RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及臨床意義

曾丹 華金仁 安云婷

RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及臨床意義

曾丹 華金仁 安云婷

目的 對(duì)RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行分析探討，為今后的臨床診治工作提供有價(jià)值的參考信息。方法 選擇手術(shù)切除的卵巢上皮性癌石蠟組織標(biāo)本50例為實(shí)驗(yàn)組，選擇同期良性卵巢上皮腫瘤20例、正常卵巢組織20例作為對(duì)照組，采取免疫組化法對(duì)RBM 3的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 對(duì)比發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)組中RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率較良性卵巢上皮腫瘤、正常卵巢組織檢測(cè)結(jié)果發(fā)生顯著升高（P＜0.05）；在FIGOⅢ～Ⅳ期中的表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期（P＜0.05）；低分化陽(yáng)性率高于高、中分化（P＜0.05）；有腹水者表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)腹水組（P＜0.05）。結(jié)論 RBM 3對(duì)卵巢癌的發(fā)生以及發(fā)展產(chǎn)生了促進(jìn)作用，在今后的臨床工作中，應(yīng)對(duì)其給予足夠的重視。

RBM 3；卵巢上皮性癌；免疫組成；臨床意義

本次研究中，出于對(duì)RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行分析探討，為今后的臨床診治工作提供有價(jià)值的參考信息的目的，對(duì)卵巢上皮性癌、良性卵巢上皮腫瘤以及正常卵巢組織采取免疫組化法進(jìn)行了RBM 3表達(dá)水平檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月～2013年12月在江西省婦幼保健院收治的手術(shù)切除的卵巢上皮性癌石蠟組織標(biāo)本50例為實(shí)驗(yàn)組。所有石蠟組織標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)確診[1]。所有對(duì)象均未接受過(guò)放、化療及手術(shù)處理。對(duì)照組分別為同期良性卵巢上皮腫瘤20例、正常卵巢組織20例（子宮肌瘤同時(shí)行附件切除的卵巢組織，術(shù)后病理證實(shí)為正常卵巢組織）。卵巢癌患者年齡32～76歲，平均（51.1±13.2）歲，F(xiàn)IGO分期情況：Ⅰ～Ⅱ期者18例，Ⅲ～Ⅳ期者32例。病理分級(jí)情況：高、中分化者16例，低分化者34例。有腹水者19例，無(wú)腹水者31例。有淋巴轉(zhuǎn)移者21例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者29例。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 選擇手術(shù)切除的卵巢上皮性癌石蠟組織標(biāo)本50例為實(shí)驗(yàn)組，選擇同期良性卵巢上皮腫瘤20例、正常卵巢組織20例作為對(duì)照組，采取免疫組化法對(duì)RBM 3的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.2.2 檢測(cè)方法

（1）蠟塊篩選的步驟：從資料庫(kù)中，選取合適的病例，登記每例病例所有玻片號(hào)。從玻片庫(kù)中，找到每例病例的所有玻片，在顯微鏡下篩選出最適合做免疫組化的玻片，并登記所選玻片號(hào)。根據(jù)所登記的玻片號(hào)，從蠟塊庫(kù)中，找到相應(yīng)的蠟塊，用于制作組織切片。

（2）高壓抗原修復(fù)操作方法：常規(guī)組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度酒精水化后，浸泡于蒸餾水中待用。取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液（800～1 500 mL）于壓力鍋中，大火加熱直至沸騰；將脫蠟水化后的組織切片置于不銹鋼或耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中。蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，繼續(xù)加熱至噴氣，從噴氣開(kāi)始計(jì)時(shí)，1～2 min后，壓力鍋離開(kāi)熱源，冷卻至室溫（稍冷后，可在自來(lái)水籠頭下加速冷卻），取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS（pH=7.2～7.4）沖洗2次，每次3 min。

（3）免疫組化染色步驟：將切片脫蠟后沖洗干凈，放入塑料欄裝好，并用蒸餾水沖洗一遍。在塑料欄中倒入檸檬酸液后放入微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)。從微波爐中取出冷卻15 min后，把檸檬酸液倒掉，然后用蒸餾水沖洗1遍，將玻片堆放在試劑盒中畫(huà)圈，畫(huà)圈后再用PBS沖洗1遍。沖洗后滴加過(guò)氧化氫（即去離子水），室溫下孵育10 min。PBS沖洗3×3’遍。甩去PBS液，每張切片分別加一抗，室溫下孵育一中午。PBS沖洗3×3’遍。加增強(qiáng)劑A（1 Polymer Helper），室溫下孵育20 min。PBS沖洗3×3’遍。加二抗（2 Polymer HRPGOat antl-mouse & Rabblt lgG），室溫下孵育30 min。PBS沖洗3×3’遍。甩去PBS液，每張切片加2滴或100 μL新鮮配制的DAB。PBS沖洗1×3’遍。蒸餾水或自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，0.1%鹽酸分化，自來(lái)水沖洗，PBS沖洗返藍(lán)。蒸餾水或自來(lái)水沖洗，切片經(jīng)過(guò)梯度酒精脫水干燥后用（二甲苯透明）中性樹(shù)膠封片。

1.3 結(jié)果評(píng)價(jià) RBM 3染色為細(xì)胞核陽(yáng)性, 故以胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽(yáng)性細(xì)胞。參照Toula Bouras評(píng)分標(biāo)準(zhǔn): 在

20倍物鏡下計(jì)數(shù)500～1 000個(gè)腫瘤細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞≤10%為1分、＞10%～50%為2分、＞50%～75%為3分、＞75%為4分。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):無(wú)色為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。兩種得分相加后得1分為陰性、2～3分為陽(yáng)性(+)、4～5分為較強(qiáng)陽(yáng)性(++)，6～7分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)[2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理。各組間樣本率的差異采用四格表資料的Fisher確切概率法處理,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組受試者中RBM 3表達(dá)情況比較 對(duì)比發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)組中RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率為76.00%，在良性卵巢上皮腫瘤中

RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率為40.00%，在正常卵巢組織中RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率為25.00%，顯然，在卵巢上皮性癌中RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率較良性卵巢腫瘤、正常卵巢組織發(fā)生顯著升高（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 3組受試者中RBM 3表達(dá)情況比較(n)

2.2 卵巢癌患者不同F(xiàn)IGO分期者中RBM 3的表達(dá)情況比較 FIGOⅠ～Ⅱ期者RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率為66.67%（12/18），F(xiàn)IGOⅢ～Ⅳ期者RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率為81.25%（26/32）。顯然在FIGOⅢ～Ⅳ期中的表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期（P＜0.05）。

2.3 卵巢癌患者不同病理分級(jí)者中RBM 3的表達(dá)情況比較 病理分級(jí)為低分化者RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率為82.35%（28/ 34），高、中分化者RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率為62.50%（10/16），顯然病理分級(jí)低分化陽(yáng)性率高于高、中分化（P＜0.05）。

2.4 卵巢癌患者有無(wú)腹水者RBM 3的表達(dá)情況比較 有腹水者RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率為84.21%（16/19），無(wú)腹水者RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率為70.96%（22/31），顯然有腹水者表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)腹水組（P＜0.05）。

3 討論

研究證實(shí)[3-4]，RBM 3可能通過(guò)改變細(xì)胞微小RNA水平控制球蛋白的表達(dá)水平來(lái)影響腫瘤的進(jìn)展。此外，RBM 3被認(rèn)為是一種潛在的原癌基因，有下以幾個(gè)原因：（1）RBM 3的表達(dá)水平與腫瘤的分期有關(guān)，表明其可能與腫瘤的發(fā)生有關(guān)；（2）RBM 3沉默增加了G2/M期細(xì)胞的數(shù)量，并最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡；（3）RBM 3可以提高環(huán)氧化酶-2、IL-8和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的

mRNA的穩(wěn)定與翻譯。眾所周知，mRNA的翻譯水平的改變?cè)诩?xì)胞轉(zhuǎn)化與腫瘤發(fā)生中起重要作用，RBM 3直接與mRNA結(jié)合，可能改變mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)，影響起始因子和核糖體亞基的訪問(wèn)，并調(diào)節(jié)他們的激酶的潛在活性。探討冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白的分子調(diào)控機(jī)制非常重要，因?yàn)樗鼈兊目赡芘c更廣泛的生理功能和多種人類(lèi)疾病的生物學(xué)進(jìn)程有關(guān)，包括腫瘤的發(fā)生。

本次研究中，出于對(duì)RBM 3在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行分析探討，為今后的臨床診治工作提供有價(jià)值的參考信息的目的，對(duì)卵巢上皮性癌、良性卵巢上皮腫瘤以及正常卵巢組織采取免疫組化法進(jìn)行了RBM 3表達(dá)水平檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)組中RBM 3表達(dá)陽(yáng)性率較良性卵巢上皮腫瘤、正常卵巢組織檢測(cè)結(jié)果發(fā)生顯著升高，在

FIGOⅢ-Ⅳ期中的表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期，低分化陽(yáng)性率高于高、中分化，有腹水者表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)腹水組。這一結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)[5-6]報(bào)道結(jié)果相似，由此證實(shí)，RBM 3在卵巢癌組織中呈現(xiàn)出異常表達(dá)，證實(shí)其可能參與到卵巢癌血管生成，對(duì)卵巢癌的發(fā)生以及發(fā)展產(chǎn)生了促進(jìn)作用，在今后的臨床工作中，應(yīng)對(duì)其給予足夠的重視。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.31.009

江西 330006 江西省婦幼保健院 （曾丹 華金仁 安云婷）