ABO血型初篩錯誤及微柱凝膠法正反定型不相符原因分析

龐衛(wèi)花　徐娜　楊敬芳　安和兵　李金巍

075100　河北省張家口市，河北北方學院附屬第二醫(yī)院檢驗科(龐衛(wèi)花、楊敬芳、安和兵、李金巍)，婦產(chǎn)科(徐娜)

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·論著·

ABO血型初篩錯誤及微柱凝膠法正反定型不相符原因分析

龐衛(wèi)花徐娜楊敬芳安和兵李金巍

075100河北省張家口市，河北北方學院附屬第二醫(yī)院檢驗科(龐衛(wèi)花、楊敬芳、安和兵、李金巍)，婦產(chǎn)科(徐娜)

【摘要】目的分析ABO血型初篩錯誤及微柱凝膠法正反定型不相符的原因。方法對2012年4月至2014年4月共計3 000例患者、送檢血樣及獻血員標本進行ABO血型初篩，并應用微柱凝膠法進行ABO血型正反定型實驗，分析初篩錯誤及正反定型不相符的主要原因。結(jié)果3 000例標本中初篩錯誤4例，錯誤率0.13%，其中造成初篩定型錯誤的原因中人為因素2例，試劑效價降低1例，冷凝集素1例。正反定型結(jié)果不相符100例，不相符率3.33%，其中因為疾病因素引起75例，占75%，因為亞型因素引起16例，占16%，其它相關治療因素引起9例，占9%。結(jié)論加強對操作人員責任心和專業(yè)技能培訓、規(guī)范操作流程、做好試劑的保存和質(zhì)控工作，能夠有效降低血型初篩錯誤率。微柱凝膠法ABO血型鑒定正反定型不符主要由疾病因素及亞型因素引起，在實際工作中可結(jié)合血清學技術(shù)，確認正確的ABO血型，從而有效減少或預防臨床輸血反應的發(fā)生，保證臨床輸血安全。

【關鍵詞】ABO血型；初篩錯誤；微柱凝膠法；正反定型

ABO血型檢測是直接關系到患者健康和安危的重要措施。輸血時若血型不合會使輸入的紅細胞(RBC)發(fā)生凝集，引起血管阻塞和血管內(nèi)大量溶血，造成嚴重后果。通過研究和輸血有關的死亡病例發(fā)現(xiàn)，有一半以上患者的死因與輸入ABO不相容的血液有直接或者間接關系，其中有1/3是因為ABO血型鑒定有誤造成的。由此可見血型檢測與輸血反應密切相關，在輸血前必須作血型鑒定。而ABO血型正反定型相符是ABO血型鑒定關鍵所在。但受人為因素、環(huán)境因素等影響，ABO血型初篩及正反定型結(jié)果存在一定錯誤率[1,2]。因此，有必要查明引起ABO血型初篩及正反定型不相符的原因，以獲得ABO血型的準確定型。本研究分析了我院2年內(nèi)住院患者、送檢血樣及獻血員標本進行ABO血型初篩，并對其中出現(xiàn)的ABO血型正反定型不一致標本結(jié)合臨床及常規(guī)血型血清學技術(shù)做進一步鑒定，對結(jié)果進行統(tǒng)計分析，探討影響ABO血型鑒定準確性的各種因素，旨在從根本上減少或預防臨床輸血反應的發(fā)生，提高ABO血型鑒定的準確性，保證臨床輸血安全[3,4]。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年4月至2014年4月醫(yī)院門診3 000例患者、送檢血樣及獻血員標本，送本院檢驗科進行ABO血型鑒定。其中男1 800例，女1 200例；年齡5～85歲，平均年齡(38.7±12.4)歲。白血病患者325例，多發(fā)性骨髓瘤患者91例，骨髓纖維化患者24例，貧血患者288例，腸癌患者164例，消化道出血患者270例，外科手術(shù)患者269例，以及其它相關疾病患者。

1.2試劑抗A、抗B血清購自上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司。ABO、RhD血型定型試劑卡購自長春博訊生物技術(shù)有限責任公司。ABO標準紅細胞有本科室制備。

1.3儀器免疫微柱離心機、卡式專用離心機、免疫微柱孵育箱購自達亞美公司。

1.4血型鑒定方法

1.4.1ABO血型初篩:ABO血型正定型采用紙板法。

1.4.2ABO血型正反定型:使用長春博訊ABO、RhD血型定型試劑卡將全體血樣標本進行ABO血型正反定型，篩選出正反定型不符的標本。對此初次出現(xiàn)正反定型不符的標本重新采集，并嚴格按照微柱凝膠卡操作規(guī)程重復試驗，以排除人為因素及技術(shù)失誤。對重新采集的血樣，留取唾液做進一步的血型物質(zhì)鑒定。

1.4.3ABO血型正反定型不相符的進一步鑒定:考察排除人為因素后的正反定型不符標本，將其中正定型[抗A和(或)抗B]呈現(xiàn)陰性結(jié)果及混合凝集的紅細胞標本進行吸收放散試驗，從而確定受檢標本A、B抗原，結(jié)合正定結(jié)果明確抗原改變引起正反定型不符。采用常規(guī)血型血清學技術(shù)對上述確定抗原改變引起正反定型不符標本正確定型。唾液血型物質(zhì)檢測，紅細胞H物質(zhì)活性檢測，試管法檢測紅細胞與抗A1及抗AB的凝集強度。

1.5鑒定標準一系列鑒定檢測均參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》和《臨床輸血診療技術(shù)》進行。

2結(jié)果

2.1ABO血型初篩結(jié)果3 000例患者ABO血型初篩正確2 896例，準確率96.53%，血型錯誤4例，錯誤率0.13%。見表1。

表1　ABO血型初篩錯誤4例及原因分類

2.2ABO血型正反定型結(jié)果3 000例患者ABO血型正反定型不相符100例，不相符率3.33%，并且我們通過一系列鑒定檢測證實，ABO血型鑒定正反不相符的主要原因是疾病因素和亞型因素，除此之外還有其它治療相關因素的影響。100例正反定型不符的標本中因為疾病相關因素引起75例，占75%，因為亞型相關因素引起16例，占16%，其他治療因素引起9例，占9%。見表2、3。

表2　ABO血型鑒定正反定型不相符100例

表3　ABO血型鑒定正反不相符100例原因分類

3討論

本次調(diào)查的本院3 000例患者、送檢血樣及獻血員標本，ABO血型初篩錯誤4例，錯誤率0.13%，主要原因：(1)人為因素：本次調(diào)查判斷錯誤2例，說明人為因素是造成ABO血型初篩錯誤的主要原因，與毛桂平[5]報道一致。人為因素主要包括：操作人員粗心大意，責任心不強，專業(yè)技能不過硬等原因?qū)е驴笰、抗B標準血清滴錯；試管條碼勾錯；樣本加入錯誤；離心速度不適當(過度或不夠)等；(2)環(huán)境因素：夏季氣溫高，加之試劑放置時間長容易造成試劑效價下降；冬季氣溫低則易導致強冷凝集素出現(xiàn)，造成假凝集現(xiàn)象[6]；(3)抗原抗體比例不合適、反應時間不充足從而導致錯誤判斷；(4)個別患者紅細胞A抗原或B抗原極度弱化，與抗A或抗B標準血清的反應會非常弱，以至于不會發(fā)生凝集，從而導致肉眼判斷錯誤[7]。

微柱凝膠法作為一種新式血型血清學的技術(shù)，在常規(guī)血型鑒定方面，因為其反應結(jié)果可靠與易于標準化，以及特異性強等特點，被西方國家廣泛用于臨床的常規(guī)紅細胞血型血清學檢測。美國食品及藥品管理局(food and drug administ ration，F(xiàn)DA)已批準微柱凝膠技術(shù)作為紅細胞抗體檢測及ABO和RhD血型鑒定的選用方法。微柱凝膠法因為抗原抗體量是恒定的，操作標準化，所以對ABO亞型、弱抗原的反應強度高于傳統(tǒng)的試管法，具有獨特的優(yōu)勢，目前國內(nèi)也已逐步應用于臨床。本次研究采用微柱凝膠法進行ABO血型正反定型檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)正反定型不相符100例，不相符率3.33%。結(jié)合臨床及常規(guī)血型血清學技術(shù)，我們進一步進行ABO血型正反定型的鑒定，結(jié)果顯示疾病因素和亞型因素是導致ABO血型鑒定正反不相符的主要原因。

首先是疾病因素影響。近年來，國內(nèi)已有多篇由于疾病引起血型抗原性減弱，從而出現(xiàn)ABO血型正反定型不相符的報道，而由白血病等血液系統(tǒng)疾病造成的血型正反定型不相符居大多數(shù)，幾乎占到了80%左右。本研究顯示，在100例ABO血型正反定型不符的患者中，75例因為相關一些疾病因素所造成，占75%。由此可見，在研究ABO血型正反定型不相符的因素時，疾病因素占主要部分。特別是一些白血病的患者中，這種因素就顯現(xiàn)的更為突出。醫(yī)療人員在治療急性髓細胞性白血病(AML)過程中發(fā)現(xiàn)有少數(shù)患者存在紅細胞ABO血型正反定型不相符，這與紅細胞ABO血型抗原表達強度明顯減弱有關，然而迄今為止有關的機制研究尚未明確[8-10]。目前主要認為白血病時由于基因突變導致H轉(zhuǎn)移酶缺乏或其合成受抑，從而導致血型抗原性減弱；或者白細胞病理性增生，紅細胞增生相對受抑，這也造成血型抗原性減弱。因此，惡性腫瘤和紅細胞生成異常均會造成血型抗原性減弱，且惡性腫瘤患者由于惡病質(zhì)引發(fā)的貧血也使紅細胞數(shù)量減少，這種情況下血型抗原性出現(xiàn)降低。此外，惡性腫瘤時唾液粘蛋白產(chǎn)生過多，遮蓋了紅細胞表面的原位點而導致血型抗原性減弱，以上諸多因素最終導致ABO血型正反不相符。本實驗研究中顯示，100例ABO血型正反定型不符的患者中，因為急性髓細胞性白血病而引起53例。這種情況，不僅出現(xiàn)在急性白血病中，在自身免疫性溶血性貧血患者中也再次得到驗證。有自身免疫性溶血性貧血的患者血液冷凝集素增高，造成了自身紅細胞的凝集。我們通過低倍鏡下觀察到紅細胞呈簇團狀堆積，凝集后難于鑒別，且在低溫下這種想象更明顯，從實驗來看，一般溫度在0～4℃時最明顯，而隨著溫度升高，會不易觀察到，當溫度達到37℃時，凝集現(xiàn)象大部分消失。然而，極少數(shù)情況下即使在37℃情況下仍可出現(xiàn)紅細胞的凝集。所以在實驗研究中，對于這類患者都要在37℃溫鹽水清洗3次之后再進行實驗，且室溫要控制在20℃以上，同時，還要配合顯微鏡觀察。上面實驗研究中顯示，100例ABO血型不符的患者中，因為自身免疫溶血性貧血而引起8例，所以各種疾病因素對ABO血型鑒定正反不相符的影響不容小視。

其次是亞型因素的影響。通過分析了解臨床上的一些疾病能夠?qū)е翧BO抗原的減弱或者缺乏，例如白血病等。但是，在正常獻血者中也會出現(xiàn)抗原減弱的情況，如ABO亞型。ABO亞型又叫做ABO變異型，也會造成抗原的減弱從而血型鑒定造成了困難。ABO血型亞型主要通過血型血清學試驗鑒別，是以抗原性減弱為主要特征的多種表型，同人類正常血型抗原一樣，它是一個人的終生遺傳標志[11,12]。ABO亞型因為紅細胞所攜帶的A或B抗原數(shù)量較少，和抗A或抗B反應非常弱，以至于不會發(fā)生凝集，所以經(jīng)常會使弱A、或者弱B錯誤判定成為O型，導致了血型鑒定不正確。A或B亞型，如果將弱A、或者弱B的紅細胞輸送給O型的受血者時，就會出現(xiàn)溶血性的輸血反應發(fā)生。ABO血型正反定型不符，對于正常獻血員應首先考慮亞型，但對于患者則應綜合臨床情況考察，不能輕易做出亞型的結(jié)論。上面實驗研究中顯示，100例ABO血型不符的患者中，16例是因為亞型因素導致的ABO血型鑒定正反不相符，實驗中發(fā)現(xiàn)的亞型，正定型時類似于O型，而反定型時又類似于A型，醫(yī)療人員經(jīng)過細致的血清檢測，最后確定其為Am亞型。所以無論是因為疾病因素影響，還是因為亞型因素影響而導致的正反不相符，都需要密切結(jié)合臨床及血清學的特點，進行正反定型的聯(lián)合應用，才可以準確判斷出原因。在實際工作中可利用相比常規(guī)方法更敏感的微柱凝膠法，結(jié)合血清學技術(shù)對其篩選鑒別并正確鑒定血型，從而提高其血型定型準確性[13,14]。

為有效減少或預防臨床輸血反應的發(fā)生，提高ABO血型定型的準確性，保證臨床輸血安全，我們認為應針對原因采取以下措施：(1)對于人為因素導致的ABO血型鑒定錯誤，操作人員應具備高度的責任心，不斷提高自身專業(yè)技能，在實際工作中應耐心細致，正確使用儀器，并定期維護保養(yǎng)儀器，從而保證儀器性能的穩(wěn)定性；(2)盡量保證環(huán)境溫度和濕度穩(wěn)定，使用高效價的抗A、抗B標準血清，適當保存試劑，每次操作前仔細檢測試劑批號、質(zhì)量及是否在效期內(nèi)，避免試劑污染、失效；(3)制訂一套嚴格質(zhì)量控制程序，本站實驗室目前采用留樣再測方法進行血型質(zhì)量控制，操作人員應嚴格規(guī)范操作流程，盡量避免ABO血型鑒定錯誤。

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doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.11.025

【中圖分類號】R 457.1

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002-7386(2016)11-1682-03

(收稿日期：2015-12-12)