千斤拔的二氯甲烷提取物化學(xué)成分研究

程靜怡，黃蘭芳

（1.中南大學(xué)護(hù)理學(xué)院；2.中南大學(xué)化工學(xué)院：長(zhǎng)沙 410083）

蔓性千斤拔，分布在中國南部及西南部[1]。具有壯腰健腎、活血通絡(luò)和消瘀解毒等功效，用于治療風(fēng)濕骨痛、腰肌勞損、跌打損傷和婦女白帶多等癥[2]。千斤拔含有黃酮類、糖類和揮發(fā)油等活性成分，具有較強(qiáng)的藥理活性，因而研究千斤拔化學(xué)成分有很重要的意義[3-7]。本研究采用加速溶劑萃取法提取千斤拔化學(xué)成分，用GC-MS結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)分辨法對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行研究，以期為千斤拔的進(jìn)一步開發(fā)和藥理藥效研究奠定物質(zhì)基礎(chǔ)[8-12]。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

Shimadzu 2010型氣相色譜-QP2010型質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS），電子天平（FR2202CN），ASE200快速溶劑萃取儀，RapidVap N 2/48氮?dú)庹舭l(fā)器。

蔓性千斤拔購于長(zhǎng)沙藥店，二氯甲烷為分析純，二次水為實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 提取方法

將2.0 g千斤拔適當(dāng)破碎后，放入ASE200快速溶劑萃取儀的萃取池中，用二氯甲烷進(jìn)行萃取，選定萃取溫度185℃，泵入萃取池溶劑量為池體積的100%，萃取30 min，將萃取后得到的提取液用快速濃縮儀濃縮到約1.5 mL。

1.3 GC-MS分析條件

OV-101石英毛細(xì)管色譜柱30 m×0.25 mm，液膜厚度0.25 μm，分流體積比10:1，汽化溫度280℃，接口溫度230℃。程序升溫：起始溫度50℃，維持8 min，以8℃/min升至250℃，維持10 min；載氣為氦氣，體積流量0.6 mL/min。離子源為EI，離子源電子能量70 eV，離子源溫度230℃；倍增電壓1.20 kV；掃描范圍40～600 amu，掃描速率0.2 s/次。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)分析在Intel Pentium IV計(jì)算機(jī)上進(jìn)行，所有程序用Matlab 6.5編寫。應(yīng)用HELP法對(duì)二維數(shù)據(jù)進(jìn)行解析以得到各組分的純色譜和質(zhì)譜[9]；用所分辨的質(zhì)譜在NIST標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫中進(jìn)行檢索以定性分析，采用總體積積分和歸一化法對(duì)各化合物的相對(duì)含量進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 定性分析

在上述GC-MS條件下，獲得千斤拔二氯甲烷提取物化學(xué)成分的總離子流譜如圖1。

由圖1可知，提取物為一個(gè)復(fù)雜的分析體系，盡管優(yōu)化了色譜條件，但也有些色譜峰出現(xiàn)重疊現(xiàn)象，如用NIST質(zhì)譜庫直接定性則相似程度很低。采用HELP法對(duì)所有重疊峰進(jìn)行分辨，定性準(zhǔn)確度顯著提高[9]。

圖1 千斤拔二氯甲烷提取物的色譜總離子流譜Fig 1 The TIC of dichloromethane extracts of Fleningia philippinensis

以峰簇C（t=11.70～11.95 min）為例來說明數(shù)據(jù)處理過程。經(jīng)PCA法扣除背景和基線漂移后，用固定尺寸窗口漸進(jìn)因子分析法（FSMWEFA）獲得秩圖[10]。依秩圖用HELP法直接分辯峰簇C中各組分純質(zhì)譜，得到各組分純質(zhì)譜后，可獲其純色譜，如圖2。

圖2 峰簇C原色譜和分辯后色譜Fig 1 The original TIC(A)and the resolved chromatogram of cluster C(B)

由圖2可知，用NIST質(zhì)譜庫定性，1和2分別為2,5-二丁基呋喃和乙酸龍腦酯，相關(guān)系數(shù)分別為0.961和0.947，而3因相關(guān)系數(shù)太低而未能定性。同樣地，采用類似方法得到其它組分定性結(jié)果，結(jié)果如表1。

2.2 定量分析

在解析出各組分的純色譜和質(zhì)譜以后，采用總體積積分和歸一化法得到各組分的定量結(jié)果，定量組分占總質(zhì)量的89.41%，結(jié)果也列于如表1。其中長(zhǎng)葉烯、香芹酚、杉木烯和橘烯含量依次最高。

3 結(jié)論

以二氯甲烷為溶劑，采用加速溶劑萃取法提取千斤拔化學(xué)組分，提取物用GC-MS檢測(cè)，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)組合方法，對(duì)其化學(xué)組分進(jìn)行系統(tǒng)研究。與單純采用相似度匹配來處理數(shù)據(jù)的方法相比，定性定量結(jié)果的準(zhǔn)確度顯著提高。共分辨出73個(gè)色譜峰，其中得到54個(gè)組分的定性結(jié)果，定性組分含量占總質(zhì)量的89.41%。

千斤拔二氯甲烷提取物中主要組分為烯類和酚類，主要組分為長(zhǎng)葉烯、香芹酚、杉木烯和橘烯等。方法簡(jiǎn)便快速，所得結(jié)果能為千斤拔樣品指紋圖譜建立提供基礎(chǔ)，以用于千斤拔的識(shí)別和質(zhì)量控制，也為開發(fā)和利用該千斤拔提供科學(xué)依據(jù)。

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