調脂柔脈顆粒對高脂血癥大鼠動脈壁ICAM-1基因表達的影響*

楊志宏　李經渭　袁有才　 李天浩　朱曉娜　曹　旸　問麗娜　郭　珍

陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院(咸陽712000)

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調脂柔脈顆粒對高脂血癥大鼠動脈壁ICAM-1基因表達的影響*

楊志宏李經渭△袁有才▲李天浩◇朱曉娜曹旸問麗娜郭珍

陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院(咸陽712000)

摘要目的:研究調脂柔脈顆粒對高脂血癥大鼠動脈壁中細胞間黏附分子-1(ICAM-1)影響。方法:將健康雄性SD大鼠72只按體質量隨機分為6組,每組12只:空白組、模型組、西藥組、調脂柔脈顆粒高劑量組、調脂柔脈顆粒中劑量組、調脂柔脈顆粒低劑量組。采用高脂飲食建立大鼠高脂血癥模型,采用RT-PCR的方法檢測各組大鼠動脈壁勻漿中ICAM-1基因的表達。結果:與空白對照組相比,模型組ICAM-1基因的表達明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義；與模型組相比各治療組ICAM-1基因的表達有不同程度的下降，調脂柔脈顆粒大劑量組效果顯著，差異有顯著性(P<0.05)。結論:調脂柔脈顆粒能下調實驗性高脂血癥大鼠動脈壁ICAM-1基因的表達,與降血脂、預防動脈粥樣硬化正相關。

主題詞高脂血癥/中醫(yī)藥療法動物實驗 @調脂柔脈顆粒

高脂血癥是心腦血管病的最主要發(fā)病因素，脂質異常對動脈粥樣硬化有促進作用。筆者在臨床中總結研發(fā)的調脂柔脈顆粒有較好的降脂效果。為進一步研究其對高脂血癥致動脈粥樣硬化的作用， 擬通過高脂血癥大鼠模型觀測胸主動脈ICAM-1(Intercellular cell adhesion molecule-1 即細胞間黏附分子-1)基因的表達。

1材料1.1實驗動物從第四軍醫(yī)大學實驗動物中心購入72只SD大鼠, 雄性清潔級，體重200±20g。

1.2藥物和試劑調脂柔脈顆粒：由天花粉、黃芪、葛根、制首烏、決明子、丹參、大黃、蒼術、生山楂、槐角等藥物組成，陜西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院制劑中心提供，10g/袋。辛伐他汀,杭州默沙東制藥有限公司。高脂飼料：按85%的基礎飼料、1.7%的膽固醇、4.3%豬油、8.6%蛋黃粉,0.4%的豬膽 鹽的比例由第四軍醫(yī)大學動物實驗中心配制。10%水合氯醛, 國產分析純，陜西中醫(yī)學院附屬 醫(yī)院制劑中心配制；TaqDNA聚合酶,天津強微生物科技有限公司；Trizol reagent, 北京瑞達恒輝生物技術發(fā)展公司；反轉錄試劑盒(Reverse Transcription System),美國Promega公司；上海生工生物工程技術服務有限公司合成ICAM-1、β-actin引物。實時定量PCR儀：BIO-RAD公司,RNA定量儀：美國Nano Drop ND-1000 spectrophotometer。

2方法2.1分組和造模將72只SD大鼠按體重質量隨機分為6組,每組12只:模型組、空白組、對照辛伐他汀組、調脂柔脈顆粒低劑量組、調脂柔脈顆粒中劑量組、調脂柔脈顆粒高劑量組?？瞻捉M給予普通飼料飼養(yǎng)；其余各組動物給予高脂飼料。

2.2給藥各組大鼠按1mL/(kg·d)灌胃，空白組、模型組給予純凈水灌胃,調脂柔脈顆粒低劑量組(0.125g/mL)、調脂柔脈顆粒中劑量組(0.25g/mL)、調脂柔脈顆粒高劑量組(0.5g/mL)混懸液灌胃；辛伐他汀(0.2mg/mL)混懸液灌胃，連續(xù)8周。

2.3主動脈取材造模及干預8周后采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,頸總動脈采血后，迅速取出主動脈和胸主動脈,剪碎置于凍存管,液氮冷凍，標本采集結束后轉-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

2.4實時RT-PCR按照TRIZOL試劑說明書提取總RNA,采用Ta KaRa公司 Prime Script? RT reagent Kit Perfect Real Time(DRR037A)反轉錄試劑盒冰上加樣。取上述逆轉錄產物PCR擴增ICAM-1：正義: 5′AGGTATCCATCCATCCCACA 3′，反義: 5′AGT-GTCTCATTCCCACGGA 3′,擴增產物長度388 bp。內參照β-actin引物序列: 正義: 5′CGTTGACATCCGTAAAGA 3′，反義 5′AGCCACCAATC-CACACAG3′,擴增產物長度173 bp。采用Ta KaRa Biotechology公司的 SYBY Premix Ex TaqTMⅡ(Perfect Real Time(DRR081A)試劑盒，依次加入以下試劑,構建PCR反應體系，變性95℃,30s,退火95℃,30s ,延伸60℃,30s,反應進行40個循環(huán),PCR反應結束后，將PCR反應液從60℃緩慢升溫到95℃，以獲取融解曲線。

3結果3.1調脂柔脈顆粒對高血脂大鼠一般情況的影響模型組大鼠經8周高脂喂養(yǎng)，體重較空白組明顯增加(P<0.01)，大鼠活動減少，懶動，毛發(fā)略黃。各治療組大鼠精神狀態(tài)較模型組明顯好轉，體重增加減緩(見表1)，活動靈活。

3.2調脂柔脈顆粒對高血脂癥大鼠主動脈ICAM-1mRNA表達的影響與空白組比較，模型組主動脈ICAM-1基因的表達明顯增加(P<0.01)；與模型組相比，對照組組及調脂柔脈顆粒低中高劑量組組均能減少動脈壁ICAM-1基因的表達(P< 0.01～0.05 )，且大劑量組明顯優(yōu)于小劑量與對照組 (P< 0.01)。見下表。

表1各組體重、ICAM-1mRNA表達

注：與模型組比較△P<0.05，與模型組比較▲P<0.01，與大劑量組比較◇P<0.05，與大劑量組比較◆P<0.01，與空白組比較□P<0.05，與空白組比較■P<0.01

4討論高脂血癥與動脈粥樣硬化的發(fā)生有密切關系，已經被認為冠心病、腦卒中的疾病發(fā)生的關鍵誘發(fā)因素[1]，血脂的調控已經成為臨床預防心腦血管病的主要方法之一。研究顯示高脂血癥能引起的炎癥反應貫穿于動脈粥樣硬化的始終及斑塊破裂、血栓形成的全過程[2]，導致血管內皮功能紊亂,而ICAM-1是內皮細胞活化標志之一。ICAM-1是白細胞和內皮細胞的共同跨膜蛋白，研究顯示在血管內皮功能損傷時能產生許多的細胞因子、炎性介質等物質能誘導ICAM-1mRNA的表達，促進單核細胞與內皮細胞的黏附，促進或加劇動脈粥樣硬化發(fā)生[3]。

中醫(yī)藥在高脂血癥防治中有豐富的經驗，屬“膏脂”范疇[4]。經系統(tǒng)文獻分析[5]病位在肝、脾、腎、心、胃、膽，其中與“肝”相關的證型最多，同時伴有“瘀”的病機。這與筆者臨床總結高脂血癥病機為“肝郁血瘀濁阻”相吻合，筆者經驗方調脂柔脈顆粒由決明子、制首烏、天花粉、黃芪、葛根、丹參、大黃、蒼術、生山楂、槐角等組成，疏肝解郁，祛濁活血，臨床應用有較好效果。本實驗研究顯示調脂柔脈顆?？娠@著改善高脂血癥大鼠一般狀態(tài)，能較好的控制體重，改善動脈粥樣硬化，其機理與降低ICAM-1表達正相關，且大劑量療效最著。

參考文獻

[1]阮曉楓，陳思韻，胡澤濤.高脂血癥致動脈粥樣硬化的防治與腸道微生態(tài)機制[J].世界最新醫(yī)學，2015，15(44):35-36.

[2]謝健，童曉云，沈超，等.活血通脈顆粒對頸動脈粥樣硬化家兔ICAIVI-1、IL-6表達的影響[J].中國中醫(yī)急癥，2015,24(3)：396-398.

[3]Niu N,Sun SZ,Han B,et al. Relationship of ox-LDL/LOX-1 and vascular endothelial dysfunction of diet induced obese immature rats and nicotinic acids intervention outcomes [J].Zhonghua Yixue Zazhi，2013,93(42):388-393.

[4]張蕾，張琪，游云，等. 基于代謝組學技術探討高脂血癥及動脈粥樣硬化痰瘀證候的演變規(guī)律[J].中國中西醫(yī)結合雜志,2015,35(7):823-833.

[5]郭姣，樸勝華，石忠峰，等.高脂血癥中醫(yī)證候分布規(guī)律文獻研究[J].廣州中醫(yī)藥大學學報，2013,30(5):609-632.

(收稿2015-12-14；修回2016-01-11)

Effect of Tiaozhi Roumai granule on the expression of ICAM-1 in arterial wall gene in rats with hyperlipidemia

The Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine( Xianyang 712000)

Yang Zhihong Li Jingwei Yuan Youcaietal

ABSTRACTObjective: To study the effect of Tiaozhi Roumai granule on intercellular adhesion molecule -1 (ICAM-1) expression of aorta in rats with hyperlipemia . Methods: 72 male SD rats were randomly divided into 6 groups: control group(n=12), model group,Tiaozhi Roumai granules in high ,middle,low dose group and Western medicine group. Blank group was assigned to receive normal diet. Model group was given high fat .the expression of ICAM-1 ineach group rats’ arterial were detected by the method of RT-PCR . Results: Compared with the blank group,the expression of ICAM-1 gene was significantly increased in model group, the difference was statistically significant(P< 0.01); compared with the model group ,the expression of ICAM-1 gene in each group have different degrees of decline, effect of Tiaozhi Roumai granule high,meddle dose group have significant difference (P< 0.01). Conclusion:Tiaozhi Roumai granule can decline the expression of ICAM-1 in experimental hyperlipidemia rats’ artery,it may be one of the mechanism of its prevention and treatment of atherosclerosis.

KEY WORDSHyperlipidemias/traditional Chinese medicine therapyAnimal experimentation @Tiaozhi Roumai granule

【中圖分類號】R589.2

【文獻標識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.05.048

*陜西省自然科學基金資助項目(2009JM4012)

△陜西省渭河發(fā)電廠醫(yī)院(咸陽712000)

▲陜西中醫(yī)藥大學( 咸陽712046)

◇陜西中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院(咸陽 712000)