不同品種龍眼果肉酚類物質(zhì)的抗氧化活性比較

林耀盛，張名位，*，張瑞芬，郭棟梁，潘學(xué)文，魏振承，張 雁，劉 磊，唐小俊，鄧媛元，池建偉

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所/農(nóng)業(yè)部功能食品重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省農(nóng)產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510610；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所，廣東廣州 510640）

不同品種龍眼果肉酚類物質(zhì)的抗氧化活性比較

林耀盛1，張名位1，*，張瑞芬1，郭棟梁2，潘學(xué)文2，魏振承1，張 雁1，劉 磊1，唐小俊1，鄧媛元1，池建偉1

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所/農(nóng)業(yè)部功能食品重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省農(nóng)產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510610；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所，廣東廣州 510640）

為研究不同龍眼品種資源中酚類物質(zhì)、黃酮類化合物含量及其抗氧化性差異，選取廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所龍眼資源圃的24個(gè)龍眼品種，分析其果肉中游離態(tài)和結(jié)合態(tài)總酚、總黃酮物質(zhì)的含量，采用DPPH自由基清除能力、ABTS總抗氧化能力、FRAP抗氧化能力和氧自由基吸收能力ORAC四種不同方法評(píng)價(jià)其體外抗氧化能力差異；不同龍眼品種果肉總酚、總黃酮含量與DPPH、ABTS、FRAP、ORAC四種不同方法測(cè)定的抗氧化能力的變幅和變異系數(shù)較大，呈現(xiàn)出顯著的基因型差異；不同品種龍眼果肉的多酚和黃酮的含量分別與ABTS自由基清除能力、FRAP和ORAC呈極顯著（p＜0.01）正相關(guān)關(guān)系，而與DPPH自由基清除能力的EC50值呈極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（p＜0.01）。采用快速聚類法將24個(gè)不同品種的龍眼聚成多酚及總黃酮含量和抗氧化能力差異顯著的三大群類。不同品種龍眼果肉游離態(tài)和結(jié)合態(tài)酚類物質(zhì)含量與其抗氧化活性均呈顯著正相關(guān)關(guān)系，提示酚類物質(zhì)是龍眼果肉抗氧化活性的主要成分；酚類物質(zhì)和黃酮類物質(zhì)在龍眼果肉中主要以游離態(tài)存在，其中結(jié)合態(tài)平均占總酚含量的17.45%。

龍眼品種；酚類物質(zhì)；總黃酮；抗氧化活性；相關(guān)性

龍眼（Dimocarpus longan Lour.）為無患子科龍眼屬常綠果樹，是一種藥食兼用的滋補(bǔ)佳品，其果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，成為倍受人們推崇的“果中圣品”。Bazzano等［1 -2］研究認(rèn)為，龍眼的保健作用主要來源于其特有的生物活性物質(zhì)及其抗氧化作用。龍眼中的多酚和黃酮類物質(zhì)可保護(hù)機(jī)體細(xì)胞和組織免受活性氧和自由基攻擊造成的損傷，起到延緩細(xì)胞老化和預(yù)防疾病的作用。長(zhǎng)期以來，對(duì)龍眼的研究多集中在化學(xué)成分和理化性質(zhì)等方面［3 -4］，而對(duì)其生物活性方面研究較少，研究并開發(fā)此類天然生物活性的物質(zhì)具有非常重要的意義。龍眼果肉富含多酚、多糖、類黃酮等具有生物活性以及藥理活性的有效成分［5 -6］?，F(xiàn)代藥理研究表明，多酚和黃酮物質(zhì)均具有抗氧化［7］、抗腫瘤［8］、增強(qiáng)免疫力［9］、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌及神經(jīng)系統(tǒng)［10 -11］等活性，并且抗氧化作用是其多種生理活性功能的重要機(jī)制之一。王玲等［12］對(duì)龍眼多糖抗氧化能力進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)當(dāng)多糖質(zhì)量濃度大于100 μg/ mL時(shí)，濃度與羥自由基清除能力存在量效關(guān)系，但是超氧陰離子自由基的清除作用不太明顯。石俊等［13］研究了龍眼果肉干制過程前后的多酚含量、存在形式及單體酚的組成和其抗氧化能力的差異，經(jīng)干燥后龍眼果肉游離酚含量、FRAP抗氧化值和DPPH抗氧化能力值均顯著下降，結(jié)合酚含量及FRAP抗氧化值顯著上升。植物中酚類物質(zhì)呈現(xiàn)游離態(tài)和結(jié)合態(tài)兩種不同的存在形式。Sun等［14］對(duì)11種常見普通水果的研究表明，其總多酚含量中平均含有大約24%的結(jié)合酚，因而，單純用溶劑直接提取植物組織中可溶性酚類物質(zhì)往往造成對(duì)其總酚含量的低估而不能全面評(píng)價(jià)酚類物質(zhì)。一直以來，人們對(duì)龍眼果肉中酚類物質(zhì)的報(bào)道主要集中在游離態(tài)而忽視對(duì)結(jié)合態(tài)酚類物質(zhì)的研究，沒有較全面地評(píng)價(jià)其存在特征。因此，為了充分利用龍眼資源，本研究選取24個(gè)華南地區(qū)主栽龍眼品種，對(duì)不同品種龍眼的體外抗氧化活性差異進(jìn)行研究，試圖篩選出抗氧化活性強(qiáng)、總酚和總黃酮含量高的龍眼品種，為揭示龍眼抗氧化作用的物質(zhì)基礎(chǔ)提供依據(jù)，為龍眼的精深加工和栽培品種的選育提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 龍眼品種資源

24個(gè)龍眼品種均采摘自廣東省農(nóng)科院果樹研究所龍眼資源圃。龍眼品種包括:蜀冠、沙梨肉、駝背木、后壁埔、賜合種、雞卵眼、公媽本、后巷車、東壁、沙梨木、龍優(yōu)、石硤、紅核、羅傘木、硬赤殼、早白露、福眼、巨龍、水漲、烏龍嶺、普明庵、華露廣眼、儲(chǔ)良、油潭本，于2013年7—9月各品種成熟期進(jìn)行采摘。

1.1.2 儀器與試劑

UV-2450型紫外分光光度計(jì)，日本島津公司；N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海愛朗儀器有限公司；Tecan Infinite M200型多功能酶標(biāo)儀，瑞士Tecan科技有限公司；Folin -Ciocalteu試劑、沒食子酸、兒茶素等試劑補(bǔ)充Trolox（水溶性維生素E）、DPPH（1，1-二苯基-2-苦基苯肼）、ABTS（2，2′-偶氮二異丁基脒二鹽酸鹽）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，TPTZ（三吡啶三吖嗪）購(gòu)自Johnson Matthey公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 龍眼果肉游離態(tài)酚類物質(zhì)的提取

參考Zhang等［15 -16］的方法并稍作改進(jìn)。準(zhǔn)確稱取100.0 g不同品種的龍眼果肉在攪拌機(jī)內(nèi)攪拌3 min，加入經(jīng)4℃預(yù)冷的丙酮溶液（龍眼果肉與提取劑80%丙酮的質(zhì)量（g）與體積（mL）比例為1∶2），于冰浴中采用組織勻漿機(jī)均質(zhì)3 min，在4℃下5 000 r/ min離心5 min。將果渣沉淀重復(fù)提取一次，合并兩次上清液于45℃下旋轉(zhuǎn)蒸至無水狀態(tài)，蒸餾水定容至20 mL，分裝后在- 80℃保存?zhèn)溆谩Ｃ總€(gè)品種獨(dú)立重復(fù)3次。

1.2.2 龍眼果肉結(jié)合態(tài)酚類物質(zhì)的提取

參考Sun等［14，16］的方法，并稍作改進(jìn)。將1.2.1游離酚提取后的果渣沉淀物加入20 mL 4 mol/ L NaOH溶液，氮?dú)獗Ｗo(hù)下振蕩水解1 h，濃鹽酸中和至pH值為7.0后用乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取相，在45℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，殘余物用蒸餾水定容至10 mL，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 總酚含量的分析

參考Singleton等［17］的方法測(cè)定。將制備的游離酚/結(jié)合酚提取液用蒸餾水稀釋5～10倍，取0.5 mL蒸餾水和0.125 mL已稀釋的樣品溶液到試管中，加入0.125 mL Folin-Ciocalteu試劑，混勻。反應(yīng)6 min后，依次加入7 g/ L的Na2CO3溶液1.25 mL和蒸餾水1 mL，混勻，25℃下避光反應(yīng)90 min后，用紫外分光光度計(jì)在760 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光值。同時(shí)以0.125 mL甲醇代替提取液作為空白對(duì)照，配置不同濃度梯度的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線?？偡雍拷Y(jié)果以每100 g鮮果肉中所含的沒食子酸質(zhì)量表示，簡(jiǎn)寫為mg/100 g。每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次。

1.2.4 總黃酮含量分析

參考Dewanto等［18 -19］的方法并稍作改進(jìn)。0.3 mL稀釋后的游離酚/結(jié)合酚提取物加入1.5 mL蒸餾水和0.09 mL 5 g/ L的亞硝酸鈉溶液。反應(yīng)6 min后加入0.18 mL 10 g/ L的AlCl3·6H2O溶液，靜置5 min后加入0.6 mL 1 mol/ L的NaOH溶液，最后用蒸餾水補(bǔ)足至3 mL，在510 nm下測(cè)定其吸光值。同時(shí)以0.3 mL甲醇代替提取液作為空白對(duì)照，配置不同濃度梯度的兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線?？傸S酮含量結(jié)果以每100 g鮮果肉中所含的兒茶素質(zhì)量表示，簡(jiǎn)寫為mg/100 g。測(cè)定重復(fù)3次。

1.2.5 DPPH自由基清除能力測(cè)定

參考Zhang等［20 -21］的方法并稍作改進(jìn)。200 μL提取物或甲醇溶液（參比溶液）加入2.8 mL 70 μmol/ L的DPPH甲醇溶液，振蕩均勻后于暗室中反應(yīng)30 min，于515 nm下測(cè)定其吸光值。樣品的DPPH抗氧化能力表示為抑制率（I），計(jì)算公式見式（1）。式（1）中，Ac為參比甲醇實(shí)測(cè)吸光值，其范圍控制為0.700±0.002，As為樣品實(shí)測(cè)吸光值。同一樣品稀釋為6個(gè)不同濃度，分別測(cè)定其DPPH抗氧化能力，得到線性回歸曲線并計(jì)算該樣品半效應(yīng)濃度EC50值（EC50表示DPPH自由基清除能力I為50%時(shí)所需要的龍眼果肉酚類物質(zhì)提取物的質(zhì)量濃度，單位為mg/ mL）。測(cè)定重復(fù)3次。

1.2.6 ABTS自由基清除能力測(cè)定

采用Miller等［22］的方法并略加調(diào)整。7 mmol/ L 的ABTS+·與2.45 mmol/ L的過硫酸鉀用去離子水定容至25 mL，混合液在暗室下反應(yīng)12～16 h，形成ABTS+·自由基儲(chǔ)備液。測(cè)定前，將上述混合液與無水乙醇按照體積比1∶50比例混合，稀釋為工作液，在734 nm波長(zhǎng)調(diào)吸光度為0.700±0.020，于30℃下保溫備用。準(zhǔn)確移取100 μL稀釋后的提取液，與2 mL ABTS+·混勻，在30℃暗室中反應(yīng)30 min，于734 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度。以Trolox（水溶性維生素E）代替樣品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程: Y = -0.005 4X + 0.675 6（R2= 0.999 9）。ABTS抗氧化能力值以每100 g鮮果肉中所含的Trolox質(zhì)量（mg/100 g）表示。測(cè)定重復(fù)3次。

1.2.7 FRAP抗氧化能力測(cè)定

參考Foroogh等［23］的方法并略加修改。工作液的配制:300 mmol·L-1的醋酸鈉緩沖液（稱取1.823 g無水醋酸鈉和16 mL的冰乙酸，定容至1 L，pH值為3.6），10 mmol/ L的TPTZ（稱取0.078 g TPTZ，溶劑為40 mmol/ L的鹽酸溶液定容至25 mL），20 mmol/ L的FeCl3·6H2O（稱取0.135 2 g FeCl3·6H2O定容至25 mL），按照體積比為10∶1∶1的比例混合；使用前于37℃水浴中加熱10 min備用，避光現(xiàn)配現(xiàn)用。移取200 μL龍眼酚類物質(zhì)提取液，加入2.80 mL工作液，混勻后暗室反應(yīng)30 min，于593 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。以甲醇代替提取液作空白對(duì)照，Trolox為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。鐵離子還原抗氧化能力值（ferric reducing antioxidant power，F(xiàn)RAP）以每100 g鮮果肉中所含的Trolox質(zhì)量（mg/100 g）表示。測(cè)定重復(fù)3次。

1.2.8 ORAC抗氧化活性測(cè)定

參照Wolfe等［24］的方法。提取液用氮?dú)獯蹈珊笤儆?5 mmol/ L磷酸緩沖液稀釋至總酚含量在一定范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋或樣品等的溶解均使用75 mmol/ L磷酸鉀緩沖液（pH = 7.4）。首先向空白孔中加入20 μL磷酸緩沖液，其余孔中分別加入20 μL不同濃度的Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.25，12.50，25.00，50.00 μmol/ L）、樣品溶液或17.5 μmol/ L的沒食子酸溶液，另設(shè)加入40 μL磷酸鹽緩沖液和200 μL熒光素鈉工作液的F孔，各處理均設(shè)3個(gè)復(fù)孔。將96孔板放入熒光酶標(biāo)儀中37℃孵育10 min；除F孔外，每孔加入200 μL 0.96 μmol/ L熒光素鈉溶液，37℃孵育20 min；除F孔外，每孔再加入20 μL ABAP溶液（119 mmol/ L，臨用前用緩沖液配制），立即啟動(dòng)熒光酶標(biāo)儀，在37℃下以激發(fā)波長(zhǎng)485 nm，發(fā)射波長(zhǎng)538 nm連續(xù)測(cè)定各孔的熒光強(qiáng)度監(jiān)測(cè)熒光衰退情況，每4.5 min重復(fù)測(cè)定一次，測(cè)定35個(gè)循環(huán)值。將酚類提取液的自由基作用下熒光衰退曲線的延緩部分面積（Net AUC）帶入6.25，12.50，25.00 和50.00 μmol/ L標(biāo)準(zhǔn)抗氧化物質(zhì)Trolox的Net AUC 與Trolox濃度所做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到各提取液的氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity，ORAC）值，以每100 g樣品中所含Trolox質(zhì)量（μmol/100 g）表示，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

以24個(gè)不同龍眼品種果肉游離態(tài)和結(jié)合態(tài)酚類物質(zhì)含量、黃酮類物質(zhì)含量、DPPH自由基清除能力、ABTS清除活性、FRAP、ORAC為變量標(biāo)準(zhǔn)化后，采用系統(tǒng)聚類法進(jìn)行聚類分析；各變量之間相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同龍眼品種果肉總酚及總黃酮含量分布情況

24個(gè)品種龍眼果肉中游離和結(jié)合態(tài)總酚、總黃酮含量及變幅和變異系數(shù)結(jié)果見表1。24個(gè)不同品種龍眼果肉中游離酚含量的變幅為16.92～109.24 mg/100 g，平均值為62.29 mg/100 g，變異系數(shù)為43.55%，表明品種差異較大；結(jié)合態(tài)多酚含量變幅為3.67～23.30 mg/100 g，平均值為13.04 mg/100 g，變異系數(shù)為42.50%；總酚含量的變幅為22.09～132.47 mg/100 g，平均值為75.53 mg/100 g，變異系數(shù)為43.70%。不同龍眼品種果肉中酚類物質(zhì)以游離態(tài)為主，占總酚含量的76.50%～87.00%。

由表1可見，24個(gè)不同品種龍眼果肉中游離態(tài)黃酮含量的變幅為2.26～13.4 mg/100 g，平均值為6.59 mg/100 g，變異系數(shù)為45.18%，表明品種差異較大；結(jié)合態(tài)黃酮含量變幅為0.14～0.86 mg/100 g，平均值為0.42 mg/100 g，變異系數(shù)為51.89%；總黃酮含量的變幅為2.48～14.26 mg/100 g，平均值為7.01 mg/100 g，變異系數(shù)為45.31%。不同龍眼品種果肉中黃酮物質(zhì)以游離態(tài)為主，占總黃酮含量的89.9%～95.0%。

表1 不同品種龍眼果肉總酚和總黃酮含量的變幅和變異系數(shù)Tab.1 Ranges and CVs of total phenolic and flavonoid contents of fruit pulp from different longan varieties mg·100 g-1

2.2 不同龍眼品種果肉體外抗氧化活性分析

24個(gè)不同品種龍眼果肉中酚類物質(zhì)DPPH自由基清除能力結(jié)果見表2。DDPH清除能力大小用EC50值表示，該值越高，表明樣品清除自由基能力越弱。從表2結(jié)果看出，不同龍眼品種間清除DPPH自由基能力存在顯著差異。游離部分EC50值變幅為9.66～156.98 mg/ mL，平均值為53.63 g/ L，變異系數(shù)為95.58%；結(jié)合部分EC50值變幅范圍為57.92～928.15 g/ L（p＜0.05），平均值為255.84 g/ L，變異系數(shù)為95.27%，表明各品種間差異較大?？傮w而言，龍眼果肉游離部DPPH自由基清除能力強(qiáng)于結(jié)合部。

不同品種龍眼果肉中游離和結(jié)合態(tài)酚類提取物ABTS自由基清除能力結(jié)果見表3。游離部分ABTS自由基清除能力值變幅為108.61～336.62 mg/100 g，變異系數(shù)為35.33%，平均為211.99 mg/100 g；結(jié)合態(tài)清除能力值變幅為13.14～80.71 mg/100 g，平均為45.03 mg/100 g。不同品種龍眼果肉游離部分和結(jié)合部分清除ABTS自由基能力總和的變幅為134.73～447.33 mg/100 g，平均為257.02 mg/100 g，變異系數(shù)為36.70%。

表2 不同品種龍眼果肉酚類物質(zhì)的DPPH自由基清除能力Tab.2 DPPH radical scavenging capacity of free and bound forms of phenolic extracts from longan pulp of different varieties

續(xù)表2

不同品種龍眼果肉中游離態(tài)和結(jié)合態(tài)酚類提取物FRAP抗氧化能力結(jié)果見表4，游離態(tài)FRAP抗氧化能力變幅為55.80～334.98 mg/100 g，變異系數(shù)為40.61%，平均為184.81 mg/100 g；結(jié)合態(tài)FRAP抗氧化能力值變幅為11.87～73.05 mg/100 g，平均為41.97 mg/100 g。不同品種龍眼果肉中總FRAP抗氧化能力的變幅為67.68～407.03 mg/100 g，平均為226.77 mg/100 g，變異系數(shù)為40.08%。

不同品種龍眼果肉游離和結(jié)合態(tài)酚類提取物ORAC抗氧化能力見表5，游離態(tài)的ORAC值變幅范圍為1 410.78～5 728.89 mg/100 g，變異系數(shù)為36.99%，平均為3 244.96 mg/100 g；結(jié)合態(tài)ORAC值變幅為296.17～1 317.89 mg/100 g，平均為672.65 mg/100 g。不同品種龍眼果肉中總ORAC值的變幅為1 706.96～7 046.78 mg/100 g，平均為3 917.61 mg/100 g，變異系數(shù)為36.89%。

表3 不同品種龍眼果肉酚類物質(zhì)的ABTS抗氧化能力Tab.3 ABTS radical scavenging capacity of free and bound forms of phenolic extracts from longan pulp of different varieties

表4 不同品種龍眼果肉酚類物質(zhì)的FRAP抗氧化能力Tab.4 FRAP of antioxidant activity in phenolics of different varieties longan pulp

表5 不同品種龍眼果肉酚類物質(zhì)的ORAC抗氧化能力Tab.5 ORAC of antioxidant activity of phenolic extracts of fruit pulp from different longan varieties

續(xù)表5

2.3 抗氧化能力與酚類物質(zhì)含量的相關(guān)性分析

分別分析24個(gè)不同品種龍眼果肉中酚類物質(zhì)含量及抗氧化能力等各變量間的相關(guān)關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)見表6?？偡雍颗cDPPH自由基清除能力呈顯著負(fù)相關(guān)，其中游離態(tài)、結(jié)合態(tài)的相關(guān)系數(shù)分別為-0.832（p＜0.01），-0.830（p＜0.01）；總酚含量與FRAP抗氧化能力呈顯著正相關(guān)關(guān)系，其中游離態(tài)、結(jié)合態(tài)、總含量與FRAP抗氧化能力的相關(guān)系數(shù)分別為0.987（p＜0.01），0.958（p＜0.01），0.987 （p＜0.01）；總酚含量與ABTS抗氧化能力呈現(xiàn)顯著正相關(guān)關(guān)系，其中游離態(tài)、結(jié)合態(tài)、總含量與ABTS抗氧化能力的相關(guān)系數(shù)分別為0.976（p＜0.01），0.927（p＜0.01），0.974（p＜0.01）；總酚含量與ORAC抗氧化能力亦呈現(xiàn)顯著正相關(guān)關(guān)系，其中游離態(tài)、結(jié)合態(tài)、總含量與ORAC抗氧化能力的相關(guān)系數(shù)分別為0.992（p＜0.01），0.965（p＜0.01），0.989（p＜0.01）。

黃酮含量與DPPH抗氧化能力呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，其中游離態(tài)、結(jié)合態(tài)黃酮與DPPH自由基清除能力的相關(guān)系數(shù)分別為-0.823（p＜0.01）和-0.737 （p＜0.01），而與FRAP和ABTS抗氧化能力均呈顯著正相關(guān)。游離態(tài)、結(jié)合態(tài)、總黃酮含量與FRAP抗氧化能力的相關(guān)系數(shù)分別為0.827（p＜0.01），0.766（p＜0.01）和0.828（p＜0.01），與ABTS抗氧化能力的相關(guān)關(guān)系分別為0.882（p＜0.01），0.806（p＜0.01）和0.877（p＜0.01），與ORAC抗氧化能力的相關(guān)關(guān)系分別為0.864（p＜0.01），0.808（p＜0.01）和0.861（p＜0.01）。

表6 龍眼果肉酚類物質(zhì)含量與抗氧化活性的相關(guān)性Tab.6 Correlations between phenolics content of longan pulp and antioxidant activity

2.4 不同龍眼品種果肉酚類含量及黃酮含量和抗氧化活性的聚類分析

對(duì)24個(gè)龍眼品種抗氧化活性指標(biāo)進(jìn)行聚類分析，對(duì)數(shù)據(jù)采用不轉(zhuǎn)換方式，聚類距離采用歐式距離，聚類方法采用系統(tǒng)質(zhì)心聚類法，數(shù)據(jù)處理采用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見圖1和表7。由圖1可見，將24個(gè)龍眼品種聚成Ⅲ大類，其中，第Ⅰ大類由5個(gè)品種組成，第Ⅱ類由9個(gè)品種組成，第Ⅲ類由10個(gè)品種組成；由表7可以看出，第Ⅰ大類聚成的龍眼品種的游離酚、游離類黃酮含量和抗氧化活性均最高；第Ⅲ大類龍眼品種的游離酚含量和抗氧化活性在三大類中屬于中間水平，而其黃酮含量最高，與第Ⅰ大類中黃酮含量比較差異不顯著；第Ⅱ大類龍眼品種的游離酚、黃酮類等含量和抗氧化活性均在這三大類中含量最低。

表7 聚類分析聚成的三類龍眼品種其果肉酚類及黃酮類物質(zhì)含量和抗氧化能力差異比較Tab.7 Different comparison of phenolics and flavonoid content and antioxidant capacity with three broad categories on different types of longan pulp mg·100 g-1

圖1 不同龍眼品種果肉聚類分析圖Fig.1 Clustering results of different varieties of longan pulp

3 討 論

3.1 不同抗氧化活性評(píng)價(jià)方法的差異

大量研究發(fā)現(xiàn)，水果蔬菜中豐富的多酚、多糖和膳食纖維等活性物質(zhì)在防治人體慢性疾病中發(fā)揮了重要作用。來自蔬菜、水果等的酚類物質(zhì)是清除體內(nèi)自由基的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，雖然測(cè)定抗氧化能力的方法很多，但由于測(cè)定樣品的復(fù)雜性以及反應(yīng)體系機(jī)制的多樣性，目前還缺乏一種標(biāo)準(zhǔn)的方法全面評(píng)價(jià)植物提取物的抗氧化能力。Frankel［25］指出，只采用一種方法來評(píng)價(jià)抗氧化劑的活性是不科學(xué)的，難以全面體現(xiàn)不同龍眼品種抗氧化作用的差異性。目前對(duì)水果、蔬菜的抗氧化活性的評(píng)價(jià)多數(shù)采用的是清除自由基抗氧化能力的方法，主要包括有DPPH自由基清除能力、ABTS總抗氧化能力、FRAP抗氧化能力和氧自由基吸收能力ORAC等方法。本實(shí)驗(yàn)采用這4種方法測(cè)定不同品種龍眼果肉酚類物質(zhì)的抗氧化能力，結(jié)果具有很高的重現(xiàn)性，4種方法雖然數(shù)值上表示不同，但是其活性物質(zhì)抗氧化能力的強(qiáng)弱大體是一致的。DPPH、FRAP和ORAC三種方法測(cè)定所需的工作液，避光現(xiàn)配現(xiàn)用，而ABTS工作液則需要在暗室下反應(yīng)12～16 h，ABTS需經(jīng)活性氧氧化后，生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽(yáng)離子自由基ABTS+·儲(chǔ)備液后才可以使用。從實(shí)驗(yàn)成本上看，ORAC法測(cè)定采用多功能酶標(biāo)儀，而其他3種測(cè)定方法僅需要普通的分光光度計(jì)，相比之下，ORAC法所用的成本會(huì)昂貴些，但是其精密度和重現(xiàn)性更好。

3.2 不同龍眼品種的抗氧化活性的差異

本研究結(jié)果顯示，24個(gè)不同品種龍眼果肉中總酚的含量變幅為20.57～132.55 mg/100 g，平均為75.32 mg/100 g，不同品種龍眼果肉酚類物質(zhì)含量及其抗氧化能力差異顯著。植物中酚類物質(zhì)含量及其抗氧化活性差異，一方面受到地域差異如外在生長(zhǎng)環(huán)境、氣候、土壤肥沃程度以及種植技術(shù)等的影響，基因型的差異是造成這種差別的另一方面重要原因。本研究所采集的龍眼樣本均來自于同一種質(zhì)資源圃，其生長(zhǎng)環(huán)境和種植方法基本一致。因此，可以判斷，這種品種間的差別主要是由其基因型差異造成的。主栽品種龍眼（如早白露、烏龍嶺、后壁埔、石硤、儲(chǔ)良等品種）比其他少栽品種龍眼（硬赤殼、賜合種、后巷車、水漲）抗氧化能力高，這也是符合優(yōu)勝劣汰的自然選擇規(guī)律，同時(shí)也是品種的基因遺傳長(zhǎng)期積累的結(jié)果。

3.3 不同龍眼品種果肉酚類物質(zhì)的含量與抗氧化能力相關(guān)性

酚類物質(zhì)是植物重要的次級(jí)代謝產(chǎn)物，對(duì)植物的品質(zhì)、色澤、風(fēng)味等有一定的影響，同時(shí)還具有抗氧化、抗癌、抗逆等重要作用，能有效清除體內(nèi)過剩的自由基，抑制脂質(zhì)過氧化，對(duì)自由基誘發(fā)的生物大分子損傷起到保護(hù)作用［26 -27］。富含酚類物質(zhì)的食物對(duì)防止冠心病、預(yù)防癌癥具有重要意義，使得國(guó)內(nèi)外對(duì)酚類物質(zhì)的研究十分活躍。

本研究結(jié)果表明，不同品種龍眼果肉的DPPH自由基清除能力的EC50值分別與其多酚、黃酮含量呈現(xiàn)顯著的負(fù)相關(guān)性（p＜0.05），與FRAP值、ABTS值和ORAC值呈現(xiàn)極顯著的正相關(guān)性（p＜0.01）。DPPH的EC50值越小，說明物質(zhì)抗氧化能力越強(qiáng)，因此說明，運(yùn)用DPPH、FRAP、ABTS和ORAC四種不同的抗氧化評(píng)價(jià)方法測(cè)定的龍眼果肉抗氧化活性與其酚類物質(zhì)含量具有顯著的正相關(guān)關(guān)系，提示酚類物質(zhì)是龍眼果肉中抗氧化活性的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。目前常用的多酚類物質(zhì)的制備方法得到的僅僅是游離酚部分，在抗氧化活性和含量的研究過程中均沒有把結(jié)合態(tài)多酚考慮在內(nèi)，這就大大低估了各種植物中多酚的含量及其活性。本研究顯示，24個(gè)不同品種龍眼果肉結(jié)合態(tài)酚含量高達(dá)13.21 mg/100 g，占總酚含量約17.45%，而Sun等［14］對(duì)11種常見普通水果的研究表明其總多酚含量中平均含有大約24%的結(jié)合酚。因而，單純用溶劑直接提取植物組織中可溶性酚類物質(zhì)，往往造成對(duì)其總酚含量的低估，而不能全面的評(píng)價(jià)酚類物質(zhì)，這與本文研究結(jié)果結(jié)論基本一致。這些結(jié)合態(tài)的活性組成，主要是β-糖苷結(jié)合物，因不能被人體內(nèi)的消化酶消化而能存在于腸胃消化系統(tǒng)，甚至可以到達(dá)結(jié)腸部位。有學(xué)者推測(cè)，這些結(jié)合態(tài)酚類組分可能通過腸道微生物菌群的酵解作用破壞其共價(jià)鍵，促進(jìn)酚類物質(zhì)釋放出來，從而發(fā)揮健康作用［28 -29］，可見結(jié)合酚也是龍眼果肉重要的生物活性成分。

本研究結(jié)果表明，不僅游離態(tài)酚類物質(zhì)含量與其抗氧化活性間存在顯著相關(guān)性，結(jié)合態(tài)酚類物質(zhì)也同樣存在相關(guān)性。不同品種龍眼果肉中抗氧化能力隨著酚類物質(zhì)的含量的變化而呈現(xiàn)顯著性，可見酚類物質(zhì)含量是抗氧化能力強(qiáng)弱一個(gè)重要的表征。

4 結(jié) 論

不同品種龍眼果肉游離態(tài)和結(jié)合態(tài)酚類物質(zhì)含量與其抗氧化活性均呈顯著正相關(guān)關(guān)系，提示酚類物質(zhì)是龍眼果肉抗氧化活性的主要成分；酚類物質(zhì)和黃酮類物質(zhì)在龍眼果肉中主要以游離態(tài)存在，其中結(jié)合態(tài)占總酚含量的17.45%。將24個(gè)龍眼品種聚成Ⅲ類，第Ⅰ類酚類物質(zhì)及黃酮類物質(zhì)的含量和抗氧化活性最高，而第Ⅲ類則最低。

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Comparison of Phenolic Contents and Antioxidant Activity of Fruit Pulp from Different Longan Varieties

LIN Yaosheng1，ZHANG Mingwei1，*，ZHANG Ruifen1，GUO Dongliang2，PAN Xuewen2，WEI Zhencheng1，ZHANG Yan1，LIU Lei1，TANG Xiaojun1，DENG Yuanyuan1，CHI Jianwei1
（1.Sericulture and Agri-Food Research Institute，Guangdong Academy of Agricultural Sciences/ Key Laboratory of Functional Foods，Ministry of Agriculture/ Guangdong Key Laboratory of Agricultural Products Processing，Guangzhou 510610，China；2.Institute of Pomology，Guangdong Academy of Agricultural Sciences，Guangzhou 510640，China）

The correlation of the in vitro antioxidant activity with contents of total phenol and flavonoid in fruit pulp of 24 longan varieties was analyzed.The contents of free and bound phenolics，total flavonoids and total phenol in 24 varieties of longan pulp from Institute of Pomology of Guangdong Academy of Agricultural Sciences were investigated.The radical scavenging ability（DPPH），total antioxidant capacity （ABTS），antioxidant capacity（FRAP），and absorptive capacity of oxygen free radicals（ORAC）were determined for evaluating their in vitro antioxidant capacity difference.The total polyphenols，flavonoids，DPPH，F(xiàn)RAP，ABTS and ORAC methods were used to determine the antioxidant abilities of phenolic extracts of different longan pulp varieties.Results showed that a significant difference（p＜0.01）existed in the capacity of pulp phenolic extracts of different longan varieties and displayed significant genotype differences.The longan varieties with the higher content polyphenol and flavone showed stronger antioxidant activity.The quick clustering method was used to evaluate polyphenols and flavonoids content and antioxidant capacity in 24 varieties of longan pulp，dividing into three group of classes with significant difference.The polyphenols or flavonoids content positively correlated with the ABTS，F(xiàn)RAP，and ORAC analysis while it negatively related with the DPPH radical scavenging capacity（p＜0.01）.Thus，phenolics and flavonoids exist mainly in the free form in longan pulp.Phenolics of longan pulp had played an important role in antioxidant activity.

longan variety；phenolic contents；total flavonoid；antioxidant activity；correlation

葉紅波）

TS255.1；TS201.2

A

10.3969/ j.issn.2095-6002.2016.03.004

2095-6002（2016）03-0020-11

林耀盛，張名位，張瑞芬，等.不同品種龍眼果肉酚類物質(zhì)的抗氧化活性比較［J］.食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報(bào)，2016，34（3）: 20 -30.

LIN Yaosheng，ZHANG Mingwei，ZHANG Ruifen，et al.Comparison of phenolic contents and antioxidant activity of fruit pulp from different longan varieties［J］.Journal of Food Science and Technology，2016，34（3）:20 -30.

2016- 05- 10

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（31301459）；廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2014A030313568）；廣州市珠江科技新星專項(xiàng)項(xiàng)目（201506010028）；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2014A070713013，2016B070701012）。

林耀盛，男，助理研究員，碩士，主要從事農(nóng)產(chǎn)品加工方面的研究；*張名位，男，研究員，博士，主要從事農(nóng)產(chǎn)品加工和功能食品方面的研究。通信作者。