• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    溫度、濕度、接菌量及pH對(duì)煙草青枯病菌致病力的影響

    2017-11-07 07:51:06汪漢成蔡劉體
    中國(guó)煙草科學(xué) 2017年5期
    關(guān)鍵詞:青枯病離體菌液

    汪漢成,余 婧,蔡劉體,陸 寧

    (貴州省煙草科學(xué)研究院,煙草行業(yè)山地烤煙品質(zhì)與生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴陽(yáng) 550081)

    溫度、濕度、接菌量及pH對(duì)煙草青枯病菌致病力的影響

    汪漢成,余 婧,蔡劉體,陸 寧

    (貴州省煙草科學(xué)研究院,煙草行業(yè)山地烤煙品質(zhì)與生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴陽(yáng) 550081)

    煙草青枯病菌是土傳病原細(xì)菌,其致病力易受多種因素影響。采用穿刺法接種離體葉片,系統(tǒng)性地研究了溫度、濕度、接菌量和pH對(duì)煙草青枯病菌致病力的影響。試驗(yàn)范圍內(nèi)青枯病菌可致病的病原菌數(shù)量為1.3~1.3×108cfu,1.3×108cfu病斑面積最大;致病的溫度范圍為 20~35 ℃,最適為 30~35 ℃,病害潛伏期隨著溫度升高而變短;40%~100%的相對(duì)濕度范圍內(nèi)均可發(fā)?。恢虏H范圍為5.0~8.0,最適發(fā)病pH為6.0。影響青枯病菌致病力的關(guān)鍵因子為溫度和pH,濕度不是青枯病發(fā)生的關(guān)鍵因素,結(jié)果為研究煙草青枯病發(fā)生機(jī)制提供了科學(xué)依據(jù)。

    青枯病菌;致病力;溫度;濕度;pH

    長(zhǎng)期以來(lái),煙葉生產(chǎn)受到煙草土傳細(xì)菌性病害煙草青枯病(tobacco bacterial wilt)的危害,其病原菌為茄科雷爾氏菌[Ralstonia solanacearum(Smith 1896,Yabuuchi et al. 1996 emend)]。該病害是典型的維管束病害,煙草根、莖、葉各部位均可被侵染,但主要危害植物的根和莖,病株側(cè)根常變黑腐爛,莖部可見(jiàn)黑色條斑[1-2]。該病于1864年在印度尼西亞首次發(fā)現(xiàn),此后,迅速擴(kuò)展至主要產(chǎn)煙國(guó)家并成為制約煙草生產(chǎn)的重要病害[3-4],目前在我國(guó)主要產(chǎn)煙省區(qū)均有發(fā)生。近年來(lái),由于氣候、土壤酸堿度等方面的原因,該病害在我國(guó)的危害范圍逐步擴(kuò)大。

    煙草青枯病的發(fā)生是煙草、病原菌、環(huán)境共同作用的結(jié)果,煙草青枯病的發(fā)生與病原菌的致病力密切相關(guān)。致病力是病原菌侵入寄主后引起致病的能力。影響致病力的因素包括溫度、濕度、病原菌的濃度、pH等多個(gè)方面,同時(shí)病原菌菌株間的致病力也存在差異。引起我國(guó)煙草青枯病的茄科雷爾氏菌主要為1號(hào)小種3號(hào)生化型(R1Bv3)[5]。已有的研究表明,30 ℃的環(huán)境溫度和81.42%以上的相對(duì)濕度比較有利于煙草青枯病的發(fā)生[6],同時(shí)溫度也會(huì)影響煙草品種對(duì)青枯病的抗性[7];接菌濃度100~1010cfu/mL時(shí)均會(huì)引起番茄青枯病的發(fā)生[8]。目前,煙草青枯病菌可致病的溫度、濕度、病原菌濃度及pH范圍仍不清楚。本文以一株煙草青枯病菌致病力菌株為研究對(duì)象,對(duì)其可致病的溫度、濕度、病原菌數(shù)量及pH范圍進(jìn)行測(cè)定,旨在明確影響煙草青枯病致病力的關(guān)鍵環(huán)境因子,為煙草青枯病發(fā)生機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 供試菌株與煙株 試驗(yàn)于2017年2—5月在貴州省煙草科學(xué)研究院微生物實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展,煙草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)由該實(shí)驗(yàn)室分離鑒定所得。煙草品種為云煙87(Nicotiana tabacum cv.Yunyan 87)。

    1.1.2 供試培養(yǎng)基與試劑 煙草青枯病菌的培養(yǎng)使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(NA、NB)[9]、青枯菌專性培養(yǎng)基(SMSA)[10]和(BUG+B)培養(yǎng)基[11],BUG瓊脂由Biolog公司提供,凍干脫纖維羊血(B)由北京友康基業(yè)生物科技有限公司提供。青枯病菌不同pH下生長(zhǎng)采用的代謝板 PM9、接種液IF-0a GN/GP(#72268)和 IF-10b GN/GP(#72266)、染料Mix A(#74221),均購(gòu)自美國(guó)Biolog公司。

    1.2 接種量對(duì)煙草青枯病菌致病力的影響

    將青枯病菌于NB培養(yǎng)液中30 ℃、170 r/min黑暗培養(yǎng),48 h后吸取5 mL菌液,從中吸取0.5 mL,用無(wú)菌水將菌液依次稀釋至 100~10-8。采用 1 mL無(wú)菌注射器從 100~10-8的梯度稀釋液中分別吸取0.1 mL菌液,采用“穿刺接菌法”將菌液注射至8葉期煙草離體葉片,每點(diǎn)注射15 μL菌液,以注射同體積的NB培養(yǎng)基為對(duì)照,每個(gè)處理重復(fù)4次。接菌后將葉片置于30 ℃、RH 80%、16 h黑暗和8 h光照交替的環(huán)境下培養(yǎng),72 h后測(cè)量病斑的直徑并計(jì)算病斑面積。此外,從100~10-8的梯度稀釋液中分別吸取0.1 mL菌液,分別將其均勻涂布于制備好的SMSA平板上,每處理重復(fù)3次,將接菌后的平板置于30 ℃黑暗條件下培養(yǎng),72 h后計(jì)數(shù)平板上長(zhǎng)出的菌落數(shù)。

    1.3 溫度對(duì)煙草青枯病菌致病力的影響

    將青枯病菌于NB培養(yǎng)液中30 ℃、170 r/min黑暗培養(yǎng),48 h后吸取1 mL菌液,用無(wú)菌水將菌液稀釋,制備107cfu/mL的菌液。采用“穿刺接菌法”將菌液注射至8葉期煙草離體葉片,每點(diǎn)注射15 μL菌液,以注射同體積的NB培養(yǎng)基為對(duì)照,每個(gè)處理重復(fù)4次。接菌后將葉片置于RH 80%、16 h黑暗和8 h光照交替、及不同溫度(18、20、25、28、30、35 ℃)的環(huán)境下培養(yǎng),分別于接菌后24、36、60、84、108和132 h觀察葉片發(fā)病情況,測(cè)量病斑的直徑并計(jì)算病斑面積。

    1.4 濕度對(duì)煙草青枯病菌致病力的影響

    參照上述方法制備青枯病菌107cfu/mL的菌液。采用“穿刺接菌法”將菌液注射至8葉期煙草離體葉片,每點(diǎn)注射15 μL,以注射同體積的NB培養(yǎng)基為對(duì)照,每個(gè)處理重復(fù)4次。接菌后將葉片置于30 ℃、16 h黑暗和8 h光照交替、及不同相對(duì)濕度(40%、60%、80%、100%)的環(huán)境下培養(yǎng),分別于接菌后72 h觀察葉片發(fā)病情況,測(cè)量病斑的直徑并計(jì)算病斑面積。

    1.5 pH對(duì)煙草青枯病菌致病力的影響

    將煙草青枯病菌在BUG+B平板上純化培養(yǎng)2代,參照Biolog革蘭氏陰性細(xì)菌代謝的操作規(guī)程[12]進(jìn)行煙草青枯病菌的不同pH環(huán)境下的生長(zhǎng)培養(yǎng),30 ℃培養(yǎng)5 d后取出培養(yǎng)菌液。用1 mL無(wú)菌注射器從pH 3.5~10的菌液中分別吸取0.1 mL菌液,采用“穿刺接菌法”將菌液注射至8葉期煙草離體葉片,每點(diǎn)注射15 μL菌液,以注射同體積的無(wú)菌水為對(duì)照,每處理重復(fù)4次。接菌后將葉片置于30 ℃、RH 80%、16 h黑暗和8 h光照交替的環(huán)境下培養(yǎng),72 h后觀察葉片發(fā)病情況,測(cè)量病斑的直徑并計(jì)算病斑面積。此外,吸取0.1 mL pH 3.5~10范圍內(nèi)的青枯菌培養(yǎng)液,將菌液用無(wú)菌水進(jìn)行梯度稀釋,吸取0.1 mL稀釋液均勻涂布于制備好的SMSA平板上,每處理重復(fù)3次,將接菌后的平板置于30 ℃黑暗條件下培養(yǎng),72 h后計(jì)數(shù)平板上長(zhǎng)出的菌落數(shù)。

    2 結(jié) 果

    2.1 接菌量對(duì)煙草青枯病菌致病力的影響

    如表1所示,在烤煙云煙87的離體葉片上,煙草青枯病菌在1.3~1.3×108cfu的接菌范圍內(nèi)均可使煙草葉片致病,接菌量1.3×102cfu 48 h時(shí),發(fā)病面積可達(dá)0.63 cm2,接菌量不影響病斑擴(kuò)展面積。

    2.2 溫度對(duì)煙草青枯病菌致病力的影響

    結(jié)果如表2所示,煙草離體葉片接菌15 μL的107cfu/mL的菌液,在18~35 ℃的溫度范圍內(nèi),除18 ℃外,煙草青枯病菌均具有致病力;20 ℃時(shí),青枯病菌接菌 84 h后才開(kāi)始使離體葉片發(fā)??;25~30 ℃處理,接菌36 h后葉片開(kāi)始發(fā)??;35 ℃處理24 h后葉片就開(kāi)始發(fā)病。在24~132 h的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi),各溫度處理下的煙草葉片發(fā)病面積均會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸擴(kuò)大。此外,在20~35 ℃的測(cè)試溫度范圍內(nèi),36~132 h各時(shí)離體葉片的發(fā)病面積均隨著溫度的升高而增大。

    2.3 濕度對(duì)煙草青枯病菌致病力的影響

    測(cè)定結(jié)果表明,相對(duì)濕度 40%、60%、80%和100%的條件下,煙草離體葉片穿刺接種 15 μL的107cfu/mL的菌液,青枯病菌均可使葉片發(fā)病,其平均病斑面積分別為0.87、1.04、0.87和0.95 cm2。

    表1 煙草青枯病菌接菌量在煙葉上對(duì)其致病力的影響Table 1 Effect of inoculum quantity on Ralstonia solanacearum pathogenicity in tobacco leaf

    表2 溫度對(duì)煙草青枯病菌在煙葉上致病力的影響Table 2 Effect of temperature on Ralstonia solanacearum pathogenicity in tobacco leaf

    2.4 pH對(duì)煙草青枯病菌致病力的影響

    結(jié)果如表3所示,在pH 3.5~10.0的測(cè)試范圍內(nèi),煙草青枯病菌可生長(zhǎng)的pH范圍為5.0~9.0,最適為6.0,pH 3.5~4.5和9.5~10.0的環(huán)境下青枯病菌均不能存活。在相同的接菌體積下,pH 6.0處理的菌落數(shù)量可達(dá)1.4×1010cfu,其次為pH 5.0、7.0、5.5和8.0的處理,pH 8.5和9.0處理的菌落數(shù)最?。?.7×103cfu)。不同pH下的致病力測(cè)定結(jié)果(表3)表明,煙草青枯病菌可致病的pH范圍為5.0~8.0,該范圍內(nèi)的離體葉片發(fā)病面積均隨葉片培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增大;pH 8.5和pH 9.0的處理,青枯病菌雖能存活,但離體煙草葉片培養(yǎng)120 h內(nèi)均未發(fā)病。

    3 討 論

    煙草青枯病菌是世界性的土傳病原細(xì)菌,寄主廣,變異強(qiáng),難以防治。本文以中抗品種云煙 87為材料,采用單因子試驗(yàn),開(kāi)展了溫度、濕度、接菌量和pH對(duì)煙草青枯病菌致病力影響的系統(tǒng)性研究,獲得了煙草青枯病菌致病的病原菌數(shù)量范圍為1.3~1.3×108cfu,致病的溫度范圍為 20~35 ℃,致病的濕度范圍為 40%~100%,致病的 pH范圍為5.0~8.0。

    表3 pH對(duì)煙草青枯病菌在煙葉上致病力的影響Table 3 Effect of pH on Ralstonia solanacearum pathogenicity in tobacco leaf

    溫度是重要的環(huán)境因素,對(duì)植物病原菌的生長(zhǎng)和病害的發(fā)生均具有較大的影響。據(jù)報(bào)道番茄青枯病菌在液體培養(yǎng)基中最適生長(zhǎng)溫度為 30 ℃[8],青枯病菌侵染番茄的最低溫度為 22 ℃,且溫度越高病害發(fā)生的潛伏期越短[13];30 ℃最有利于辣椒青枯病的發(fā)生[14];大部分青枯病菌菌株在20 ℃以下沒(méi)有致病力,但青枯病菌 3號(hào)小種 2號(hào)生化型(R3Bv2)被報(bào)道 18 ℃時(shí)在土豆和番茄上可以致病[15-16];煙草青枯病菌的可生長(zhǎng)溫度范圍為15~43 ℃,28.52 ℃為病原菌在平板上的最適生長(zhǎng)溫度,同時(shí) 30 ℃左右為煙草青枯病發(fā)展的最有利溫度[17];30 ℃和35 ℃時(shí)不同青枯病抗性的煙草品種均會(huì)被青枯病菌侵染[7]。本文采用的離體葉片穿刺接種的方法雖然與上述研究不同,但獲得的煙草青枯病菌致病力溫度范圍同上述報(bào)道基本一致。

    煙草青枯病菌是土傳細(xì)菌性病害,土壤pH環(huán)境影響著它的定殖和侵染。據(jù)報(bào)道一些煙草青枯病菌菌株可以存活的pH范圍為5.0~9.5[18],青枯雷爾氏菌在偏酸和偏堿條件下生長(zhǎng)較好[19]。本文所測(cè)得的青枯病菌可存活的pH范圍為5.0~9.5,研究結(jié)果與之前報(bào)道一致。MICHEL等[20]報(bào)道了不同類型土壤中不同pH的土壤處理措施對(duì)青枯病病情指數(shù)影響,僅在土壤環(huán)境中評(píng)價(jià)了青枯病菌的病情指數(shù)與pH的關(guān)系。pH對(duì)青枯病菌致病力影響方面未見(jiàn)報(bào)道,本文首次系統(tǒng)性地評(píng)價(jià)了pH對(duì)青枯病菌致病力的影響。青枯病菌雖然在pH 8.5~9.0的范圍內(nèi)能夠存活,但并不能致病,該結(jié)論為通過(guò)改良土壤pH來(lái)防控青枯病提供了科學(xué)依據(jù)。

    本文發(fā)現(xiàn)濕度和青枯病菌的數(shù)量為煙草青枯病發(fā)生的非必要因素。煙草青枯病菌的環(huán)境適應(yīng)能力較強(qiáng)[18],可供其生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)范圍廣泛,在無(wú)氮的情況下仍然能夠生長(zhǎng)[5]。只要溫度合適,該病原菌就能迅速繁殖,在寄主存在的條件下,就能侵染煙草進(jìn)而造成危害。濕度雖不是其致病力的關(guān)鍵因子,但對(duì)病害的流行與傳播起到積極作用。

    [1] ROBERTSON A E, WECHTER W P, DENNY T P, et al.Relationship between a virulence gene (avrA) diversity in Ralstonia solanacearum and bacterial wilt incidence [J].Molecular plant-microbe interactions, 2004, 17(12):1376-1384.

    [2] QIAN Y L, WANG X S, WANG D Z, et al. The detection of QTLs controlling bacterial wilt resistance in tobacco (N. tabacum L.)[J]. Euphytica, 2013, 192:259-266.

    [3] HAYWARD A C. Biology and epidemiology of bacterial wilt caused by Pseudomonas solanacearum[J]. Annual review of phytopathology, 1991, 29(1): 65-87.

    [4] HAYWARD A C. Ralstonia solanacearum[J].Encyclopedia of microbiology, 2000, 32-42.

    [5] WANG H C, HUANG Y F, WANG J, et al. Phenotypic fingerprints of Ralstonia solanacearum Biovar 3 strains from tobacco and tomato in China assessed by Phenotype microarray analysis[J]. Plant pathology journal, 2015,14(1): 38-43.

    [6] 李想,劉艷霞,蔡劉體,等. 煙草青枯病菌在煙草根際的定殖及最適發(fā)病條件[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào),2016,43(5):796-804.

    [7] BITTNER R J, ARELLANO C, MILA A L. Effect of temperature and resistance of tobacco cultivars to the progression of bacterial wilt, caused by Ralstonia solanaceearum[J]. Plant soil, 2016, 408: 299-310.

    [8] SINGH D, YADAV D K, SINHA S, et al. Effect of temperature, cultivars, injury of root and inoculums load of Ralstonia solanacearum to cause bacterial wilt of tomato[J]. Archives of phytopathology and plant protection, 2014, 47(13): 1574-1583.

    [9] SHAHIDI B G H, BARKHORDAR B, PAKGOHAR N,et al. Biological control of Phytophthora drechsleri tucker, the causal agent of pistachio gummosis, under greenhouse conditions by use of actinomycetes[J]. Plant pathology journal, 2006, 5: 20-23.

    [10] IMAZAKI I, NAKAHO K. Pyruvate-amended modified SMSA medium: improved sensitivity for detection of Ralstonia solanacearum[J]. Journal of general plant pathology, 2010, 76: 52-61.

    [11] 汪漢成,王茂勝,黃艷飛,等. 煙草青枯病菌拮抗菌株X-60的分離鑒定及其表型組學(xué)分析[J]. 植物病理學(xué)報(bào),2016,46(3):409-419.

    [12] BOCHNER B R. New technologies to assess genotype-phenotype relationships[J]. Nature reviews genetics, 2003, 4: 309-314.

    [13] 卓國(guó)豪. 溫度和病原菌接種濃度對(duì)番茄青枯病菌侵染的影響[J]. 植物檢疫,2005,19(3):143-144.

    [14] TRAN N H, KIM B S. Influence of temperature,pathogen strain, inoculum density, seedling age,inoculation method and varietal resistance on infection of pepper seedlings by Ralstonia solanacearum[J].Horticulture, environment, and biotechnology, 2010,51(2): 95-100.

    [15] BOCSANCZY A M, ACHENBACH U C M,MANGRAVITA-NOVO A, et al. Comparative effect of low temperature on virulence and twitching motility of Ralstonia solanacearum strains present in Florida [J].Phytopathology, 2012, 102: 185-194.

    [16] 莊明富,羅淑芳,林靜宜. 溫度對(duì)青枯病菌致病力之影響與馬鈴薯品種(系)對(duì)青枯病反應(yīng)之初步評(píng)估[J]. 臺(tái)灣農(nóng)業(yè)研究,2015,64(2):89-98.

    [17] 劉憲臣. 溫濕度對(duì)煙草青枯病發(fā)生的影響及調(diào)控技術(shù)研究[D]. 重慶:西南大學(xué),2014.

    [18] CHEN X J, LI L C, WANG H C, et al. Phenotypic fingerprints of Ralstonia solanacearum under various osmolytes and pH environments [J]. Plant pathology journal, 2016, 15(3): 102-107.

    [19] 譚軍,劉雨虹,劉影,等. 不同條件對(duì)煙草青枯雷爾氏菌生長(zhǎng)的影響[J]. 中國(guó)煙草科學(xué),2014,35(1):85-88.

    [20] MICHEL V V, MEW T W. Effect of a soil amendment on the survival of Ralstonia solanacearum in different soils[J]. Phytopathology, 1998, 88(4): 300-305.

    Effect of Temperature, Relative Humidity, Inoculum Amount and pH on Pathogenicity of Ralstonia solanacearum on Tobacco

    WANG Hancheng, YU Jing, CAI Liuti, LU Ning

    ( Guizhou Academy of Tobacco Science, Upland Flue-cured Tobacco Quality & Ecology Key Laboratory of China Tobacco,Guiyang 550081, China)

    Ralstonia solanacearum is a worldwide soil born bacterium on tobacco, and its pathogenicity is affected by many factors but the key factors are still unclear. In this study, the effect of temperature, relative humidity, inoculum amount and pH on pathogenicity of R. solanacearum was systematically analyzed. The method of stab inoculation on detached leaves was used throughout the whole experiment. The results showed that the pathogenic amount of R. solanacearum was between 1.3 cfu and 1.3×108cfu, and the biggest scab in detached tobacco leaves was observed in the treatment of 1.3× 108cfu. The pathogenic temperature of the bacterium was from 20 ℃ to 35 ℃, and the best range was from 30 ℃ to 35 ℃, showing decreased incubation period with the raise of temperature. Tobacco bacterial wilt could happen under the relative humidity range of 40% to 100%, thus humidity was not the key factor for this disease. The pathogenic pH value range was from 5.0 to 8.0, and the best value was around 6.0. In conclusion, temperature and pH value were the key factors for pathogenicity of R. solanacearum. These results provided scientific evidence for occurrence mechanism of tobacco bacterial wilt.

    Ralstonia solanacearum; pathogenicity; temperature; humidity; pH

    S435.72

    1007-5119(2017)05-0008-05 DOI:10.13496/j.issn.1007-5119.2017.05.002

    中國(guó)博士后科學(xué)基金資助項(xiàng)目“基于土壤微生物量的煙草青枯病根際微生態(tài)的研究”(2017M610585);貴州省科技支撐計(jì)劃“侵染裂解煙草青枯菌的噬菌體資源庫(kù)構(gòu)建及應(yīng)用研究”(黔科合支撐[2017]2606號(hào));中國(guó)煙草總公司貴州省公司科技項(xiàng)目“解淀粉芽孢桿菌和煙草青枯病菌的營(yíng)養(yǎng)需求特性研究”(2013-05)

    汪漢成(1982-),男,博士,研究員,從事煙草植保與微生物方面的研究。E-mail:xiaobaiyang126@hotmail.com

    2017-05-05

    2017-08-04

    猜你喜歡
    青枯病離體菌液
    多糖微生物菌液對(duì)油菜吸收養(yǎng)分和土壤氮磷淋失的影響
    Bonfire Night
    鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)中通過(guò)吸光度值測(cè)定菌液濃度的方法研究
    長(zhǎng)白落葉松離體再生體系的建立
    切花月季‘雪山’的離體快繁體系的建立
    靈魂離體
    奧秘(2016年10期)2016-12-17 13:13:11
    復(fù)合微生物菌液對(duì)黃瓜生長(zhǎng)和抗病蟲(chóng)性效應(yīng)研究
    上海蔬菜(2015年2期)2015-12-26 05:03:40
    淺談茄子青枯病防治技術(shù)
    對(duì)萼獼猴桃無(wú)菌離體再生體系研究
    三種堆肥對(duì)番茄生長(zhǎng)及青枯病防治效果的影響
    在线 av 中文字幕| 能在线免费看毛片的网站| 日韩欧美三级三区| 91在线精品国自产拍蜜月| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 性插视频无遮挡在线免费观看| 97超视频在线观看视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 91久久精品国产一区二区成人| 能在线免费观看的黄片| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品色激情综合| 国产亚洲91精品色在线| 日韩av在线大香蕉| 午夜福利成人在线免费观看| 成人综合一区亚洲| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 成人特级av手机在线观看| 久久97久久精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美极品一区二区三区四区| 久久这里有精品视频免费| 成年版毛片免费区| 国产成人精品久久久久久| 两个人的视频大全免费| 熟女电影av网| 高清午夜精品一区二区三区| 成人午夜精彩视频在线观看| 天堂影院成人在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| av线在线观看网站| 校园人妻丝袜中文字幕| 一边亲一边摸免费视频| 舔av片在线| 超碰av人人做人人爽久久| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 最新中文字幕久久久久| 边亲边吃奶的免费视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 99久国产av精品国产电影| 一级毛片我不卡| 青青草视频在线视频观看| 亚洲精品自拍成人| 中文欧美无线码| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 内射极品少妇av片p| 日本免费在线观看一区| 精品国产三级普通话版| 日韩中字成人| 欧美xxⅹ黑人| 欧美人与善性xxx| 久久久久精品性色| 97热精品久久久久久| 国产一区亚洲一区在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 午夜福利高清视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国国产精品蜜臀av免费| 精品久久久精品久久久| 久热久热在线精品观看| 秋霞伦理黄片| 欧美人与善性xxx| 夫妻性生交免费视频一级片| 日本-黄色视频高清免费观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 久久久久精品久久久久真实原创| 日本色播在线视频| 日韩av不卡免费在线播放| av.在线天堂| 午夜福利成人在线免费观看| 精品欧美国产一区二区三| 五月天丁香电影| 性色avwww在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 六月丁香七月| 一二三四中文在线观看免费高清| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 久久热精品热| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 毛片一级片免费看久久久久| 久久草成人影院| 青春草视频在线免费观看| 亚洲av二区三区四区| 国产一区二区三区综合在线观看 | 69人妻影院| 日韩强制内射视频| 免费看美女性在线毛片视频| 天天躁日日操中文字幕| 美女黄网站色视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| av在线蜜桃| 天堂中文最新版在线下载 | 一区二区三区免费毛片| 国产av国产精品国产| 国产av国产精品国产| 毛片一级片免费看久久久久| 观看美女的网站| 青青草视频在线视频观看| 五月天丁香电影| 欧美成人一区二区免费高清观看| 久久精品国产亚洲网站| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美日韩综合久久久久久| 在线观看一区二区三区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 免费在线观看成人毛片| 极品少妇高潮喷水抽搐| 色网站视频免费| 婷婷色麻豆天堂久久| 欧美一区二区亚洲| 干丝袜人妻中文字幕| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产爱豆传媒在线观看| 国产男人的电影天堂91| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久人人爽人人片av| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产老妇女一区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美性感艳星| 国产高潮美女av| 日韩精品青青久久久久久| 国产精品无大码| 久久国产乱子免费精品| 精华霜和精华液先用哪个| 成人毛片60女人毛片免费| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 日本午夜av视频| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 精品熟女少妇av免费看| 久久久午夜欧美精品| 激情 狠狠 欧美| 国产精品久久久久久精品电影小说 | av黄色大香蕉| 一个人看的www免费观看视频| av在线观看视频网站免费| 久久久国产一区二区| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲国产色片| 夜夜爽夜夜爽视频| 日本黄大片高清| 男女边吃奶边做爰视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 一级av片app| 国产精品.久久久| 欧美日韩在线观看h| av一本久久久久| 免费看av在线观看网站| 国产伦一二天堂av在线观看| 我的老师免费观看完整版| 亚洲伊人久久精品综合| 91精品伊人久久大香线蕉| 又爽又黄无遮挡网站| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲精品日韩av片在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 在线免费十八禁| 亚洲精品一二三| 中文字幕av成人在线电影| 久久久国产一区二区| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产综合懂色| 永久网站在线| 国产 亚洲一区二区三区 | 久久久久久久午夜电影| 久久人人爽人人片av| 黄色配什么色好看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 久久久国产一区二区| 日韩亚洲欧美综合| 免费看光身美女| 黄片无遮挡物在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产综合懂色| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久精品综合一区二区三区| 欧美成人午夜免费资源| 成年女人看的毛片在线观看| 一级毛片电影观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 七月丁香在线播放| 2021天堂中文幕一二区在线观| 91av网一区二区| 在线免费观看的www视频| 男女视频在线观看网站免费| 午夜久久久久精精品| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 精品久久久久久久久久久久久| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产麻豆成人av免费视频| 国产成人a区在线观看| 只有这里有精品99| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 中文天堂在线官网| 一级毛片电影观看| 亚洲四区av| 国产高清三级在线| 91精品一卡2卡3卡4卡| 婷婷六月久久综合丁香| 毛片女人毛片| 国产高清三级在线| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 校园人妻丝袜中文字幕| 一级av片app| 搞女人的毛片| 日本色播在线视频| 国产亚洲精品久久久com| 国产淫语在线视频| 亚洲av日韩在线播放| 观看美女的网站| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产大屁股一区二区在线视频| 日本一本二区三区精品| 日韩电影二区| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲在线自拍视频| 国产又色又爽无遮挡免| 国产成人freesex在线| 国产男女超爽视频在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产 亚洲一区二区三区 | 精品国产三级普通话版| 高清av免费在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲av电影不卡..在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 国产av不卡久久| 久久精品久久精品一区二区三区| 成年av动漫网址| 亚洲电影在线观看av| 国产男人的电影天堂91| 日日啪夜夜爽| 日韩精品青青久久久久久| 成人漫画全彩无遮挡| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产一区二区三区av在线| 免费观看性生交大片5| 免费黄网站久久成人精品| 国产伦在线观看视频一区| 久久久久久久久久黄片| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美+日韩+精品| 2021天堂中文幕一二区在线观| 美女cb高潮喷水在线观看| 成年女人在线观看亚洲视频 | 全区人妻精品视频| 色哟哟·www| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲电影在线观看av| 一边亲一边摸免费视频| 久久草成人影院| 日韩人妻高清精品专区| 激情五月婷婷亚洲| 成人鲁丝片一二三区免费| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 最近的中文字幕免费完整| 最近中文字幕2019免费版| 在线免费观看的www视频| 69人妻影院| 欧美高清性xxxxhd video| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美zozozo另类| 国产乱人偷精品视频| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 日日干狠狠操夜夜爽| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产在视频线精品| 又爽又黄a免费视频| 国内精品美女久久久久久| 激情五月婷婷亚洲| 直男gayav资源| 免费看a级黄色片| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 人体艺术视频欧美日本| 高清av免费在线| 99热全是精品| 亚洲电影在线观看av| 丰满乱子伦码专区| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产老妇女一区| 又大又黄又爽视频免费| 三级国产精品片| 黄色日韩在线| 激情五月婷婷亚洲| 国产色爽女视频免费观看| 边亲边吃奶的免费视频| 国产黄片视频在线免费观看| kizo精华| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 如何舔出高潮| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 六月丁香七月| 欧美激情久久久久久爽电影| 少妇的逼好多水| 麻豆av噜噜一区二区三区| 两个人的视频大全免费| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产综合懂色| 亚洲自拍偷在线| 亚洲综合精品二区| 成人综合一区亚洲| 国产三级在线视频| 亚洲高清免费不卡视频| 日韩成人伦理影院| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| av网站免费在线观看视频 | 老女人水多毛片| 永久网站在线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 联通29元200g的流量卡| av免费观看日本| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲在线观看片| 亚洲国产av新网站| 国产亚洲一区二区精品| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 99热这里只有精品一区| 欧美xxⅹ黑人| 男插女下体视频免费在线播放| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 美女大奶头视频| 欧美激情在线99| 国产大屁股一区二区在线视频| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲国产欧美在线一区| 国产视频内射| 欧美xxⅹ黑人| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产黄片视频在线免费观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产中年淑女户外野战色| 波野结衣二区三区在线| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲av成人精品一区久久| 蜜臀久久99精品久久宅男| 在线免费十八禁| 岛国毛片在线播放| 亚洲av免费在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产午夜福利久久久久久| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产一区二区三区综合在线观看 | 成人漫画全彩无遮挡| 女人被狂操c到高潮| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 精品人妻视频免费看| 久久人人爽人人爽人人片va| 国内精品宾馆在线| 久久这里只有精品中国| 久久午夜福利片| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 欧美+日韩+精品| 国产精品日韩av在线免费观看| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产午夜精品论理片| 亚洲av成人精品一二三区| 午夜老司机福利剧场| 最近中文字幕2019免费版| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产成人a区在线观看| 国产 一区精品| 中文字幕亚洲精品专区| 国产极品天堂在线| 午夜免费激情av| 寂寞人妻少妇视频99o| 69人妻影院| 亚洲色图av天堂| 我要看日韩黄色一级片| 欧美潮喷喷水| 中国国产av一级| 亚洲人成网站高清观看| 九九在线视频观看精品| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 国产在视频线精品| 国产在视频线在精品| 黄色日韩在线| av.在线天堂| 日韩大片免费观看网站| 毛片女人毛片| 国产91av在线免费观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 七月丁香在线播放| 国国产精品蜜臀av免费| 久99久视频精品免费| 免费无遮挡裸体视频| 激情五月婷婷亚洲| 丝袜喷水一区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 免费大片18禁| 亚洲在线自拍视频| 欧美三级亚洲精品| 国产在视频线精品| 国产伦在线观看视频一区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 一本久久精品| 免费无遮挡裸体视频| 在线免费观看的www视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 色网站视频免费| 欧美激情在线99| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 国产在线一区二区三区精| 老司机影院毛片| 亚洲美女视频黄频| 日韩av免费高清视频| 亚洲国产av新网站| 一二三四中文在线观看免费高清| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产av在哪里看| 成人漫画全彩无遮挡| 晚上一个人看的免费电影| 日韩一区二区视频免费看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产人妻一区二区三区在| 久久精品人妻少妇| 久久国内精品自在自线图片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 成人国产麻豆网| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲av在线观看美女高潮| xxx大片免费视频| 精品久久久久久久久久久久久| 九色成人免费人妻av| 卡戴珊不雅视频在线播放| 色5月婷婷丁香| ponron亚洲| 丝袜美腿在线中文| 国产成人freesex在线| 床上黄色一级片| 特大巨黑吊av在线直播| 国产午夜福利久久久久久| 看非洲黑人一级黄片| 日韩大片免费观看网站| 一本一本综合久久| 十八禁国产超污无遮挡网站| 成人亚洲精品一区在线观看 | 嫩草影院入口| 少妇熟女欧美另类| 国产单亲对白刺激| 亚洲成色77777| 麻豆国产97在线/欧美| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲经典国产精华液单| 色哟哟·www| 久久6这里有精品| 欧美潮喷喷水| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲va在线va天堂va国产| 中文字幕av在线有码专区| 国产一区二区三区av在线| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲怡红院男人天堂| 我的女老师完整版在线观看| 成人无遮挡网站| 久久久久久久久中文| 日韩大片免费观看网站| 禁无遮挡网站| 免费黄网站久久成人精品| 国产成人精品福利久久| 亚洲av成人精品一二三区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 精品一区二区三卡| 黄色配什么色好看| 三级经典国产精品| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产一区二区三区综合在线观看 | 男女视频在线观看网站免费| 极品教师在线视频| 少妇高潮的动态图| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲av免费高清在线观看| 日日啪夜夜爽| 我的老师免费观看完整版| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 干丝袜人妻中文字幕| 国产av码专区亚洲av| 色哟哟·www| 亚洲成人一二三区av| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久久久国产网址| 久久97久久精品| 内射极品少妇av片p| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产伦在线观看视频一区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 尾随美女入室| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 黄色日韩在线| 美女cb高潮喷水在线观看| 人妻一区二区av| 一区二区三区乱码不卡18| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产高潮美女av| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 熟女电影av网| 一级毛片我不卡| 日韩国内少妇激情av| 一级毛片久久久久久久久女| 免费少妇av软件| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美不卡视频在线免费观看| 人妻少妇偷人精品九色| 婷婷色麻豆天堂久久| 午夜老司机福利剧场| 婷婷色麻豆天堂久久| 超碰97精品在线观看| 国产精品无大码| 国产 一区 欧美 日韩| 高清av免费在线| 午夜视频国产福利| 欧美成人一区二区免费高清观看| av.在线天堂| 99久久精品国产国产毛片| 美女大奶头视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 伊人久久国产一区二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲在久久综合| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 久久久久网色| 国内精品美女久久久久久| 午夜精品国产一区二区电影 | 国内精品美女久久久久久| 成年人午夜在线观看视频 | 在线观看一区二区三区| 18禁动态无遮挡网站| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲人成网站在线观看播放| 精品一区二区免费观看| 国产亚洲精品av在线| 嫩草影院新地址| 我的老师免费观看完整版| 韩国av在线不卡| 亚洲av中文av极速乱| 丝袜喷水一区| 一级a做视频免费观看| 又爽又黄a免费视频| 综合色丁香网| 大香蕉久久网| 国产精品女同一区二区软件| 日韩一区二区视频免费看| 舔av片在线| 亚洲在久久综合| 一区二区三区免费毛片| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲最大成人手机在线| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲精品一区蜜桃| 精品午夜福利在线看| 欧美一级a爱片免费观看看| av在线播放精品| 精品不卡国产一区二区三区| 午夜福利视频1000在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 日韩欧美国产在线观看| 又大又黄又爽视频免费| 在线观看人妻少妇| 有码 亚洲区| 亚洲性久久影院| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲三级黄色毛片| or卡值多少钱| 亚洲在久久综合| 美女内射精品一级片tv| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产精品一区www在线观看| 男女边摸边吃奶|