋找新的評價腫瘤惡性程度及判斷預后的指標尤為重要，可以指導個體化治療。PELP1是一個新的雌激素受體 (estrogen recepter，ER)共激活因子，能調(diào)節(jié)ER的基因組和非基因組途徑的作用，它可以通過激活Src/MAPK通路而促進細胞的增殖［1］，激活PI3K/Akt通路而抑制細胞的凋亡［2］。另外，PELP1通過非基因組功能參與細胞的分化、生存和凋亡。在乳腺癌、卵巢癌等多種激素相關的腫瘤中，PELP1的研究較多［3－6］，這些研究發(fā)現(xiàn)其除了與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移等相關外，還在腫瘤的激素治療耐藥性中有意義。但PELP1在子宮內(nèi)膜癌中的相關研究較少［7］。

資料和方法

一、標本來源

選取汕頭大學醫(yī)學院附屬腫瘤醫(yī)院1999年7月至2009年4月開腹手術并經(jīng)術后病理確診為子宮內(nèi)膜癌患者76例，其中有1例為透明細胞癌，其余均為子宮內(nèi)膜樣腺癌。其中取腹水送檢73例。72例行ER、孕激素受體 (progestrone recepter，PR)檢測 (結果來自術后病理資料)。49例行腹膜后淋巴結清掃。患者年齡36～71歲，平均年齡53歲。所有患者術前均無放化療及激素治療史。病理診斷均經(jīng)HE染色及病理科專家復核。

二、主要試劑

兔抗人PELP1單克隆抗體 (IHC-00013)購自美國Bethyl Laboratories公司。鼠抗人Ki67單克隆抗體 (M-0350)購自上海長島生物技術有限公司。二步法免疫組化檢測試劑盒 (PV-9000)購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

三、方法

所有標本均經(jīng)過常規(guī)福爾馬林固定和石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、水化，進行常規(guī)HE染色和免疫組織化學染色。免疫組織化學操作按照二步法試劑盒說明書進行。抗原修復采用微波修復的方法，抗原修復液選用檸檬酸鹽溶液 (PH6.0，0.01M)。一抗孵育條件選擇4°C過夜 (時間14～16 h)。一抗稀釋度PELP1為1:150、Ki67為1:50。以PBS代替一抗染色作為空白對照。

四、結果判定標準

采用臨床和病理資料雙盲條件下、由兩名病理學專家進行讀片。PELP1和Ki67蛋白陽性表達均為細胞核內(nèi)可見棕黃色顆粒。PELP1評分標準為:每張染色切片中陽性腫瘤細胞數(shù)占所有腫瘤細胞數(shù)的百分比計數(shù)，分為兩組:＜50%為弱陽性，＞50%為強陽性。

Ki67評分標準為:每張染色切片隨機選取5個高倍鏡視野 (×400)進行細胞計數(shù)，計算腫瘤細胞中的陽性細胞占所有腫瘤細胞的百分比，分為兩組:＜25%為弱陽性，＞25%為強陽性。

五、統(tǒng)計學方法

PELP1和Ki67蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達與各臨床病理因素的分析采用χ2檢驗、Fisher確切概率法。PELP1和Ki67的相關性研究采用Spearman等級相關檢驗。所有統(tǒng)計分析均采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。檢驗水準α=0.05(雙側)。

結 果

一、PELP1和Ki67蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達

PELP1和Ki67在子宮內(nèi)膜癌中均呈陽性表達，但強弱程度不同，定位于癌細胞核。

二、PELP1蛋白表達與各子宮內(nèi)膜癌臨床病理因素之間的關系

PELP1蛋白的表達在不同分化程度的子宮內(nèi)膜癌組織中表達強度之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，G1組強度＜G2、G3組 (P＜0.01)，但G2、G3組之間無差異。在不同手術－病理分期的子宮內(nèi)膜癌中，PELP1蛋白的表達強度具有差異性，早期組 (Ⅰ期)強度低于中、晚期組 (Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期)(P＜0.01)。不同肌層浸潤深度的子宮內(nèi)膜癌患者中，PELP1蛋白的表達強度不同 (P＜0.01)。有淋巴結轉移者，PELP1蛋白的表達強度比無淋巴結轉移者強 (P＜0.05)。另外，PELP1蛋白的表達強度還與雙側附件是否受累、腹水是否找到癌細胞有關。但與宮頸管是否受累、ER、PR的表達之間均無關，見表1。

Ki67蛋白的表達強度在不同分化程度之間具有差異 (P＜0.01)。早期者 (Ⅰ期)Ki67強度低于中、晚期者 (Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期) (P＜0.05)。有淋巴結轉移者，Ki67的表達強度比無淋巴結轉移者強，其差異具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)，見表1。

表1 PELP1和Ki67蛋白的表達與子宮內(nèi)膜癌各臨床參數(shù)之間的關系

表2 子宮內(nèi)膜癌中PELP1蛋白和Ki67蛋白之間的關系 (總例數(shù)n=76)

三、PELP1蛋白和Ki67表達之間的相關性

在子宮內(nèi)膜癌中，PELP1蛋白與Ki67蛋白的表達呈正相關 (P＜0.05)，相關系數(shù)r=0.244。見表2。

討 論

一、PELP1和Ki67與子宮內(nèi)膜癌

由于人類壽命延長和肥胖人群增多，近20年間子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率居高不下，而且死亡率呈明顯上升趨勢。但至今尚無判斷子宮內(nèi)膜癌療效和預后的可靠指標。PELP1蛋白作為一種新的ER共激活因子，其在腫瘤形成過程中起到原癌基因的作用，在多種激素相關性腫瘤中表達異常［4］，在子宮內(nèi)膜癌中，PELP1亦出現(xiàn)異常定位和表達［8］，該研究證實，PELP1可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生和進展中起重要作用［9］。

Ki67是一種細胞核相關抗原，是目前臨床上廣泛應用的檢測細胞增殖的標志。Ki67的檢測對于判斷腫瘤的惡性程度、進展及其生物學行為具有重要的意義。有研究報道，子宮內(nèi)膜隨卵巢激素的變化而發(fā)生周期性的變化，在一個生理周期中，Ki67在增生期子宮內(nèi)膜中有表達，而在分泌期內(nèi)膜中表達則明顯減少［10］。

Ki67在除了G0期和G1期之外的所有細胞周期中都有表達，定位在細胞核，與細胞的合成代謝有關，其表達的高低反映了細胞增殖的程度。

二、PELP1的表達與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征之間的關系

本研究發(fā)現(xiàn)，PELP1蛋白定位于腫瘤細胞核中，與有關文獻報道中不一致［8］。而關于PELP1蛋白的表達與子宮內(nèi)膜癌各臨床病理特征之間的關系尚未見報道。本研究應用免疫組織化學法檢測PELP1蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達，結果顯示，其表達強度在高分化子宮內(nèi)膜癌中明顯低于中低分化組，差異具有顯著統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)，早期患者PELP1的表達強度低于晚期患者，其差異具有顯著統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)，另外在深肌層浸潤的患者中，PELP1的表達量高于淺肌層者 (P＜0.01)，上述結果說明，PELP1的表達與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和進展密切相關，腫瘤的進展越快、惡性程度越高，PELP1的表達量越高，提示PELP1可能成為判斷子宮內(nèi)膜癌患者病情進展的指標。

本研究亦顯示，對于宮頸管受累、雙附件轉移及腹水陽性的患者，PELP1的表達明顯高于陰性患者，有淋巴結轉移者高于無淋巴結轉移者，而臨床病理分期及淋巴結轉移是影響子宮內(nèi)膜癌預后的主要因素，由此可見，PELP1的表達與子宮內(nèi)膜癌患者的預后密切相關，其表達量越高，預后越差，提示PELP1可能成為判斷子宮內(nèi)膜癌患者預后的指標。

PELP1作為一種ER共激活因子，調(diào)節(jié)ER的基因組和非基因組途徑［11－12］，其在正常子宮內(nèi)膜的周期性變化中起重要作用，也與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機制有關。但本研究發(fā)現(xiàn)PELP1的表達強度與在ER、PR的不同表達之間無差異，該結果可能與選取的樣本量過少有關。

三、Ki67的表達與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征之間的關系

本研究顯示，隨著子宮內(nèi)膜癌分化程度的降低、手術－病理分期的進展，Ki67的表達強度增加。有淋巴結轉移者，Ki67的表達強度高于無淋巴結轉移者，表明Ki67可能成為評價子宮內(nèi)膜癌增殖、分化及判斷預后的指標。本研究結果與多項研究結果一致［13－15］。

四、PELP1和Ki67蛋白的表達在子宮內(nèi)膜癌中的相互關系

本研究結果顯示，PELP1和Ki67蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的的表達呈正相關，可能在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和進展中起協(xié)同作用，但其共同作用的機制尚不明確，由于本實驗選取的病例數(shù)較少，結果可能有所偏倚，尚有待進一步大樣本的研究證實。

聯(lián)合檢測PELP1和Ki67兩種蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達，可能成為判斷子宮內(nèi)膜癌的生物學行為及預后的指標，且可能對個體化治療提供依據(jù)。另外二者具有協(xié)調(diào)作用，如能同時對其進行基因水平的干預，可能對腫瘤的生物學行為具有更強的抑制作用，從而顯著提高子宮內(nèi)膜癌的臨床治療效果。

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