通心絡(luò)聯(lián)合外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植對糖尿病足大鼠血管新生磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信號通路的影響研究

郭勇英，位 庚，李紅蓉，田 超，張軍芳，高懷林

050000 河北省石家莊市，河北省中醫(yī)院醫(yī)務(wù)處(郭勇英)；河北省絡(luò)病重點實驗室(郭勇英，位庚，李紅蓉)；河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院(位庚，李紅蓉)；河北以嶺醫(yī)藥研究院(田超，張軍芳)；河北醫(yī)科大學(xué)附屬以嶺醫(yī)院內(nèi)分泌科，河北省中醫(yī)藥絡(luò)病理論指導(dǎo)糖尿病足防治重點研究室(高懷林)

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通心絡(luò)聯(lián)合外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植對糖尿病足大鼠血管新生磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信號通路的影響研究

郭勇英，位 庚，李紅蓉，田 超，張軍芳，高懷林

050000 河北省石家莊市，河北省中醫(yī)院醫(yī)務(wù)處(郭勇英)；河北省絡(luò)病重點實驗室(郭勇英，位庚，李紅蓉)；河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院(位庚，李紅蓉)；河北以嶺醫(yī)藥研究院(田超，張軍芳)；河北醫(yī)科大學(xué)附屬以嶺醫(yī)院內(nèi)分泌科，河北省中醫(yī)藥絡(luò)病理論指導(dǎo)糖尿病足防治重點研究室(高懷林)

【摘要】目的探討通心絡(luò)聯(lián)合外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植對糖尿病足大鼠血管新生磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信號通路的影響。 方法于2014年3月，選取無特定病原體(SPF級)雄性SD大鼠70只，10只為對照組；60只制作糖尿病足大鼠模型，然后隨機分為模型組、西洛他唑組、通心絡(luò)組、外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組、西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組、通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組各10只。完成相應(yīng)實驗操作28 d后，檢測并比較各組大鼠的外周血間充質(zhì)干細(xì)胞及缺血下肢肌組織中的內(nèi)皮糖蛋白(CD)105、細(xì)胞周期蛋白(cyclinD1)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)表達水平。結(jié)果通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組大鼠的干細(xì)胞數(shù)、積分光密度高于外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組、西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組大鼠的干細(xì)胞數(shù)、積分光密度高于外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。6個造模組大鼠缺血下肢肌組織中CD105、cyclinD1、p-Akt表達水平低于對照組，p-GSK-3β表達水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；5個用藥組大鼠缺血下肢肌組織中CD105、cyclinD1、p-Akt表達水平高于模型組，p-GSK-3β表達水平低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組大鼠缺血下肢肌組織中CD105、cyclinD1、p-Akt表達水平高于西洛他唑組、通心絡(luò)組、外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組，p-GSK-3β表達水平低于西洛他唑組、通心絡(luò)組、外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論通心絡(luò)聯(lián)合外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植可以通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號通路，促進內(nèi)皮細(xì)胞增殖、分化，從而促進糖尿病足大鼠的新生血管形成。

【關(guān)鍵詞】糖尿病足；通心絡(luò)；間質(zhì)干細(xì)胞移植；血管生成

郭勇英，位庚，李紅蓉，等.通心絡(luò)聯(lián)合外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植對糖尿病足大鼠血管新生磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信號通路的影響研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2016，19(13)：1602-1606.[www.chinagp.net]

Guo YY,Wei G,Li HR,et al.Influence of tongxinluo combined with peripheral blood derived mesenchymal stem cells transplantation on the angiogenesis through PI3K/Akt signal pathway of diabetic foot rats[J].Chinese General Practice，2016，19(13)：1602-1606.

糖尿病足(DF)是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，關(guān)鍵治療環(huán)節(jié)為促進缺血狀態(tài)下治療性血管新生和有效側(cè)支循環(huán)建立，進而改善缺血狀態(tài)[1]。血管新生是一個較為復(fù)雜的過程，可分為早、晚期兩個階段。早期包括血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)的前體細(xì)胞分化、增殖、遷移，融合成初期血管網(wǎng)絡(luò)；晚期包括血管芽生、分支，形成小血管，血管支持細(xì)胞(如平滑肌細(xì)胞)分泌、充實在新生血管周圍，進而在原有血管基礎(chǔ)上形成新的成熟血管[2-3]。本課題組前期研究結(jié)果表明，外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植，可以增加糖尿病足大鼠缺血下肢的血流灌注量，促進側(cè)支循環(huán)建立[4]。而通心絡(luò)可以改善糖尿病足大鼠的心肌梗死區(qū)微環(huán)境，增加干細(xì)胞移植后存活率[5]，促進血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達，增加新生血管和側(cè)支循環(huán)建立[6]，增加缺血下肢的血流灌注量[4]。本研究旨在探討通心絡(luò)聯(lián)合外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植對糖尿病足大鼠血管新生磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信號通路的影響，以探討其涉及的分子機制，為糖尿病并發(fā)癥的臨床治療提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1實驗動物于2014年3月，選取無特定病原體(SPF級)雄性SD大鼠70只，4周齡，體質(zhì)量190～230 g，由中國食品藥品檢定研究院提供〔實驗動物許可證號：SCX K(京)2009-0017；合格證號：11400500002012〕；另選取清潔級雄性SD大鼠10只，15周齡，體質(zhì)量300 g左右，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供〔實驗動物許可證號：SCXK(京)2012-0001；合格證號：11400700026920〕。

1.2實驗室藥品及設(shè)備(1)藥品：通心絡(luò)原粉(人參、水蛭、全蝎、蜈蚣、蟬蛻、赤芍、冰片等組成)，由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供(生產(chǎn)批號：20120924)；西洛他唑片，由浙江大冢制藥有限公司提供(生產(chǎn)批號：130801P)。藥品配制和保存方法見本課題組前期研究[4]。(2)試劑：鏈脲佐菌素(STZ)由美國Amresco公司提供(生產(chǎn)批號：1262C443)，重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)由深圳新鵬生物工程有限公司提供(生產(chǎn)批號：201302009)，細(xì)胞處理試劑盒和4、6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚(DAPI)由河北博海生物工程開發(fā)有限公司提供(生產(chǎn)批號：20140428、20130808)，內(nèi)皮糖蛋白(CD)90、CD105、CD49A、CD49B、CD49C、CD29、CD104及CD105-熒光素(FITC)、CD44-FITC、CD34-FITC由德國美天旎公司提供(生產(chǎn)批號：30.APR.2013)，CD105單克隆抗體、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)抗嗎啡多克隆抗體IgG、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)抗嗎啡多克隆抗體IgG、細(xì)胞周期蛋白(cyclinD1)兔單克隆抗體均由美國Abcam公司提供(生產(chǎn)批號：ab137875、ab5626、ab75745、ab137875)。(3)設(shè)備和器材：AL204精密分析天平由瑞士梅特勒-托利多公司提供，CTR6000熒光顯微鏡、CM1950型切片機由德國Leica公司提供，干細(xì)胞磁性分選架、分選器、分選柱由德國美天旎公司提供，170-930型電轉(zhuǎn)膜儀、170-3940型半干轉(zhuǎn)膜儀、165-8001型垂直電泳儀由美國Bio-Rad公司提供。

1.3方法70只SPF級雄性SD大鼠中，10只為對照組；60只制作糖尿病足大鼠模型，然后隨機分為模型組、西洛他唑組、通心絡(luò)組、外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組、西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組、通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組各10只。

1.3.1模型方法參考文獻[5-6]，高脂喂養(yǎng)大鼠8周，熱量配比為脂肪59.8%，碳水化合物20.1%，蛋白質(zhì)20.1%；禁食16 h后，造模組以35 mg/kg腹腔注射STZ，對照組注入同體積枸櫞酸鈉緩沖溶液；以72 h后尾尖血糖>16.7 mmol/L為造模成功。

1.3.2灌胃方法通心絡(luò)組、通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組大鼠以通心絡(luò)(0.4 g/kg，1 次/d)灌胃，西洛他唑組、西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組大鼠以西洛他唑(18 mg/kg，1 次/d)灌胃，對照組、模型組、外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組大鼠以等體積0.9%氯化鈉溶液灌胃。

1.3.3手術(shù)方法(1)同源異體供體大鼠的外周血間充質(zhì)干細(xì)胞分離方法見課題組前期研究[4]。(2)腹腔注射10.0%水合氯醛進行麻醉；將大鼠仰臥固定，備皮消毒；縱行切開右側(cè)腹股溝正中皮膚，分離腹股溝下股動、靜脈，結(jié)扎并剪斷；創(chuàng)口處局部涂撒青霉素，并進行皮膚縫合。(3)術(shù)后3 d，外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組、西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組、通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組大鼠，沿股動脈多點肌肉注射進行干細(xì)胞移植(1.0×106/ml)，對照組、模型組、通心絡(luò)組、西洛他唑組大鼠，同點肌肉注射等體積無菌洛斯維(RPMI)-1640培養(yǎng)基。

1.4檢測指標(biāo)及方法

1.4.1外周血間充質(zhì)干細(xì)胞檢測術(shù)后28 d，取干細(xì)胞移植治療大鼠的肌中段，避光情況下行冷凍切片，厚度為12 μm；室溫下干燥1 h，以紫外光激發(fā)下干細(xì)胞細(xì)胞核發(fā)出藍色熒光為DAPI標(biāo)記成功(見圖1)。由實驗室人員采用Image-Pro Plus5.0(IPP)圖像處理分析軟件，計算各組大鼠的干細(xì)胞數(shù)、熒光強度B、積分光密度[7]。

注：DAPI=4、6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚

圖1外周血間充質(zhì)干細(xì)胞的DAPI標(biāo)記

Figure 1DAPI marking of PB-MSCs

1.4.2CD105、cyclinD1、p-Akt、p-GSK-3β表達水平檢測將大鼠缺血下肢肌組織加入組織裂解液，勻漿；4 ℃下，以8 000 r/min離心10 min，離心半徑為10 cm，分離上清液。取各組蛋白樣品進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，具體操作方法參照課題組前期研究[4]。蛋白印跡(Western blotting)法檢測各組大鼠的CD105、cyclinD1、p-Akt、p-GSK-3β表達水平，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)參照。

2結(jié)果

2.13組大鼠外周血間充質(zhì)干細(xì)胞檢測結(jié)果比較3組進行了外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植大鼠的干細(xì)胞數(shù)、積分光密度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其中，通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組與外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組、西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組與外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

2.27組大鼠缺血下肢肌組織中CD105、cyclinD1、p-Akt、p-GSK-3β表達水平比較7組大鼠缺血下肢肌組織中CD105、cyclinD1、p-Akt、p-GSK-3β表達水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其中，6個造模組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組與5個用藥組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組與西洛他唑組、通心絡(luò)組、外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表2、圖2)。

Table1ComparisonofthedetectionresultsofPB-MSCsamongthethreegroups

組別例數(shù)干細(xì)胞數(shù)(×106/L)熒光強度B積分光密度外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組1016±4298±3西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組1021±4a2116±6a通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組1027±4ab2135±4abF值18.96-168.36P值<0.01-<0.01

注：-代表無此數(shù)據(jù)；與外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組比較，aP<0.05；與西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組比較，bP<0.05

Table2ComparisonoftheexpressionlevelsofCD105,cyclinD1,p-Aktandp-GSK-3βinischemiclowerlimbmuscletissueamongthesevengroups

組別例數(shù)CD105cyclinD1p-Aktp-GSK-3β對照組100.58±0.031.23±0.051.14±0.040.19±0.04模型組100.08±0.02a0.36±0.01a0.17±0.02a1.12±0.11a西洛他唑組100.32±0.07ab0.47±0.03ab0.67±0.04ab0.68±0.01ab通心絡(luò)組100.33±0.03ab0.55±0.09abc0.71±0.03ab0.70±0.05ab外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組100.41±0.01abcd0.63±0.02abcd0.82±0.02abcd0.63±0.06abd西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組100.48±0.02abcde0.89±0.04abcde0.96±0.08abcde0.53±0.01abcde通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組100.49±0.02abcde0.93±0.03abcde1.02±0.05abcde0.49±0.03abcdeF值231.83452.30515.85262.36P值<0.01<0.01<0.01<0.01

注：CD105=內(nèi)皮糖蛋白105，cyclinD1=細(xì)胞周期蛋白，p-Akt=磷酸化蛋白激酶B，p-GSK-3β=磷酸化糖原合成酶激酶-3β；與對照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與西洛他唑組比較，cP<0.05；與通心絡(luò)組比較，dP<0.05；與外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組比較，eP<0.05

注：A=對照組，B=模型組，C=通心絡(luò)組，D=西洛他唑組，E=外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組，F(xiàn)=通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組，G=西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組；CD105=內(nèi)皮糖蛋白105，cyclinD1=細(xì)胞周期蛋白，p-GSK-3β=磷酸化糖原合成酶激酶-3β，p-Akt=磷酸化蛋白激酶B，GAPDH=甘油醛-3-磷酸脫氫酶

圖27組大鼠缺血下肢肌組織中CD105、cyclinD1、p-Akt、p-GSK-3β表達

Figure 2Expression of CD105,cyclinD1,p-Akt and p-GSK-3β in ischemic lower limb muscle tissue among the seven groups

3討論

糖尿病患者存在長期的糖脂代謝紊亂和氧化應(yīng)激引起的內(nèi)皮功能損害，導(dǎo)致其血管功能障礙，從而引發(fā)動脈粥樣硬化，血管壁彈性減弱、管腔阻塞或狹窄，累及下肢遠端動脈，最終導(dǎo)致肢體遠端血液循環(huán)障礙，肢端缺血低氧，形成糖尿病足，嚴(yán)重者甚至可能會出現(xiàn)潰爛、壞疽[8-9]。長期的高血糖狀態(tài)不僅會導(dǎo)致血管病變，發(fā)生嚴(yán)重缺血事件，也會嚴(yán)重?fù)p傷側(cè)支血管的形成能力[10]。因此，糖尿病足的臨床治療關(guān)鍵為促進缺血狀態(tài)下的血管新生和側(cè)支循環(huán)形成。

目前，臨床上常用的糖尿病足治療方法有藥物治療、外科手術(shù)治療及血管腔內(nèi)治療，但目前尚缺乏對遠端流出道嚴(yán)重狹窄患者的有效治療方法。西洛他唑具有明顯的抗血小板聚集和擴張血管作用，可以防止血栓形成和血管閉塞，臨床上常被應(yīng)用于糖尿病足患者的微循環(huán)改善治療。干細(xì)胞是一類具有自我復(fù)制和多向分化潛能的細(xì)胞，能產(chǎn)生表現(xiàn)型和基因型與本身完全相同的子細(xì)胞。隨著干細(xì)胞移植技術(shù)在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展，外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植逐漸成為糖尿病足患者的臨床治療新方法。根據(jù)干細(xì)胞可以分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞、形成新生血管的原理，可以將外周血間充質(zhì)干細(xì)胞分離出來，移植到患者的缺血下肢，使其逐漸分化形成新生血管，建立側(cè)支循環(huán)，從而改善和恢復(fù)缺血下肢血流，達到治療糖尿病足的目的。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，消渴日久，氣陰兩虛，脈絡(luò)瘀阻，血行不暢，肢端失養(yǎng)，久病入絡(luò)，可誘發(fā)消渴脫疽。脈絡(luò)學(xué)說對血管病變的防、治均有重要的指導(dǎo)作用，其根據(jù)中醫(yī)脈與血管、脈的分支脈絡(luò)與中小血管、脈絡(luò)末端的孫絡(luò)與微血管、微循環(huán)在解剖形態(tài)學(xué)和生理功能方面的高度相關(guān)性，提出了“脈絡(luò)-血管系統(tǒng)病”概念[11]。糖尿病足是糖尿病日久累及肢體大、中、小、微血管的一類并發(fā)癥，屬中醫(yī)“消渴脫疽”范疇，故糖尿病足亦屬于“脈絡(luò)-血管系統(tǒng)病”研究范疇。在以脈絡(luò)“不通”為實質(zhì)的共性發(fā)病機制中，依據(jù)“絡(luò)以通為用”的治療總則，而通心絡(luò)是通絡(luò)藥物的代表方藥。既往研究結(jié)果表明，通心絡(luò)具有促進雞胚絨毛尿囊膜(CAM)和腦缺血后血管新生的作用[12-13]。

血管新生指內(nèi)皮細(xì)胞在原有血管的基礎(chǔ)上，出現(xiàn)增殖、遷移、重塑，從而形成新血管的過程[14]。常用標(biāo)志物包括CD34、CD31、CD105、CD146等。CD105可以調(diào)節(jié)內(nèi)皮-間質(zhì)的信號傳遞，參與血管生成過程，與泛內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物(如CD31、CD34相關(guān)抗原)不同的是，CD105僅在處于增殖狀態(tài)的血管內(nèi)皮細(xì)胞中高表達，而在正常組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞中無或僅有微弱表達[15-17]，故其可作為新生血管的重要標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，模型組大鼠肌組織中的CD105表達明顯降低，說明糖尿病足大鼠的新生血管受到抑制，新生血管數(shù)量不足。在血管堵塞不易開通的情況下，側(cè)支循環(huán)數(shù)量減少，新生血管數(shù)量不足，血供減少是糖尿病足患者創(chuàng)口不易愈合的重要原因。本研究中，與模型組相比，各用藥組大鼠肌組織中的CD105表達水平均升高，且通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組大鼠肌組織中的CD105水平高于通心絡(luò)組、西洛他唑組及外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組。術(shù)后28 d，通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組大鼠的干細(xì)胞數(shù)和積分光密度優(yōu)于外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組和西洛他唑+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組，說明通心絡(luò)聯(lián)合干細(xì)胞移植治療可以增加糖尿病足大鼠的新生血管數(shù)量，改善血供情況。

PI3K/Akt信號通路的激活主要發(fā)揮抗凋亡、促進內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移的保護作用，既往研究結(jié)果表明，激活的PI3K/Akt信號通路可能在干細(xì)胞生長、存活及增殖中扮演重要角色[18-21]。本研究中，與對照組比較，模型組大鼠肌組織中的p-GSK-3β水平較高，p-Akt、cyclinD1水平較低；與模型組比較，各用藥組大鼠肌組織中的p-GSK-3β表達水平降低，p-Akt、cyclinD1表達水平升高，且通心絡(luò)+外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植組大鼠肌組織中p-GSK-3β表達水平較低，cyclinD1、p-Akt表達水平較高。提示通心絡(luò)聯(lián)合外周血間充質(zhì)干細(xì)胞移植具有促進糖尿病足大鼠血管新生的作用，其可能是通過激活PI3K/Akt信號通路，上調(diào)p-Akt、抑制p-GSK-3β表達，進而上調(diào)cyclinD1表達，來促進血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移以及局部缺血區(qū)新生血管形成的。

作者貢獻：郭勇英進行實驗設(shè)計與實施、撰寫論文、成文并對文章負(fù)責(zé)；位庚、李紅蓉、田超進行實驗實施；張軍芳進行實驗評估、資料收集；高懷林進行質(zhì)量控制與審校。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：王鳳微)

Influence of Tongxinluo Combined With Peripheral Blood Derived Mesenchymal Stem Cells Transplantation on the Angiogenesis Through PI3K/Akt Signal Pathway of Diabetic Foot Rats

GUOYong-ying,WEIGeng,LIHong-rong,etal.

MedicalDepartment,HospitalofTraditionalChineseMedicineofHebeiProvince,Shijiazhuang050000,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the influence of tongxinluo(TXL) combined with peripheral blood derived mesenchymal stem cells(PB-MSCs) transplantation on the angiogenesis through PI3K/Akt signal pathway of diabetic foot rats.MethodsIn March 2014,we selected 70 SPF male SD rats,and assigned 10 rats into control group and built the rest 60 rats into diabetic foot rat models.Then the model rats were randomly divided into 6 groups:model group,cilostazol group,TXL group,PB-MSCs group,TXL combined PB-MSCs(T-MSCs) group and cilostazol combined PB-MSCs(C-MSCs) group,with 10 rats in each group.28 days after the completion of corresponding operation,PB-MSCs and the expression levels of CD105,cyclinD1,p-Akt and p-GSK-3β and in ischemic lower limb muscle tissue were detected and compared.ResultsT-MSCs group was higher than PB-MSCs group and C-MSCs group in the number of PB-MSCs and integral optical density(P<0.05);C-MSCs group was higher than PB-MSCs group in the number of PB-MSCs and integral optical density(P<0.05).The 6 model groups were lower than control group in the expression levels of CD105,cyclinD1,p-Akt,and were higher than control group in the expression level of p-GSK-3β(P<0.05);the 5 groups that were administrated with drugs were higher than model group in the expression levels of CD105,cyclinD1 and p-Akt,but were lower than model group in the expression level of p-GSK-3β(P<0.05);T-MSCs group was higher than cilostazol group,TXL group and PB-MSCs group in the expression levels of CD105,cyclinD1 and p-Akt,and was lower than cilostazol group,TXL group and PB-MSCs group in the expression of p-GSK-3β(P<0.05).ConclusionTXL combined with PB-MSCs transplantation may promote the endothelial cell proliferation and differentiation by regulating PI3K/Akt signaling pathway,thus facilitating the angiogenesis of diabetic foot rats.

【Key words】Diabetic foot;Tongxinluo;Mesenchymal stem cell transplantation;Angiogenesis

基金項目：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863計劃)項目(2011AA020115)；國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(973計劃)項目(2012CB518606)；河北省中醫(yī)藥管理局科研計劃項目(2014082)

通信作者：高懷林，050000 河北省石家莊市，河北醫(yī)科大學(xué)附屬以嶺醫(yī)院內(nèi)分泌科，河北省中醫(yī)藥絡(luò)病理論指導(dǎo)糖尿病足防治重點研究室；E-mail：gaohuailin@126.com

【中圖分類號】R 587.29

【文獻標(biāo)識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.13.029

(收稿日期：2016-01-03；修回日期：2016-03-24)

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