苯酞類化合物的制備及其抑制胰脂肪酶活性研究?

段良興, 宋姍姍， 劉　軍， 劉　振， 王玉明， 萬升標(biāo)

(中國(guó)海洋大學(xué)醫(yī)藥學(xué)院， 山東 青島 266003)

研究簡(jiǎn)報(bào)

苯酞類化合物的制備及其抑制胰脂肪酶活性研究?

段良興, 宋姍姍， 劉軍， 劉振， 王玉明， 萬升標(biāo)?

(中國(guó)海洋大學(xué)醫(yī)藥學(xué)院， 山東 青島 266003)

摘要：奧利司他是到目前為止市場(chǎng)上唯一的脂肪酶抑制劑類減肥藥。本文參考奧利司他與胰脂肪酶的單晶復(fù)合物，通過計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)Docking方法，設(shè)計(jì)并合成了9個(gè)具有長(zhǎng)疏水側(cè)鏈的苯酞類新化合物。化合物結(jié)構(gòu)通過HRESIMS、1H NMR、13C NMR確證。對(duì)其抑制胃腸道胰脂肪酶的活性進(jìn)行了初步測(cè)定，1 mg/mL的化合物2，5，7對(duì)胰脂肪酶活性抑制率分別達(dá)到了49%，30%，35%。

關(guān)鍵詞：奧利司他； Docking方法； 苯酞類化合物； 減肥藥

引用格式： 段良興, 宋姍姍， 劉軍， 等.苯酞類化合物的制備及其抑制胰脂肪酶活性研究 [J]. 中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)， 2016, 46(5)： 90-94.

DUAN Liang-Xing, SONG Shan-Shan, LIU Jun, et al. Synthesis and inhibiting activities on pancreatic lipase of novel phthalide compounds [J]. Periodical of Ocean University of China, 2016, 46(5): 90-94.

苯酞類(Phthalides)小分子化合物具有很好的生理活性，廣泛存在于天然植物中，特別是正丁基苯酞(N-Butylphathlide)，能夠明顯的增加毛細(xì)血管數(shù)量，改善腦區(qū)的微循環(huán)，減輕腦水腫，改善腦區(qū)能量代謝，減少血栓，從而抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，達(dá)到治療腦缺血的目的[1-2]。

肥胖與癌癥之間可能存在著一定的聯(lián)系，包括乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、子宮頸癌以及黑素瘤等[3]。肥胖病是脂肪含量過多或分布異常的一種病態(tài)表現(xiàn)，是由多種原因引起的[4]。但大多數(shù)的正常人是通過飲食導(dǎo)致，90%的膳食脂肪以甘油三酯的形式進(jìn)入人體，一半以上的被胰脂肪酶所分解，被人體重新吸收并再次合成脂肪，導(dǎo)致肥胖。為此，開發(fā)胰脂肪酶抑制劑對(duì)于減肥藥的研究就具有重要的意義[5]。

奧利司他是一種新型的減肥藥，能夠不可逆的抑制胃腸道胰脂肪酶的活性，從而抑制食物中脂類物質(zhì)的消化和吸收，達(dá)到減肥的效果[6]。但是奧利司他的價(jià)格昂貴以及近年來不斷出現(xiàn)的肝損傷、胰腺炎、腎損傷等報(bào)告，使得奧利司他備受質(zhì)疑[7]。但已有資料未發(fā)現(xiàn)奧利司他與其他藥物間存在相互作用[8]。

本文應(yīng)用低毒、小分子的苯酞類化合物模擬奧利司他來設(shè)計(jì)胰脂肪酶抑制劑，因?yàn)楸教惢衔锝Y(jié)構(gòu)中有2個(gè)與奧利司他類似的疏水區(qū)，含有1個(gè)內(nèi)酯環(huán)，可以成鹽，提高溶解性。以苯酞類化合物作為優(yōu)勢(shì)骨架現(xiàn)在已經(jīng)開發(fā)成功了多個(gè)苯酞類藥物，如治療腦血管病的丁基苯酞、抗膽堿活性的藁本內(nèi)酯等。

1化合物設(shè)計(jì)及其合成實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

儀器JEOL JNM-EPC 500 核磁共振儀(內(nèi)標(biāo)為TMS)；Q-TOF Ultima TMGLOBAL 質(zhì)譜儀；X-4數(shù)字顯示顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀；Agilent 6890氣相色譜系統(tǒng)；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵；Laborota 4000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；IKA MS 3 digital 旋渦混勻器；BQ50-1J蠕動(dòng)泵；SHA-B水浴恒溫振蕩器；酶標(biāo)儀(Model680型)；BS 224 s電子天平；超生波細(xì)胞粉碎儀(JY92-IIN型)；計(jì)算機(jī)軟件SYBYL-X。

試劑2-羧基苯甲醛，AR：99%，北京百靈威科技有限公司；溴代正丁烷，AR：98%，上海晶純生化科技股份有限公司；苯酞，AR：99%，上海晶純生化科技股份有限公司；10% Pd/C(含水1%)國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；游離脂肪酸測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所；三油酸甘油酯、豬胰脂肪酶，美國(guó)Sigma公司；卵磷脂，天津市博迪化工有限公司；TG、TC試劑盒，中生北控生物科技股份有限公司；膽汁酸試劑盒，南京建成生物工程研究所；膽固醇，天津市博迪化工有限公司；豬膽鹽，中國(guó)惠興生化試劑有限公司；其他生化試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 化合物設(shè)計(jì)及其制備

1.2.1 化合物的設(shè)計(jì)奧利司他通過共價(jià)結(jié)合脂肪酶，從而抑制脂肪酶的活性[9]。通過分析胰脂酶與奧利司他復(fù)合物的單晶結(jié)構(gòu)(見圖1)，2 308位絲氨酸，2 481位組氨酸以及2 338位天冬氨酸形成“三元體”[10]；“活化”的絲氨酸親核進(jìn)攻奧利司他，使奧利司他與脂肪酶共價(jià)結(jié)合，進(jìn)而不可逆抑制脂肪酶活性。另外，受疏水作用力及氫鍵的作用，奧利司他以相對(duì)固定的構(gòu)象進(jìn)入到活性口袋中，使內(nèi)酯環(huán)貼近活化后的絲氨酸，這也使奧利司他能共價(jià)結(jié)合到脂肪酶。

圖1　奧利司他與胰脂肪酶結(jié)合示意圖

圖2　S-構(gòu)型的化合物7與胰脂肪酶結(jié)合

通過模擬化合物7(S構(gòu)型)與胰脂肪酶的結(jié)合模式(見圖2)發(fā)現(xiàn)，其3個(gè)疏水基團(tuán)(苯環(huán)和2個(gè)脂肪側(cè)鏈)正好可以進(jìn)入胰脂肪酶的3個(gè)活性疏水口袋結(jié)合，并與Arg2482、Tyr2309、Ile22503個(gè)氨基酸形成氫鍵。

圖3　R-構(gòu)型的化合物7與胰脂肪酶結(jié)合

通過模擬化合物7(R構(gòu)型)與胰脂肪酶的結(jié)合模式(見圖3)發(fā)現(xiàn)，其3個(gè)疏水基團(tuán)(苯環(huán)和兩個(gè)脂肪側(cè)鏈)正好可以進(jìn)入胰脂肪酶的3個(gè)活性疏水口袋結(jié)合，并與Asp2338、Ser23082個(gè)氨基酸形成氫鍵。

1.2.2所設(shè)計(jì)的目標(biāo)化合物如圖4，在苯酞母核3位分別接正癸基、正十八烷基、正十六烷基設(shè)計(jì)化合物1，2，3；在苯酞母核6位分別接正癸酰胺基、正十六酰胺基、正十八酰胺基設(shè)計(jì)化合物4，5，6；在苯酞母核3位接丁基，并在6位分別接正癸酰胺基、正十六酰胺基、正十八酰胺基設(shè)計(jì)化合物7，8，9(見圖4)。

圖4　設(shè)計(jì)的目標(biāo)化合物

1.2.3目標(biāo)化合物的合成從圖5看出，化合物的合成是以2-羧基苯甲醛10為起始原料，通過格氏反應(yīng)[11-12]，得到化合物1，2，3和中間體丁基苯酞14。再以苯酞11和丁基苯酞14為原料，先經(jīng)過硝化反應(yīng)、還原反應(yīng)[13-16]，得到氨基苯酞13和氨基丁苯酞16兩個(gè)中間體，再與脂肪酸縮合得到化合物4，5，6，7，8，9。

1.2.4目標(biāo)化合物的制備

3-癸基-1(3H)-異苯并呋喃酮(1)向150 mL 三頸瓶中加入200 mg(8.33 mmol)鎂粉，N2保護(hù)下，加入少量 I2、5 mL THF，攪拌下慢慢滴加2.14 mL(8.33 mmol)溴癸烷，待 I2的顏色褪去后，加入20 mL THF 稀釋并滴完剩余的溴癸烷，回流 2 h。將溶解有鄰羧基苯甲醛500 mg 的 THF 溶液 逐滴的滴入上述格氏試劑中，回流反應(yīng) 3 h，TLC 檢測(cè)原料反應(yīng)完全，冷卻，慢慢加入稀鹽酸20 mL 淬滅反應(yīng)，室溫?cái)嚢? h。將所得的溶液分液，用二氯甲烷萃取水層3次，蒸干有機(jī)層，柱分離(石油醚與乙酸乙酯的體積比為16∶1)，得白色固體 369 mg，收率40%. mp: 38～40 ℃,1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.72 (d,J= 7.5 Hz, 1 H), 7.55 (t,J= 7.5 Hz, 1 H), 7.37 (t,J= 7.5 Hz, 1 H), 7.35 (d,J= 7.5 Hz, 1 H), 5.34 (dd,J= 7.9, 3.9 Hz, 1 H), 1.96-1.88 (m, 1 H), 1.65-1.57 (m, 1 H), 1.40-1.29 (m, 2 H), 1.24-1.06 (m, 14 H), 0.74 (t,J= 6.9 Hz, 3 H).13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 170.4, 150.0, 133.8, 128.8, 125.9, 125.3, 121.8, 81.3, 34.7, 31.8, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 24.8, 22.6, 14.0. HRESIMS: [M+H+] calcd for C18H27O2: 275.1933; found 275.2006。

圖5　目標(biāo)化合物的合成路線

3-十八烷基-1(3H)-異苯并呋喃酮(2)實(shí)驗(yàn)方法參考化合物1的制備，性狀為白色固體，產(chǎn)率47%. mp: 57～59 ℃,1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.86 (d,J= 7.5 Hz, 1 H), 7.64 (t,J= 7.5 Hz, 1 H), 7.49 (t,J= 7.5 Hz, 1 H), 7.42 (d,J= 7.5Hz, 1 H), 5.45 (dd,J= 7.8, 3.9 Hz, 1 H), 2.04-1.98 (m, 1 H), 1.75-1.70 (m, 1 H), 1.45 (m, 2 H), 1.34-1.22 (m, 30 H), 0.85 (t,J= 6.8 Hz, 3 H).13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 170.6, 150.1, 133.9, 128.9, 126.1, 125.6, 121.7, 81.4, 34.8, 31.9, 29.8, 29.7, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 24.8, 22.7, 14.1. HRESIMS: [M+H+] calcd for C26H43O2: 387.3185; found 387.3258。

3-十六烷基-1(3H)-異苯并呋喃酮(3) 實(shí)驗(yàn)方法參考化合物1的制備，性狀為白色固體，產(chǎn)率43%。 mp: 66～67℃,1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.86 (d,J= 7.5 Hz, 1 H), 7.64 (t,J= 7.5 Hz, 1 H), 7.49 (t,J= 7.5 Hz, 1 H), 7.42 (d,J= 7.5 Hz, 1 H), 5.45 (dd,J= 7.8, 3.9 Hz, 1 H), 2.04-1.99 (m, 1 H), 1.74-1.71 (m, 1 H), 1.51-1.43 (m, 2 H), 1.35-1.23 (m, 26 H), 0.86 (t,J= 6.7 Hz, 3 H).13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 170.6, 150.1, 133.9, 128.9, 126.1, 125.6, 121.7, 81.4, 34.8, 31.9, 29.7, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 24.8, 22.6, 14.1. HRESIMS: [M+H+] calcd for C24H39O2: 359.287 2; found 359.2946。

6-癸酰胺基-1(3H)-異苯并呋喃酮(4)稱取2 g(14.9 mmol)苯酞(化合物11)固體并置于100 mL單口瓶中，攪拌下慢慢加入約40 mL 濃硫酸讓其溶解，稱取2.3 g(22.4 mmol)硝酸鉀在冰水浴條件下加入到上述單口瓶里，反應(yīng) 10 h。將反應(yīng)后的懸濁液倒入 150 mL 冰水中，析出2.45 g 硝基苯酞(化合物12)，性狀為白色固體，產(chǎn)率92%。

將1 g(5.6 mmol)硝基苯酞溶解在50 mL 甲醇和乙酸乙酯(體積比為5∶1)的混合溶液中，攪拌下加入 0.3 g 10% Pd/C，氫氣下，室溫反應(yīng)8 h，TLC 點(diǎn)板原料反應(yīng)完全，過濾鈀碳并回收，濾液經(jīng)柱層析分離得0.69 g 氨基苯酞(化合物13)，性狀為黃色固體，產(chǎn)率83%。

將200 mg(1.34 mmol)氨基苯酞、277.5 mg(1.26 mmol)正癸酸、514.6 mg (2.68 mmol) EDCI、328.0 mg(2.68 mmol)DMAP，置于50 mL雙口瓶中，N2保護(hù)下加入30 mL干燥的CH2Cl2，反應(yīng)12 h，TLC點(diǎn)板顯示原料反應(yīng)完全。將反應(yīng)液用10% 的稀鹽酸和飽和氯化鈉溶液的混合液(體積比1∶1)分三次洗滌，無水硫酸鎂干燥，硅膠柱分離(石油醚與乙酸乙酯體積比為3∶1)，得白色固體354.1 mg，產(chǎn)率87%. mp: 151～152 ℃,1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.20 (d,J= 8.4 Hz, 1 H), 8.17 (s, 1 H), 7.93 (s, 1 H), 7.43 (d,J= 8.4 Hz, 1 H), 5.29 (s, 2 H), 2.43 (t,J= 7.5 Hz, 2 H), 1.75-1.71 (m, 2 H), 1.37-1.25 (m, 12 H), 0.85 (t,J= 7.1 Hz, 3 H).13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 172.2, 171.2, 141.5, 139.5, 126.3, 126.2, 122.6, 115.9, 69.8, 37.6, 31.8, 29.7, 29.5, 29.4, 29.3, 25.6, 22.7, 14.1. HRESIMS: [M+H+] calcd for C18H26O3N: 304.1834; found 304.1911。

6-軟脂酰胺基-1(3H)-異苯并呋喃酮(5) 實(shí)驗(yàn)操作參考化合物4的制備，性狀為白色固體，產(chǎn)率81%。 mp: 145～146 ℃,1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.16 (d,J= 8.1 Hz, 1 H), 7.90 (s, 1 H), 7.71 (s, 1 H), 7.45 (d,J= 8.1Hz, 1 H), 5.30 (s, 2 H), 2.42 (t,J= 7.5 Hz, 2 H), 1.70-1.78 (m, 2 H), 1.42-1.17 (m, 24 H), 0.87 (t,J= 6.7 Hz, 3 H).13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 171.8, 170.9, 141.6, 139.3, 126.4, 126.2, 122.7, 115.9, 69.7, 37.7, 31.9, 29.7, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 25.5, 22.7, 14.1. HRESIMS: [M+H+] calcd for C24H38O3N: 388.2773; found 388.2846.

6-硬脂酰胺基-1(3H)-異苯并呋喃酮(6)實(shí)驗(yàn)操作參考化合物4的制備，性狀為白色固體，產(chǎn)率74%。 mp: 152～153 ℃,1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.12 (d,J= 8.3 Hz, 1 H), 7.89 (s, 1 H), 7.49 (s, 1 H), 7.45 (d,J= 8.3 Hz, 1 H), 5.30 (s, 2 H), 2.41 (t,J= 7.5 Hz, 2 H), 1.71-1.77 (m, 7.5 Hz, 2 H), 1.39-1.24 (m, 28 H), 0.88 (t,J= 6.7 Hz, 3 H).13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 171.7, 170.7, 141.6, 139.1, 126.5, 126.1, 122.7, 115.9, 69.6, 37.7, 31.9, 29.7, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 25.5, 22.7, 14.1. HRESIMS: [M+H+] calcd for C26H42O3N: 416.3086; found 416.3159。

6-癸酰胺基-3-丁基-1(3H)-異苯并呋喃酮(7)實(shí)驗(yàn)操作以鄰羧基苯甲醛為起始原料，通過格氏反應(yīng)、硝化反應(yīng)、還原反應(yīng)、?；磻?yīng)得到。格氏反應(yīng)的操作參考化合物1的制備，硝化反應(yīng)、還原反應(yīng)、酰化反應(yīng)操作參考化合物4的制備。性狀為白色固體，產(chǎn)率83%。 mp: 122～124 ℃,1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.65 (s, 1 H), 8.22 (d,J= 8.3 Hz, 1 H), 7.94 (s, 1 H), 7.36 (d,J= 8.3 Hz, 1 H), 5.44 (dd,J= 7.6, 4.2 Hz, 1 H), 2.44 (t,J= 7.5 Hz, 2 H), 1.96-2.03 (m, 1 H), 1.69-1.75 (m, 3 H), 1.43-1.21 (m, 16 H), 0.88 (t,J= 7.0 Hz, 3 H), 0.84 (t,J= 6.9 Hz, 3 H).13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 172.6, 171.0, 145.0, 139.8, 126.5, 126.3, 122.2, 115.9, 81.8, 37.6, 34.4, 31.8, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 26.8, 25.6, 22.6, 22.4, 14.1, 13.8. HRESIMS: [M+H+] calcd for C22H34O3N: 360.246 0; found 360.2533。

6-軟脂酰胺基-3-丁基-1(3H)-異苯并呋喃酮(8)實(shí)驗(yàn)操作參考化合物7的制備，性狀為白色固體，產(chǎn)率76%。mp: 124～126 ℃,1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.47 (s, 1 H), 8.25 (d,J= 8.3 Hz, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.37 (d,J= 8.3 Hz, 1 H), 5.44 (dd,J= 7.6, 4.2 Hz, 1 H), 2.44 (t,J= 7.5 Hz, 2 H), 2.00 (m, 1 H), 1.73 (m, 3 H), 1.42-1.22 (m, 28 H), 0.89 (t,J= 6.4 Hz, 3 H), 0.86 (t,J= 6.8 Hz, 3 H).13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 172.5, 170.9, 145.0, 139.7, 126.5, 126.3, 122.3, 115.8, 81.8, 37.6, 34.4, 31.9, 29.7, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 26.8, 25.6, 22.7, 22.4, 14.1, 13.8. HRESIMS: [M+H+] calcd for C28H46O3N: 444.339 9; found 444.3472。

6-硬脂酰胺基-3-丁基-1(3H)-異苯并呋喃酮(9)實(shí)驗(yàn)操作參考化合物7的制備，性狀為白色固體，產(chǎn)率82%。 mp: 116～118 ℃,1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.37 (s, 1 H), 8.25 (d,J= 8.3 Hz, 1 H), 7.90 (s, 1 H), 7.37 (d,J= 8.3 Hz, 1 H), 5.45 (dd,J= 7.6, 4.2 Hz, 1 H), 2.44 (t,J= 7.5 Hz, 2 H), 2.04-1.98 (m, 1 H), 1.71-1.76 (m, 3 H), 1.39-1.22 (m, 32 H), 0.89 (t,J= 5.9 Hz, 3 H), 0.86 (t,J= 6.0 Hz, 3 H).13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 172.4, 170.9, 145.1, 139.7, 126.5, 126.2, 122.3, 115.8, 81.8, 37.6, 34.4, 31.9, 29.7, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 26.8, 25.6, 22.7, 22.4, 14.1, 13.9. HRESIMS: [M+H+] calcd for C30H50O3N: 472.3712; found 472.3785。

1.3 胰脂肪酶活性測(cè)定

胰脂肪酶的活力是以三油酸甘油酯釋放游離脂肪酸的釋放率來判定的。配制300 units/mL 胰脂肪酶溶液。參照 Han 等報(bào)道方法制作脂肪乳劑[17]，準(zhǔn)確稱取80 mg三油酸甘油酯，10 mg卵磷脂，5 mg?；悄懰?，置于干凈的小旋蒸瓶中，60 ℃水浴蒸干。加9 mL的0.1 mol/L的Tris-鹽酸溶液(pH=7.0)，超生波處理5 min 使其充分乳化。

空白對(duì)照為在反應(yīng)體系中加入100 μL脂肪乳劑，50 μL的胰脂肪酶溶液，以及100 μL的水；實(shí)驗(yàn)組為將100 μL水置換為100 μL的各樣品溶液。所有離心管于37 ℃恒溫孵育30 min，反應(yīng)結(jié)束后，使用游離脂肪酸試劑測(cè)定釋放的脂肪酸含量，樣品活性測(cè)定值(見表1)。

2結(jié)果與討論

本論文應(yīng)用低毒小分子苯酞類化合物模擬奧利司他來設(shè)計(jì)胰脂肪酶抑制劑，基于模擬奧利司他與胰脂肪酶的單晶復(fù)合物結(jié)構(gòu)，結(jié)合計(jì)算機(jī)輔助，設(shè)計(jì)并合成了9個(gè)苯酞類化合物，化合物結(jié)構(gòu)都經(jīng)過HRESIMS、1H NMR、13C NMR確證。抑制胰脂肪酶活性研究發(fā)現(xiàn)，1 mg/mL的化合物2，5，7對(duì)胰脂肪酶抑制活性最好，抑制率分別達(dá)到了49%，30%，35%。該類化合物對(duì)脂肪酶的抑制作用弱于奧利司他，分析對(duì)接實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，化合物的內(nèi)酯環(huán)離Ser2308較遠(yuǎn)，推測(cè)難以與胰脂肪酶形成共價(jià)結(jié)合。

表1　樣品活性測(cè)定值

注：CFA:5分鐘時(shí)脂肪酸濃度；APL:胰脂肪酶活性。CFAAF: concentration of fatty acids after 5 min; APL: activity of pancreatic lipase.

化合物1、2、3以苯酞為母核，3位連接18個(gè)C脂肪鏈的化合物2對(duì)胰脂肪酶有抑制活性，而連接10個(gè)C脂肪鏈的化合物1和連接16個(gè)C脂肪鏈的化合物3則均沒有抑制活性?；衔?、5、6以苯酞母核，6位連接16個(gè)C脂肪酰胺基的化合物5，其抑制活性好于連接10個(gè)C脂肪酰胺基的化合物4，而6位接18個(gè)C脂肪酰胺基的化合物6則沒有抑制活性?；衔?、8、9，以丁基苯酞母核，6位連接10個(gè)C脂肪酰胺基的化合物7，其抑制活性要好于連接18個(gè)C脂肪酰胺基的化合物9，而6位連接16個(gè)C脂肪酰胺基的化合物8則沒有抑制活性。所設(shè)計(jì)化合物都具有長(zhǎng)脂肪鏈的結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步結(jié)構(gòu)優(yōu)化希望通過合成有可能與胰脂肪酶共價(jià)結(jié)合的化合物，并通過改善其水溶性而提高化合物對(duì)胰脂肪酶抑制活性。

參考文獻(xiàn)：

[1]Wang F, Chen H, Sun X J, et al. Improvement of cognitive deficits in SAMP8 mice by 3-n-butylphthalide [J]. Neurol Res， 2014, 36(3): 224-233.

[2]鄢學(xué)芬, 詹瑾, 黃葉寧，等. 丁苯酞的藥理作用與臨床評(píng)價(jià) [J]. 中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志， 2008, 28(17): 1498-1500.

Yan X F, Zhan J, Huang Y N, et al. Pharmacological action and clinical evaluation of butylphthalide [J]. China Journal of Hospital Pharmacy， 2008, 28(17): 1498-1500.

[3]張楠楠, 高超, 邱渝杰. 肥胖與癌癥關(guān)系的臨床研究最新進(jìn)展 [J]. 醫(yī)學(xué)綜述， 2014, 20(8): 1401-1403.

Zhang N N, Gao C, Qiu Y J. Advancement in clinical researches of correlation between cancer and obesity [J]. Medical Recapitulate， 2014, 20(8): 1401-1403.

[4]馮瓊, 周智廣. 肥胖與代謝綜合征 [J]. 實(shí)用糖尿病雜志， 2005, 1(2): 9-11.

Feng Q, Zhou Z G. Obesity and metabolic syndrome [J]. Journal of Practical Diabetology， 2005, 1(2): 9-11.

[5]楊志秋， 詹莉莉， 傅正偉. 脂肪酶抑制劑應(yīng)用于抗肥胖的研究進(jìn)展 [J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展， 2011, 11(21): 4178-4181.

Yang Z Q, Zhan L L, Fu Z W. Recent advances of lipase inhibitor in the application of anti-obesity [J]. Progress in Modern Biomedicine， 2011, 11(21): 4178-4181.

[6]Nakai K, Wada R, Iida S, et al. Modeling and Simulation of Orlistat to Predict Weight Loss and Weight Maintenance in Obesity Patients [J]. Drug Metab Pharmacokinet， 2014, 29(3): 278-282.

[7]馬凌月, 周穎, 崔一民. 奧利司他的不良反應(yīng)與藥物間相互作用研究 [J]. 中國(guó)藥房, 2012, 23(22): 2090-2092.

Ma L Y, Zhou Y, Cui Y M. The Research between adverse drug reactions of orlistat and drug-drug interaction [J]. China Pharmacy, 2012, 23(22): 2090-2092.

[8]McNeely W, Benfield P. Orlistat [J]. Drugs, 1998, 56(2): 241-249.

[9]Zhi J, Melia AT, Eggers H, et al. Review of limited systemic absorption of orlistat, a lipase inhibitor, in healthy human volunteers [J]. J Clin Pharmacol, 1995, 35: 1103-1108.

[10]Fako V E, Zhang J T, Liu J Y. Mechanism of Orlistat Hydrolysis by the Thioesterase of Human Fatty Acid Synthase [J]. ACS Catal, 2014, 4: 3444-3453.

[11]高奧, 呂華沖, 蔡金艷，等. 正丁基苯酞的合成及結(jié)構(gòu)表征 [J]. 廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)， 2013, 29(3): 250-252.

Gao A, Lv H C, Cai J Y, et al. Synthesis and characterization of n-butylphthalide [J]. Journal of Guangdong Pharmaceutical University. 2013, 29(3): 250-252.

[12]王協(xié)璜. 醛酮與格氏試劑的反應(yīng) [J]. 安徽師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)， 1994, 17(1): 75-79.

Wang X H. Study on the reaction of alaehyde and ketone with grignard reagent [J]. Journal of Anhui Normal University(Natural Science)， 1994, 17(1): 75-79.

[13]王曉晨, 張啟虹, 李英姿，等. 嘧啶與吡啶衍生物硝化方法的改進(jìn) [J]. 藥學(xué)進(jìn)展， 2009, 33(3): 131-133.

Wang X C, Zhang Q H, Li Y Z, et al. Superior methodology for the nitration of pyrimidine and pyridine derivatives [J]. Progress in Pharmaceutical Sciences， 2009, 33(3): 131-133.

[14]祁剛, 屠樹滋. 6-硝基香豆素的簡(jiǎn)便合成 [J]. 生物質(zhì)化學(xué)工程， 2006, 40(2): 23-24.

Qi G, Tu S Z. An improved method for the synthesis of 6-nitrocoumarin [J]. Biomass Chemical Engineering， 2006, 40(2): 23-24.

[15]黃偉, 賈艷秋, 孫盛凱. Pd/C 催化劑研究進(jìn)展 [J]. 工業(yè)催化， 2006, 14(10): 6-11.

Huang W, Jia Y Q, Sun S K. Latest Researches in Pd/C Catalysts [J]. Industrial Catalysis， 2006, 14(10): 6-11.

[16]Khandelwal A, Hall JA, Blagg BS. Synthesis and Structure-Activity Relationships of EGCG Analogues, a recently Identified Hsp90 Inhibitor [J]. J Org Chem， 2013, 78(16), 7859-7884.

[17]Wang Y, Wang J, Yanagita R C, et al. Yanagita. Effects of two sulfated triterpene saponins echinoside A and holothurin A on the inhibition of dietary fat absorption and obesity reduction [J]. Biosci Biotechnol Biochem， 2014, 78(1): 139-146.

責(zé)任編輯徐環(huán)

Synthesis and Inhibiting Activities on Pancreatic Lipase of Novel Phthalide Compounds

DUAN Liang-Xing, SONG Shan-Shan, LIU Jun, LIU Zhen, WANG Yu-Ming, WAN Sheng-Biao

(School of Medicine and Pharmacy, Ocean University of China, Qingdao 266003， China)

Abstract:Orlistat is by far the only anti-obesity drug of pancreatic lipase on the market. Nine novel phthalide compounds with long lipid chains were designed and synthesized. All new compounds were characterized by1H-NMR,13C-NMR, high resolution electrospray ionization mass. Inhibiting activities on pancreatic lipase of synthesized compounds were tested, and compound 2,5,7 show 49%, 30% and 35% inhibition rate on pancreatic lipase at the concentration of 1 mg/mL.

Key words:orlistat; Docking design; phthalide compounds; anti-obesity drug

基金項(xiàng)目：?國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(NSFC 81172926)資助

收稿日期：2015-02-05;

修訂日期：2015-06-04

作者簡(jiǎn)介：段良興(1987-)，男，碩士生。E-mail：dlx_jx@sina.com ??通訊作者：E-mail：biaowan@ouc.edu.cn

中圖法分類號(hào)：R914.4

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1672-5174(2016)05-090-05

DOI：10.16441/j.cnki.hdxb.20150031

Supported by National Natural Science Foundation of China (NSFC 81172926)