神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)實(shí)驗(yàn)性顱腦外傷大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制分析

孫衛(wèi)

神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)實(shí)驗(yàn)性顱腦外傷大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制分析

孫衛(wèi)

目的 探究神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)實(shí)驗(yàn)性顱腦外傷大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制。方法 選取168只剛出生1周的SD大鼠并分為3組，各56只。空白組進(jìn)行假手術(shù)，沒有顱腦外傷；對(duì)照組出現(xiàn)顱腦外傷，腹腔注射生理鹽水；觀察組存在顱腦外傷，腹腔注射神經(jīng)節(jié)苷脂。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，觀察組死亡率為23.81%，明顯低于對(duì)照組的66.67%（P＜0.05）；觀察組與對(duì)照組大鼠大腦海馬區(qū)的Nestin 0～24時(shí)表達(dá)明顯比空白組高（P＜0.05）；觀察組大鼠大腦海馬區(qū)NGF表達(dá)的第0～24時(shí)都明顯比對(duì)照組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組大鼠大腦海馬區(qū)NGF表達(dá)的第0～16時(shí)明顯比空白組高（P＜0.05）；觀察組大鼠海馬區(qū)NGF表達(dá)根據(jù)時(shí)間的增長(zhǎng)而降低但仍比對(duì)照組高。結(jié)論 神經(jīng)節(jié)苷脂預(yù)防性的利用，能夠促使提高顱腦外傷模型大鼠大腦海馬區(qū)的NGF表達(dá)，并降低顱腦外傷造模大鼠的死亡率。

神經(jīng)節(jié)苷脂；顱腦外傷；保護(hù)作用

根據(jù)相關(guān)研究報(bào)告顯示，近年來，我國發(fā)生顱腦損傷患者越來越多，患病率逐漸增高，已經(jīng)成為臨床腦外傷常見病及高發(fā)病之一[1]。顱腦外傷具有突發(fā)性，多是由外界暴力直接或間接對(duì)患者頭部造成損傷，該病癥的病情復(fù)雜、臨床治療風(fēng)險(xiǎn)較大并且臨床表現(xiàn)變化較快[2]。顱腦損傷是現(xiàn)階段存在發(fā)病率較高、致殘與致死率較高的一種創(chuàng)傷性疾病[3]。本研究對(duì)神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)實(shí)驗(yàn)性顱腦外傷大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制進(jìn)行探究，為治療顱腦外傷選取藥物提供參考，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇168只剛出生1周的SD大鼠為研究對(duì)象，均為健康雄性，體質(zhì)量在180～270 g。將其隨機(jī)分為3組，各56只。給藥方式如下：空白組和對(duì)照組術(shù)前給予腹腔生理鹽水注射，按20 mL/kg給藥，1次/d，持續(xù)注射3 d；實(shí)驗(yàn)組，給予腹腔神經(jīng)節(jié)苷脂（GMI，商品名“申捷”，夏邑醫(yī)藥公司，國藥準(zhǔn)字H 20059887，濃度為2 mg/mL）注射，與上述時(shí)間保持一致。

1.2 建立有效的動(dòng)物手術(shù)以及顱腦外傷模型 利用特殊的造模打擊裝置，根據(jù)相關(guān)研究對(duì)大鼠顱腦外傷模型的制作模式將動(dòng)物模型進(jìn)行建立。大鼠造模前，禁止飲食8 h，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的過程中大鼠保持俯臥位，固定腦立體定向儀，對(duì)皮膚進(jìn)行消毒，按照每千克體質(zhì)量0.35 g以10%水合氯醛在其腹腔內(nèi)進(jìn)行麻醉注射，在正中將頭皮切開會(huì)后對(duì)骨膜進(jìn)行剝離，將右頂骨充分暴露出來，隨后利用牙科鉆在冠狀縫1.5 mm后以及距離中線2.5 mm處鉆1個(gè)直徑為5 mm的骨窗，并確保骨膜的完整性。

1.3 動(dòng)物大腦標(biāo)本的提取 手術(shù)完成后，到第0、2、4、8、12、16、24 h時(shí)間點(diǎn)，從每組大鼠中各選出5只大鼠，從頸動(dòng)脈取血，將大鼠處死，進(jìn)而提取海馬組織。提取海馬組織的方法如下：首先割斷大鼠頭部，然后將頭部正中隆起處的下丘腦切下，將小腦和腦干切除，順著大腦失狀裂縱行切開大腦半球，剝開枕葉內(nèi)側(cè)丘腦和項(xiàng)葉額葉內(nèi)側(cè)紋狀體，將邊緣系統(tǒng)暴露出來，用藥匙將雙側(cè)海馬組織慢慢剝離，放到凍存管中冷凍保存，冷存溫度為－80℃。待全部標(biāo)本提取好以后，分別取每份標(biāo)本2 g，量取pH值為7.4的PBS 2 mL，將其混合研成勻漿，再利用離心器將其分離，最后提取上清液，分別將其裝好以后測(cè)量、備用。

1.4 測(cè)量神經(jīng)巢蛋白以及神經(jīng)生長(zhǎng)因子 根據(jù)芬蘭酶標(biāo)分析儀與洗板機(jī)（型號(hào)分別為352型與AC 8）和神經(jīng)節(jié)苷脂與Nestin酶聯(lián)免疫分析試劑盒（上海酶聯(lián)生物技術(shù)有限公司）的具體操作表明對(duì)神經(jīng)巢蛋白與神經(jīng)生長(zhǎng)因子進(jìn)行測(cè)量。也就是根據(jù)包裝加底物液顯色等，在酶標(biāo)儀的450 nm波長(zhǎng)位置處，根據(jù)空白管調(diào)零的方式對(duì)吸光度進(jìn)行測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究所有數(shù)據(jù)均采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計(jì)數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對(duì)照組術(shù)后死亡率的對(duì)比 2組術(shù)后建立顱腦外傷模型，對(duì)整個(gè)研究過程進(jìn)行觀察，其中觀察組56只在手術(shù)過程中處死35只，另外21只大鼠中有5只自然死亡，死亡率為23.81%，對(duì)照組56只在手術(shù)過程中處死35只，另外21只大鼠中有14只自然死亡，死亡率為66.67%，觀察組死亡率明顯比對(duì)照組低，2組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 每組大鼠不同時(shí)段內(nèi)大腦海馬區(qū)Nestin表達(dá)的變化情況 觀察組大鼠大腦海馬區(qū)Nestin 0～24時(shí)表達(dá)與對(duì)照組的對(duì)比差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。觀察組與對(duì)照組大鼠大腦海馬區(qū)的Nestin 0～24時(shí)表達(dá)明顯比空白組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 每組大鼠不同時(shí)間內(nèi)大腦海馬區(qū)Nestin表達(dá)的變化情況對(duì)比（x±s，n=56）

2.3 每組大鼠不同時(shí)間內(nèi)大腦海馬區(qū)NGF表達(dá)的變化情況對(duì)比 觀察組大鼠大腦海馬區(qū)NGF表達(dá)的第0～24時(shí)都明顯比對(duì)照組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組第0～16時(shí)明顯比空白組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；同時(shí)，觀察組大鼠海馬區(qū)NGF的表達(dá)會(huì)根據(jù)時(shí)間的增長(zhǎng)而降低，到第24時(shí)降到空白組的水平，但此時(shí)的水平仍然比對(duì)照組高。見表2。

表1 每組大鼠不同時(shí)間內(nèi)大腦海馬區(qū)NGF表達(dá)的變化情況對(duì)比（x±s，n=56）

3 討論

中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中應(yīng)用神經(jīng)節(jié)苷脂，能夠促使其快速修復(fù)，神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)內(nèi)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子前體具有重要的增強(qiáng)作用[4-6]，能夠促使神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的活性不斷增強(qiáng)，有助于神經(jīng)快速生長(zhǎng)與恢復(fù)，其作用機(jī)制還需要深入的進(jìn)行探究。Nestin屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的特殊中間絲蛋白，出生后快速降低直至消失，只是在部分保持神經(jīng)發(fā)生功能處存在表達(dá)[7-8]。Nestin能夠?qū)⒅袠猩窠?jīng)系統(tǒng)的損傷情況及早地反映出來，同時(shí)，也是能夠較快應(yīng)答的一種敏感標(biāo)識(shí)。神經(jīng)生長(zhǎng)因子屬于最先發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子中的重要組成部分，也是神經(jīng)系統(tǒng)中主要的生物活性物質(zhì)，神經(jīng)生長(zhǎng)因子的2個(gè)重要功能分別為神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)功能、促突起生長(zhǎng)雙重生物學(xué)功能，能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)元的損傷修復(fù)以及功能恢復(fù)。

本研究結(jié)果表明，神經(jīng)節(jié)苷脂預(yù)防性的利用，能夠促使顱腦外傷模型大鼠大腦海馬區(qū)的NGF表達(dá)有顯著提高，能夠有效降低顱腦外傷造模大鼠的死亡率。

[1] 金玲,黃民江,李洪亮,等.神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)實(shí)驗(yàn)性顱腦外傷大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制[J].中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志,2013,28(12):1142-1145.

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[4] 李紅星，苑國富，金耀東,等.神經(jīng)干細(xì)胞移植聯(lián)用神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)腦損傷大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的影響[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2011,15（40）:7505-7510.

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.25.008

江西 330006 江西省人民醫(yī)院神經(jīng)外科 （孫衛(wèi)）