禽腺病毒4型感染的診斷與防制

張磊 張宇 李巧 楊興武 張鴻鑫 陳紅英

摘 要：2015年8月，河南新鄭某雞場(chǎng)30日齡肉雞突然出現(xiàn)死亡。病死雞心包內(nèi)存在大量積液，肝臟充血、腫大。PCR檢測(cè)禽腺病毒4型核酸，呈現(xiàn)陽(yáng)性，結(jié)合發(fā)病情況和剖檢病變，診斷為禽腺病毒4型感染。然后對(duì)該雞場(chǎng)采取了綜合防制措施，取得了較好的效果。

關(guān)鍵詞：心包積液；禽腺病毒4型；診斷；防制

中圖分類號(hào) S852.65 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2016）10-0116-02

Diagnosis and Preventive Treatment of Fowl Adenovirus-4 Infection

Zhang Lei1，2 et al.

（1College of Animal Science and Veterinary Medicine，Henan Agricultural University，Zhengzhou 450002，China；2Henan Vocational College of Agriculture，Zhengzhou 451450，China）

Abstract：In August 2015，some thirty-day-old broilers in Henan Province were affected with a disease characterized by an accumulation of near-amber fluid in the pericardial sac and an enlarged discolored liver with foci of hemorrhage. Fowl adenovirus-4 was positive for PCR detection. Combined with the epidemiology investigation，and autopsy results，infection of fowl adenovirus-4 was diagnosed. Then the situation had been effectively controlled by the integrated prevention measures.

Key words：Hydropericardium；Fowl adenovirus-4；Diagnosis；Preventive treatment

禽心包積水-包涵體肝炎綜合征（Hydropericardium Syndrome-Inclusion Body Hepatitis，HPS-IBH）是主要由禽腺病毒4型（Fowl Adenovirus-4，F(xiàn)AV-4）引起的一種高度傳染性和高死亡率的新型家禽疾病。該病的發(fā)病特征為3～5周齡雞突然死亡，死亡率高達(dá)80%[1]。該病沒有明顯的臨床癥狀，個(gè)別雞在死亡前出現(xiàn)精神沉郁、羽毛卷曲等臨床表現(xiàn)。病死雞的剖檢病變，主要為心包腔中蓄積有大量的淡黃色水樣或膠狀液體，心臟松弛，肝臟充血、腫大。該病呈急性經(jīng)過，死亡率高，給禽業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

2015年8月，河南新鄭某雞場(chǎng)30日齡肉雞突然出現(xiàn)死亡，剖檢可見大量心包積液、肝臟腫大充血和腎臟充血腫大等病變。根據(jù)發(fā)病情況、剖檢變化和實(shí)驗(yàn)室診斷，診斷為禽腺病毒4型感染。

1 發(fā)病情況

該雞場(chǎng)飼養(yǎng)了2 000多只30日齡肉雞，雞群中突然出現(xiàn)雞只零星死亡，3d后死亡數(shù)高達(dá)100多只，剖檢病死雞，可見大量心包積液、肝臟腫大充血和腎臟充血腫大。常用藥物均不能達(dá)到良好的控制效果。

2 臨床癥狀與剖檢結(jié)果

臨床癥狀不明顯，呈急性死亡。個(gè)別雞在死亡前出現(xiàn)體溫升高、積聚堆積、食欲下降、精神不振、垂頭閉眼等不良表現(xiàn)。病死雞剖檢主要呈現(xiàn)為心包腔內(nèi)有大量淡黃色液體或果凍狀物，偶見心包有綠色液體，肝臟充血腫大、質(zhì)脆色淡，心肌松弛，脾臟、腎臟充血腫大，肺臟水腫，個(gè)別病例出現(xiàn)法氏囊腫大以及腸道血管堵塞。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 病料DNA提取 剖檢病死雞，采集肝臟組織，剪碎、研磨混合后，按1∶5比例加入生理鹽水制成組織懸液，反復(fù)凍融3次后，離心取上清液400μL，加入等體積SDS裂解液（終濃度為100μg/mL），再加入6μL蛋白酶K（終濃度為200μg/mL），使其充分混勻，置于55℃水浴條件下消化3h；加入等體積Tris平衡酚，混勻，12 000r離心5min；取上清液，經(jīng)等體積酚∶氯仿∶異戊醇（25∶24∶1）、氯仿：異戊醇（24∶1）、氯仿各抽提1次，加入1.5倍體積異丙醇于-70℃放置30min，使其沉淀，12 000r離心5min棄上清液，取500μL70%乙醇洗滌2次；自然干燥后用20μL ddH2O溶解，貯存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

3.2 引物設(shè)計(jì)與合成 據(jù)報(bào)道FAV-4六鄰體的抗原表位區(qū)主要集中在前段、中段，具有型和群特異性表位，可作為診斷型和群的首選蛋白[2]。因此，根據(jù)GenBank公布的FAV-4GC株Hexon基因序列（EU177544）保守）區(qū)段，使用引物設(shè)計(jì)軟件，設(shè)計(jì)了1對(duì)引物，預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段為421bp。上游引物為P1：5′-CGAGGTCTATACCAACACGAGCA-3′；下游引物為P2：5′-CGGCGCAGGTTAATGAAGTTATC-3′。

3.3 PCR擴(kuò)增 PCR反應(yīng)采用25μL體系：Premix Taq12.5μL，上下游引物（50μmol/L）各0.5μL，模板DNA 3μL，用滅菌的ddH2O補(bǔ)至25μL。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min；95℃變性50s、53℃退火45s、72℃延伸50s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。PCR反應(yīng)完畢后，取6μL PCR產(chǎn)物，1.0%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，于紫外燈下觀察電泳結(jié)果。電泳結(jié)果顯示，待檢樣本中可擴(kuò)增出1條約400bp的目的條帶（圖1），而陰性對(duì)照未出現(xiàn)條帶。而用禽流感病毒、新城疫病毒和雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）的引物，進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果均為陰性。再結(jié)合發(fā)病情況和剖檢變化，診斷為禽腺病毒4型感染。

4 防治措施

應(yīng)采取綜合防治措施，飼養(yǎng)管理、防疫、消毒、免疫及監(jiān)測(cè)5個(gè)環(huán)節(jié)缺一不可。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，注意飼料營(yíng)養(yǎng)，減少應(yīng)激，提高雞群的整體健康水平；特別強(qiáng)調(diào)各階段、各批次雞整進(jìn)整出。嚴(yán)格執(zhí)行防疫和消毒制度，杜絕強(qiáng)毒污染和入侵，同時(shí)使用疫苗和藥物進(jìn)行預(yù)防。堅(jiān)持定期的免疫監(jiān)測(cè)，隨時(shí)調(diào)整免疫計(jì)劃，使雞群始終保持有效的抗體水平。值得注意的是，IBDV和雞傳貧血病毒都能誘發(fā)腺病毒的感染與致病，所以家禽應(yīng)正確地接種這兩種疾病的疫苗。

對(duì)于FAV-4引起的禽心包積水-包涵體肝炎綜合征，目前尚無(wú)有效的治療藥物。平時(shí)采取綜合防制措施和FAV-4滅活疫苗免疫接種進(jìn)行預(yù)防。一旦發(fā)病，采用臨床上患心包積液、肝腎腫大等病變的死雞肝臟甲醛滅活疫苗進(jìn)行緊急接種，同時(shí)使用退燒藥和消炎藥給雞飲水，飼喂保肝護(hù)腎藥物，4～5d后即可收到較明顯的治療效果?？傊?，圍繞抗病毒、利水消腫、保肝護(hù)腎、防治繼發(fā)感染等原則積極采取正確的治療手段，既可基本控制病情。

參考文獻(xiàn)

[1]Asthana M，Chandra R，Kumar R.Hydropericardium syndrome：current state and future developments[J].Arch Virol，2013，158（5）：921-31.

[2]文艷玲，謝芝勛，黃琦，等.禽腺病毒1型和4型六鄰體蛋白抗原表位和密碼子偏愛性分析[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28（11）：17.

（責(zé)編：張宏民）