荔枝果肉多酚不同極性分部的構(gòu)成譜及其抗氧化活性比較

溫葉杰，肖 娟，董麗紅，鄧媛元，劉 磊，李續(xù)娥，張瑞芬，*

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所/農(nóng)業(yè)部功能食品重點實驗室/廣東省農(nóng)產(chǎn)品加工重點實驗室，廣東廣州 510610；2.華南師范大學藥物研究院，廣東廣州 510631）

荔枝果肉多酚不同極性分部的構(gòu)成譜及其抗氧化活性比較

溫葉杰1，2，肖 娟1，董麗紅1，鄧媛元1，劉 磊1，李續(xù)娥2，張瑞芬1，*

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所/農(nóng)業(yè)部功能食品重點實驗室/廣東省農(nóng)產(chǎn)品加工重點實驗室，廣東廣州 510610；2.華南師范大學藥物研究院，廣東廣州 510631）

利用乙酸乙酯和正丁醇2種不同極性溶劑對荔枝果肉多酚提取物水溶液分部萃取，采用高效液相色譜分析不同極性分部萃取物的多酚組分及其含量差異，并采用細胞抗氧化法評價其抗氧化活性差異。結(jié)果表明：荔枝果肉多酚不同極性分部的得率、總酚含量、總黃酮含量、多酚組成及含量、抗氧化活性存在顯著性差異。3個極性分部萃取物的得率以水相最高（36%），正丁醇相（32%）次之，乙酸乙酯相（16%）最低?？偡雍恳砸宜嵋阴ハ嘧罡?，正丁醇相次之；總黃酮含量以正丁醇相最高，乙酸乙酯相次之；而抗氧化活性以正丁醇相最強，水相次之。乙酸乙酯相多酚組成主要為原花青素B2、表兒茶素等原花青素類化合物；正丁醇相多酚組成主要為槲皮素-3-蕓香糖-7-鼠李糖苷等黃酮類化合物。

荔枝；多酚；分部萃取；細胞抗氧化活性

荔枝（Litchi chinensis Sonn.）是無患子科荔枝屬植物，熱帶亞熱帶地區(qū)重要的特色水果［1］。它具有豐富的營養(yǎng)，《本草綱目》載:荔枝有補脾益肝、生津止呃、消腫痛、鎮(zhèn)咳養(yǎng)心等功效［2］。近來，研究發(fā)現(xiàn)荔枝含有多糖、多酚等活性物質(zhì)［3］。其中多酚是一大類重要的非營養(yǎng)素植物活性物質(zhì)，是植物的次級代謝產(chǎn)物，具有抗氧化［4 -5］、抗輻射［6］、護肝［7］等功能。由于其廣泛的生物活性，被廣泛地應(yīng)用于藥品、食品等領(lǐng)域，其開發(fā)與利用已成為當前研究熱點［8］。

不同極性溶劑分部萃取是分離純化活性物質(zhì)的傳統(tǒng)方法，具有操作簡單、效果優(yōu)良等優(yōu)點。王畢妮等［9］利用5種不同極性溶劑分部萃取紅棗多酚，發(fā)現(xiàn)不同極性溶劑分部萃取能夠有效分離不同類型的多酚物質(zhì)，且極性越強的溶劑多酚提取率、總酚含量和抗氧化活性越高。楊龍等［10］對西蘭花多酚的分部萃取研究也得到類似的結(jié)論。但是，Akowuah等［11］采用5種不同極性溶劑提取爪哇茶多酚，并評價其抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)爪哇茶多酚分部萃取物的抗氧化性與其萃取溶劑極性呈負相關(guān)。張粹蘭等［8］比較了3種不同極性溶劑對荔枝果肉多酚提取液中多酚得率及其抗氧化活性的影響，發(fā)現(xiàn)荔枝果肉不同極性分部的總酚含量和抗氧化活性存在顯著差異，但是并未涉及多酚組成及含量。本文從荔枝果肉多酚不同極性分部中多酚組成及含量的角度，揭示不同極性溶劑分部萃取對荔枝果肉多酚的分離效果，為荔枝果肉多酚的高效利用提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

荔枝品種為妃子笑（Litchi chinensis Sonn.cv.Feizixiao），2015年6月采自廣東省農(nóng)業(yè)科學院果樹研究所種質(zhì)資源圃。沒食子酸（gallic acid）、表兒茶素（epicatechin）、原花青素B2（procyanidin B2）、蘆丁（rutin）、槲皮素（quercetin）、ABAP、DCFH-DA和福林酚試劑，均購自Sigma公司；MEM細胞培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）、HPLC級甲醇、乙酸和乙腈，購自Thermo Fisher Scientific公司；人肝癌細胞（HepG2細胞），購自中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心；乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、碳酸鈉試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

XHF-D型內(nèi)切式勻漿機，寧波新芝生物技術(shù)有限公司；TD6型離心機，長沙湘智離心儀器有限公司；EYELA N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，東京理化器械株式會社；FDU-2110型真空冷凍干燥機，東京理化器械株式會社；LC-1260型高效液相色譜儀，Agilent公司；UV-1800型紫外可見分光光度計，日本島津有限公司；Infinite M200pro型酶標儀，Tecan公司；Hera-Cell 240i CO2培養(yǎng)箱，Thermo Fisher Scientific公司；DMI3000B型倒置熒光顯微鏡，Leica公司；ULT-2586-4-V型超低溫冰箱，Thermo Scientific公司。

1.3 方法

1.3.1 荔枝果肉多酚不同極性分部分離制備

荔枝果肉多酚提取物制備:新鮮荔枝去皮去核后，將果肉浸泡在95%的乙醇溶液中（料液比（質(zhì)量與體積比）1∶2，g/ mL），轉(zhuǎn)入冰水浴內(nèi)切式勻漿機均質(zhì)10 min，4℃離心后收集上清液，果渣再重復提取2次。合并3次離心上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45℃減壓回收乙醇，殘留的水溶液為荔枝果肉多酚粗提液。將粗提液經(jīng)過HPD-826大孔樹脂吸附后，蒸餾水洗脫除去可溶性糖和其他小分子化合物，再用95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，于45℃減壓濃縮，得到深黃色濃縮液，真空冷凍干燥后即為荔枝果肉多酚提取物。

荔枝果肉多酚不同極性分部分離制備:稱取一定量的荔枝果肉多酚提取物，配制質(zhì)量濃度為20 g/ L的水溶液，按體積比為1∶3加入乙酸乙酯萃取，搖勻，靜置，待溶液完全分層后，放出下層的水溶液，再重萃取4次。將5次乙酸乙酯相合并，在45℃減壓濃縮回收乙酸乙酯，將蒸干乙酸乙酯的提取物加少量水溶解，冷凍干燥后稱重備用。剩余水溶液按上述同樣方法用水飽和正丁醇萃取5次。合并正丁醇萃取液，45℃減壓濃縮至無有機溶劑殘留，旋蒸后萃取物用少量蒸餾水溶解，冷凍干燥后稱重備用。剩余的水相同樣在45℃減壓濃縮除去有機試劑，冷凍干燥后稱重備用。

1.3.2 荔枝果肉多酚提取物及其不同極性分部的總酚含量測定

總酚含量的測定采用Folin-Ciocalteu法［12］:取質(zhì)量濃度為1 g/ L不同的多酚萃取物100 μL，加入Folin酚100 μL，反應(yīng)6 min，再加入1 mL 7%的Na2CO3和0.8 mL水，避光反應(yīng)90 min，用紫外分光光度計測定其在760 nm處的吸光度值，平行測定3次取平均值。以沒食子酸溶液為標準品，標準曲線為Y =0.002X +0.065，R2=0.997，線性范圍0～500 μg/ mL，其中X為沒食子酸質(zhì)量濃度（μg/ mL），Y為吸光度，檢測波長為760 nm。利用沒食子酸標準曲線的回歸方程計算出不同極性分部中總酚含量，結(jié)果以每g提取物（或不同極性分部）中所含的沒食子酸質(zhì)量（mg/ g）表示。

1.3.3 荔枝果肉多酚提取物及其不同極性分部的總黃酮含量測定

總黃酮含量的測定采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法［12］:將不同極性分部荔枝果肉多酚提取物0.3 mL加到10 mL試管中，再加入1.5 mL的蒸餾水，接著加入90 μL 5%的亞硝酸鈉溶液，靜置反應(yīng)5 min，再加入10%的三氯化鋁180 μL，靜置5 min，最后加入0.6 mL濃度為1 mol/ L NaOH溶液，用蒸餾水將溶液總體積補足到3 mL，在510 nm下測其吸光度值。平行測定3次，取平均值。以兒茶素為標準品，標準曲線為Y = 0.001X + 0.005，R2= 0.983，線性范圍0～400 μg / mL，其中X為兒茶素質(zhì)量濃度（mg/ mL），Y為吸光度，檢測波長為510 nm。利用兒茶素標準曲線的回歸方程計算出不同級性分部中總黃酮含量，結(jié)果以每g提取物（或不同極性分部）中所含的兒茶素質(zhì)量（mg/ g）表示。

1.3.4 HPLC分析荔枝果肉多酚提取物及其不同極性分部的多酚組成和含量

稱取適量的各待測樣品溶解在甲醇中配制成質(zhì)量濃度為5 g/ L的溶液，經(jīng)0.22 μm濾膜后采用安捷倫1260型HPLC-DAD測定，參照Zhang等［13］方法。流動相:流動相A體積百分數(shù)為0.4%的冰乙酸，流動相B為乙腈，洗脫梯度為0～40 min B 5%～25%，40～45 min B 25%～35%，45～50 min B 35%～50%，后運行平衡時間5 min。色譜柱為Zorbax SBC18反相色譜柱（4.6 mm×100 mm，5 μm，Agilent公司）；柱溫為30℃；流速為1.0 mL/ min；進樣體積為20 μL；檢測波長為全波長掃描，以260，280，320，350 nm為主要觀察波長。樣品色譜峰與標準品吸收峰保留時間及波譜圖對比定性，峰面積外標法定量，結(jié)果以每mg荔枝果肉提取物中所含的單體酚質(zhì)量（μg/ mg）表示。

1.3.5 荔枝果肉多酚及其不同極性分部的細胞抗氧化活性

各樣品細胞抗氧化能力（cellular antionidant assay，CAA）測定參考Wolfe等［14］的方法進行。將處于對數(shù)生長期的HepG2細胞懸液種到黑壁透明底96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔100 μL，細胞密度約為（5×104）/孔。板的最外周各孔加入100 μL PBS代替細胞，以減少邊緣效應(yīng)。細胞貼壁生長24 h后，吸除培養(yǎng)基，并加入PBS 100 μL/孔清洗各孔一次。將100 μL不同質(zhì)量濃度的槲皮素溶液或不同極性分部的荔枝果肉多酚提取物（用MEM培養(yǎng)基溶解稀釋，且含有25 μmol/ L DCFH-DA的熒光素檢測液）加入到相應(yīng)孔中，空白對照孔中加入只含有25 μmol/ L DCFH-DA的熒光素檢測液，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)1 h。然后去除各孔中的處理溶液，用多通道移液器迅速向各孔中加入100 μL新鮮配制的終濃度為600 μmol/ L的ABAP溶液，空白孔中用PBS代替。迅速將細胞培養(yǎng)板放入熒光酶標儀中開始檢測，測定條件為:37℃，激發(fā)波長485 nm，發(fā)射波長538 nm，12個循環(huán)，每個循環(huán)5 min。結(jié)果以每mL荔枝果肉多酚不同極性萃取物的半數(shù)最大效應(yīng)量的質(zhì)量（μg/ mL）表示。

1.4 數(shù)據(jù)處理

每個樣品每個指標重復測定3次，所有結(jié)果用平均值±標準差表示。數(shù)據(jù)分析運用SPSS 13.0軟件，采用方差分析進行統(tǒng)計處理，各處理組間的差異比較用LSD法，p＜0 .05有統(tǒng)計學意義。運用Microsoft Excel 2010軟件繪制統(tǒng)計圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 荔枝果肉多酚不同極性分部的得率

荔枝果肉多酚不同極性分部的得率存在顯著性差異（p＜0.05）（見圖1）。水相得率最高（36%），正丁醇相次之（32%）（p＜0 .05），乙酸乙酯相最低（16%），水相得率分別是正丁醇的1.23倍，是乙酸乙酯的2.25倍。

圖1 荔枝果肉多酚提取物分部萃取不同極性分部得率Fig.1 Yields of fractional extraction of litchi pulp polyphenol extracts

2.2 荔枝果肉多酚提取物及其不同極性分部的總酚含量

荔枝果肉多酚及其不同極性分部的總酚含量存在顯著性差異（p＜0.05），如圖2。乙酸乙酯相的總酚質(zhì)量比最高（491 mg/ g），是荔枝果肉多酚提取物的1.22倍；正丁醇相的總酚質(zhì)量比次之（462 mg/ g），是荔枝果肉多酚提取物的1.14倍。水相的總酚質(zhì)量比最低（382 mg/ g），是荔枝果肉提取物總酚的0.95倍。結(jié)果表明，經(jīng)過分部萃取，荔枝果肉中的多酚主要富集于乙酸乙酯相和正丁醇相。

2.3 荔枝果肉多酚提取物及其不同極性分部的總黃酮含量

與荔枝果肉多酚提取物相比，乙酸乙酯相的總黃酮含量無顯著變化，正丁醇相的總黃酮含量顯著提高（p＜0.05），而水相總黃酮含量顯著降低（p＜0.05），如圖3。正丁醇相的總黃酮質(zhì)量比最高（443 mg/ g），是原提取物的1.29倍；乙酸乙酯相次之（340 mg/ g），是原提取物的0.99倍；水相的總黃酮質(zhì)量比最低（149.3 mg/ g），是荔枝果肉多酚的0.43倍。結(jié)果表明，經(jīng)過分部萃取，荔枝果肉多酚提取物中的黃酮主要富集于正丁醇相。

2.4 荔枝果肉多酚及其不同極性分部的多酚組成及含量

荔枝果肉多酚及其不同極性分部的HPLC譜如圖4。由圖4可知，荔枝果肉多酚含有15種主要化合物，對應(yīng)峰號為1～15；乙酸乙酯相含有14種主要化合物，不含峰10；正丁醇相含12種化合物，不含峰5，6，7；水相含有9種主要化合物，不含6，7，9，10，14，15。HPLC-DAD分析荔枝果肉多酚及其不同極性分部的多酚組成及含量見表1。由表1可知，峰4，5，8，12，14分別是原花青素B2、表兒茶素、槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁、水仙苷。其余未鑒定出的峰中，峰1～3出峰時間較早，光譜圖為單波帶，最大吸收波長在280 nm左右，推測可能為酚酸類物質(zhì)，故根據(jù)峰面積以沒食子酸質(zhì)量比（mg/ g）分別計算其相對含量；峰6，7，9紫外光譜圖顯示為單波帶，最大吸收波長為280nm左右，其光譜圖與表兒茶素、原花青素B2一致，推測峰6，7，9可能為原花青素類化合物，故根據(jù)峰面積以表兒茶素質(zhì)量比（mg/ g）分別計算其相對含量；峰10，11，13，15紫外光譜圖顯示為雙波帶，I帶最大吸收波長為260～280 nm，II帶最大吸收波長為320～350 nm，為典型的黃酮特征光譜圖，與槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷和水仙苷光譜圖相似，推測可能為黃酮類化合物，故根據(jù)峰面積以蘆丁質(zhì)量比（mg/ g）計算其相對含量。在荔枝果肉多酚提取物中槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷含量遠高于其他的峰，為（163.55±5.20）mg/ g，原花青素B2含量次之，為（69.52±2.35）mg/ g，兩者含量總和占15個單體含量總和的67.41%。在乙酸乙酯相中，原花青素B2、峰6、表兒茶素為含量最高的3個組分，分別是（227.51±3.40）mg/ g、（100.79±2.62）mg/ g和（84.15±1.52）mg/ g，三者含量總和占14個單體含量總和的77.62%。在正丁醇相中，槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷含量最高，為（469.94±9.82）mg/ g，其含量占12個單體含量總和的68.05%。水相中多酚單體含量均較低。由此可見，不同極性多酚在不同極性溶劑中含量差別較大，乙酸乙酯相以原花青素B2、表兒茶素為主要組分，而正丁醇相中槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷為主要組分。

表1 荔枝果肉多酚提取物及其不同極性萃取物的多酚組成及含量Tab.1 Contents of individual phenolic compounds in litchi pulp polyphenol extract and its fractional extracts mg/ g

圖2 荔枝果肉多酚提取物及其不同極性分部的總酚含量Fig.2 Phenolic contents of litchi pulp polyphenol extract and its fractional extracts

圖3 荔枝果肉多酚提取物及其不同極性分部的總黃酮含量Fig.3 Flavonoids contents of litchi pulp polyphenol extract and its fractional extracts

圖4 荔枝果肉多酚及其不同極性分部萃取物的HPLC圖譜Fig.4 HPLC profiles of litchi pulp polyphenol extract and its fractional extracts

2.5 荔枝果肉多酚提取物中多酚組分在不同極性萃取物中的分布

荔枝果肉多酚提取物中原花青素B2、表兒茶素、峰6，7分別有52.36%，86.91%，69.80%，44.55%分布于乙酸乙酯相，蘆丁、峰13、水仙苷分別有31.71%，35.65%，34.99%分布于乙酸乙酯相，其他峰在乙酸乙酯相中分布比例小。荔枝果肉多酚中槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、峰10，11，13、水仙苷分別有88.16%，100.00%，91.68%，57.87%，66.29%分布于正丁醇相，而峰1 ～3分別有39.68%，66.92%，66.27%，其他峰在正丁醇相中分布比例小。荔枝果肉多酚中峰1，2在水相中分布比例為28.66%和20.16%，而表兒茶素、槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁、峰11，13在水相中分布的比例均小于15%。提示黃酮類化合物主要富集于正丁醇相，原花青素類化合物主要富集于乙酸乙酯相。由此可見，不同極性多酚在不同極性溶劑中分布比例差別較大，原花青素B2、表兒茶素主要分布于乙酸乙酯相，而槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷主要分布于正丁醇相，見表2。

2.6 荔枝果肉多酚提取物及其不同萃取物的抗氧化活性

以細胞抗氧化能力來評價荔枝果肉多酚提取物及其不同極性萃取物的抗氧化活性，細胞抗氧化能力以EC50值表示，EC50值越大，表示抗氧化能力越小。乙酸乙酯相、正丁醇相以及水相均具有一定的抗氧化活性，如圖5。其中正丁醇相的EC50最小，是15.2 μg/ mL，其細胞抗氧化性最強，其次是水相，是50.7 μg/ mL，乙酸乙酯相的EC50最大，達到74 μg/ mL。正丁醇相、水相、乙酸乙酯相的EC50值分別是荔枝果肉多酚提取物（106.4 μg/ mL）的0.14，0.48和0.70倍。由此可見，抗氧化活性的大小順序是正丁醇相＞水相＞乙酸乙酯相＞荔枝果肉多酚提取物。

表2 荔枝果肉多酚提取物中多酚組分在不同極性萃取物的分布比例Tab.2 Distribution ratio of individual phenolic compounds in three fractional extracts of litchi pulp polyphenol extracts %

圖5 荔枝果肉多酚及其不同極性萃取物細胞抗氧化活性Fig.5 Cellular antioxidant activities of litchi pulppolyphenol extract and its fractional extracts

3 討 論

3.1 荔枝果肉單體酚組成的分離與鑒定

目前關(guān)于荔枝果肉多酚的分離純化的研究較少。蘇東曉等［15］采用大孔樹脂吸附法對荔枝果肉多酚進行分離純化，通過水洗去除粗提物中糖類等雜質(zhì)而達到富集多酚的目的，卻無法對多酚組分進行有效分離。張粹蘭等［8］采用3種不同極性的溶劑分部萃取荔枝果肉多酚，僅研究了不同極性分部之間總酚含量的差異，未深入研究多酚組分的分離。

本課題組研究已證實荔枝果肉中含有原花青素B2、表兒茶素、槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁和水仙苷（即異鼠李素-3-O-蕓香糖苷）。研究報道，Lv等［16］通過LC-ESI-MS手段從荔枝果肉中檢測到13種多酚單體，包括原花青素B2、表兒茶素、A型原花青素三聚體、B型原花青素三聚體、槲皮素-蕓香糖-鼠李糖苷、蘆丁異構(gòu)體、山萘酚-蕓香糖-鼠李糖苷、異鼠李素-蕓香糖-鼠李糖苷、蘆丁、B型原花青素二聚體、原花青素A2、山萘酚-蕓香糖苷和異鼠李素-蕓香糖苷。鐘慧臻等［17］也曾通過相同的手段檢測到荔枝果肉中可能含有原花青素B2、表兒茶素、原花青素三聚體、槲皮素-蕓香糖-鼠李糖苷、蘆丁及其同分異構(gòu)體、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷等多種多酚單體。因此，荔枝果肉可能還含有A型或B型原花青素三聚體、B型原花青素二聚體等原花青素類化合物，以及山萘酚-蕓香糖-鼠李糖苷、異鼠李素-蕓香糖-鼠李糖苷等黃酮類化合物。根據(jù)本文中荔枝果肉多酚提取物及其不同極性分部中各組分的紫外光譜圖可發(fā)現(xiàn)，峰1，2，3，6，7，9紫外光譜圖顯示為單波帶，最大吸收波長為280 nm左右，其中峰6，7，9的紫外光譜圖與表兒茶素、原花青素B2的一致，推測峰6，7，9可能為原花青素類化合物；峰10，11，13，15紫外光譜圖顯示為雙波帶，I帶最大吸收波長為260～280 nm，II帶最大吸收波長為320～350 nm，為典型的黃酮特征光譜圖，與槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷和水仙苷光譜圖相似，推測可能為黃酮類化合物。另外，根據(jù)不同類別的多酚物質(zhì)保留時間特征分析發(fā)現(xiàn)，酚酸類化合物的出峰時間較早，原花青素類化合物出峰時間次之，黃酮類化合物出峰時間最晚［18］。鑒于此，通過與Lv等［16］和鐘慧臻等［17］的研究結(jié)果對比，推測荔枝果肉多酚中峰1～3可能為酚酸類化合物，峰6，7，9為原花青素三聚體或二聚體；峰10，11，13，15為黃酮類化合物。研究中發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯相中含量最高的化合物分別為原花青素B2、峰6、表兒茶素，三者含量占14個單體含量總和的77.62%；另外，荔枝果肉多酚提取物中原花青素B2、表兒茶素、峰6，7分別有52.36%，86.91%，69.80%、44.55%分布于乙酸乙酯相，提示原花青素類化合物主要富集于乙酸乙酯相。正丁醇相中含量最高的化合物為槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷，其含量占12個單體含量總和的68.05%；另外，荔枝果肉多酚提取物中槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、峰10，11，13、水仙苷分別有88.16%，100.00%，91.68%，57.87%，66.29%分布于正丁醇相。此外，正丁醇相中總黃酮含量最高，提示黃酮類化合物主要富集于正丁醇相。

3.2 荔枝果肉抗氧化活性與其多酚類物質(zhì)的關(guān)系

荔枝果肉多酚提取物不同極性分部的細胞抗氧化活性差異顯著，正丁醇相＞水相＞乙酸乙酯相。各極性分部總酚含量大小順序為乙酸乙酯相＞正丁醇相＞水相，黃酮含量大小順序為正丁醇相＞乙酸乙酯相＞水相。酚類提取物的細胞抗氧化活性不僅與其黃酮、多酚總含量相關(guān)，還與其酚類單體的構(gòu)成有明顯關(guān)系。Wolfe等［14］對不同酚類單體化合物的細胞抗氧化活性進行比較發(fā)現(xiàn)，表兒茶素的EC50值＞200 μmol/ L，兒茶素的EC50值為292 μmol/ L，是標準參照物槲皮素（5.92 μmol/ L）的近50倍，提示原花青素類化合物可能具有較低的CAA活性。本研究中乙酸乙酯相酚類化合物為表兒茶素和原花青素B2等，而該極性分部在3個分部中的CAA活性最低，與該分部以原花青素類化合物為主有直接關(guān)系。正丁醇相主要的成分為槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷，項目組在以前的研究中也發(fā)現(xiàn)，該化合物是荔枝果肉中主要的抗氧化活性成分，其CAA活性為槲皮素的37.2%，與本研究發(fā)現(xiàn)以該化合物為主要成分的正丁醇相具有最高的CAA活性相一致。張粹蘭［8］等的研究發(fā)現(xiàn)荔枝果肉多酚不同極性分部總酚含量大小順序為乙酸乙酯相＞正丁醇相＞水相，與本研究一致，但是其抗氧化活性大小順序為乙酸乙酯相＞正丁醇相＞水相，與總酚含量正相關(guān)。這可能是因為張粹蘭等［8］的研究采用了FRAP和 DPPH法，這兩種方法采用的反應(yīng)體系為化學反應(yīng)體系，而本研究采用的是一種以細胞為作用對象的生物反應(yīng)體系，較化學抗氧化方法更接近生物體內(nèi)環(huán)境，酚類物質(zhì)在這種體系中發(fā)揮抗氧化活性除了與其羥基清除自由基等的能力有關(guān)外，還與化合物的空間結(jié)構(gòu)、極性、溶解性等密切相關(guān)。

4 結(jié) 論

研究采用乙酸乙酯和正丁醇2種不同極性溶劑對荔枝果肉多酚提取物水溶液分部萃取后得到了3個不同極性分部，其中，乙酸乙酯相總酚含量最高，正丁醇相次之；正丁醇相總黃酮含量最高，乙酸乙酯相次之；且正丁醇相細胞抗氧化活性最強，乙酸乙酯相最弱。乙酸乙酯相多酚組成主要為原花青素B2、表兒茶素等原花青素類化合物；正丁醇相多酚組成主要為槲皮素-3-蕓香糖-7-鼠李糖苷等黃酮類化合物。

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Polyphenol Components and Antioxidant Activities of Three Fractions Extracted by Different Polar Solvents from Litchi Pulp Polyphenol Extract

WEN Yejie1，2，XIAO Juan1，DONG Lihong1，DENG Yuanyuan1，LIU Lei1，LI Xue2，ZHANG Ruifen1，*
（1.Sericultural and Agri-Food Research Institute，Guangdong Academy of Agricultural Sciences/ Key Laboratory of Functional Foods，Ministry of Agriculture/ Guangdong Key Laboratory of Agricultural Products Processing，Guangzhou 510610，China；2.Drug Research Institute，South China Normal University，Guangzhou 510631，China）

Two different polar solvents（ethyl acetate and butanol）were used to fractionate polyphenol from aqueous solution of litchi polyphenol extract.The phenolic profiles in each fraction were determined by HPLC，and their antioxidant activities were evaluated by cellular antioxidant assay（CAA）.The results were as follows，phenolic yields，phenolic and flavonoids contents，the phenolic profiles，and CAA values of the three fractions were significantly different.Phenolic yields in water，butanol and ethyl acetate fractions were 36%，32%，and 16%，respectively.However，water fraction had the lowest total phenolic and flavonoids content.Ethyl acetate fraction had the highest total phenolic content with the middle total flavonoids content and the lowest antioxidant activity.The main phenolic components in ethyl acetate fraction were proanthocyanidins，including procyanidin B2，epicatechin and so on，whereas the main component in butanol fraction was quercetin 3-O-rutinoside-7-O-α-L-rhamnosidase.

litchi；polyphenol；fractional extraction；CAA

檀彩蓮）

TS255.2；TS201.2

A

10.3969/ j.issn.2095-6002.2016.03.005

2095-6002（2016）03-0031-09

溫葉杰，肖娟，董麗紅，等.荔枝果肉多酚不同極性分部的構(gòu)成譜及其抗氧化活性比較［J］.食品科學技術(shù)學報，2016，34（3）:31 -39.

WEN Yejie，XIAO Juan，DONG Lihong，et al.Polyphenol components and antioxidant activities of three fractions extracted by different polar solvents from litchi pulp polyphenol extract［J］.Journal of Food Science and Technology，2016，34（3）: 31 -39.

2016- 05- 09

國家自然科學基金資助項目（31571828）；廣東省自然科學基金博士啟動項目（2014A030310328）；廣東省科技計劃項目（2016B070701012）。

溫葉杰，女，碩士研究生，研究方向為微生物與生化藥學；*張瑞芬，女，研究員，主要從事植物化學物質(zhì)的分離純化及其作用機制方面的研究。通信作者。