芪白平肺顆粒鎮(zhèn)咳祛痰平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究＊

孫曉萍，李卓瓊，常秀娟，李 威，周 軍，王振中，蕭 偉＊＊

（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司 連云港 222001；2.中藥制藥過(guò)程新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 連云港 222001）

芪白平肺顆粒鎮(zhèn)咳祛痰平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究＊

孫曉萍1，2，李卓瓊1，2，常秀娟1，2，李 威1，2，周 軍1，2，王振中1，2，蕭 偉1，2＊＊

（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司 連云港 222001；2.中藥制藥過(guò)程新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 連云港 222001）

目的:考察芪白平肺顆粒（QBPF）的鎮(zhèn)咳、祛痰和平喘作用。方法：采用氨水致小鼠咳嗽，利用小鼠氣管酚紅排泄法、豚鼠誘喘法評(píng)價(jià)藥物的鎮(zhèn)咳、祛痰和平喘作用。結(jié)果：芪白平肺顆粒高中低劑量組均能明顯減少小鼠咳嗽次數(shù)，對(duì)延長(zhǎng)咳嗽潛伏期也有一定的作用趨勢(shì)。芪白平肺顆粒各劑量組均能明顯增加酚紅排出量，具有較好祛痰作用。芪白平肺顆粒各劑量組能明顯延長(zhǎng)豚鼠引喘潛伏期，高劑量可明顯延長(zhǎng)跌撲時(shí)間。結(jié)論：芪白平肺顆粒具有較好的止咳、化痰、平喘作用。

芪白平肺顆粒 鎮(zhèn)咳 祛痰 平喘

芪白平肺顆粒由黃芪、川芎、薤白、葶藶子、五味子、地龍等組成，有益氣溫陽(yáng)、化痰散瘀之功效，臨床用于治療慢性阻塞性肺疾病或支氣管哮喘。臨床觀察23例支氣管哮喘患者，總有效率86.96%，對(duì)患者喘息、咳嗽、咳痰和肺部哮鳴音等癥狀均有明顯改善[1]。采用復(fù)合因素造模方法復(fù)制慢性阻塞性肺?。–hronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD）痰瘀阻肺證大鼠模型，造模的同時(shí)給予芪白平肺膠囊，觀察大鼠一般狀況、支氣管肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)和分類計(jì)數(shù)、IL-8TNF-αIFN-γ等細(xì)胞因子，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該藥可減少模型大鼠氣道炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，增強(qiáng)免疫功能[2]。此外，芪白平肺膠囊可有效防治慢阻肺痰瘀阻肺證模型大鼠低氧血癥的產(chǎn)生[3]，顯著降低大鼠平均肺動(dòng)脈壓力[4]，顯著升高NO水平，降低ET-1水平。本實(shí)驗(yàn)采用濃氨水致小鼠咳嗽，利用小鼠氣管酚紅排泄量法、豚鼠乙酰膽堿及組胺混合誘喘法評(píng)價(jià)藥物的鎮(zhèn)咳、祛痰和平喘作用，為臨床用藥、新藥開(kāi)發(fā)提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)KM小鼠72只，雌雄各半，由中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SXCK（軍）2012-0004，用于鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)；ICR小鼠63只，雄性，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，用于祛痰實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為：SXCK（蘇）2012-0004；豚鼠90只，雌雄各半，體質(zhì)量250 g左右，用于平喘實(shí)驗(yàn)，由南京市浦口區(qū)萊芙養(yǎng)殖場(chǎng)提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為：SXCK（蘇） 2014-0004。

1.1.2 藥物與試劑

芪白平肺顆粒（每1 g浸膏粉相當(dāng)于原生藥量3.39 g，江蘇康緣現(xiàn)代藥物研究院，批號(hào)：140801）；枸櫞酸噴托維林片（25 mg/片，安徽仁和藥業(yè)有限公司，批號(hào)：140101）；化痰平喘片（吉林省華港制藥有限公司，批號(hào)：20130402）；氨茶堿（0.1 g/片，南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：130601）；磷酸組胺（上海紫一試劑廠，批號(hào)：zy140820）；氯化乙酰膽堿（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：BCBK5708V）。

1.1.3 儀器與設(shè)備

YLS-8A多功能誘咳引喘儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站）；FlexStation 3多功能鈣流工作站（美國(guó)Molecular Devices公司）；BSA323S-CW電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 芪白平肺顆粒對(duì)氨水所致小鼠咳嗽的影響實(shí)驗(yàn)

取體質(zhì)量18-20 g的KM小鼠72只，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)3-4天后，以13 %氨水噴霧誘發(fā)咳嗽，觀察3 min內(nèi)小鼠咳嗽次數(shù)，判定咳嗽次數(shù)達(dá)3次以上為篩選合格。取篩選合格的小鼠隨機(jī)分為5組（每組10只），分別為對(duì)照組（灌胃等量0.5% CMC）組，噴托維林組（13.00 mg·kg-1），芪白平肺低中高劑量組（1.60 g、3.20 g、6.40 g生藥材/kg），模型組。按上述分組灌胃給藥，每天1次，連續(xù)7天，末次給藥后1 h，以13 %氨水噴霧誘發(fā)咳嗽，觀察小鼠咳嗽潛伏期（從開(kāi)始噴霧到引起小鼠第1次咳嗽的時(shí)間）和3 min 內(nèi)出現(xiàn)典型咳嗽的次數(shù)（典型咳嗽動(dòng)作：腹肌收縮或縮胸，同時(shí)張大嘴，有咳聲）[5]。

2.2.1 芪白平肺顆粒對(duì)祛痰作用的影響

取體重18-20 g的ICR雄性小鼠63只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3-4天后，隨機(jī)分為6組：正常組、溶劑對(duì)照組（灌胃等量0.5 % CMC）組、化痰平喘片組（1片/kg），芪白平肺顆粒低中高劑量組（1.60 g、3.20 g、6.40 g生藥材/kg）。按上述分組灌胃給藥，每天1次，連續(xù)7天，實(shí)驗(yàn)前1天禁食不禁水。于末次給藥后30 min，每鼠腹腔注射2.5 %酚紅生理鹽水溶液250 mg·kg-1，腹腔注射30 min后脫頸椎處死小鼠，背位固定，分離氣管，于喉頭下將剪去尖頭的7號(hào)針頭插入氣管內(nèi)約0.4 cm，用4號(hào)絲線結(jié)扎固定，5 mL注射器吸取1 mL 5%碳酸氫鈉溶液，往返沖洗呼吸道3次，將灌洗液注入試管內(nèi)，依次再用2 mL 5%碳酸氫鈉溶液灌洗呼吸道，每次往返3次，合并3次的灌洗液，靜置30 min后，吸取上清用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度A545。配制酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為54.00-1.69 μg·mL-1，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程折算出每只小鼠呼吸道酚紅排出量，比較每組小鼠酚紅排出量，即排痰量。

2.2.3 芪白平肺顆粒對(duì)豚鼠磷酸組胺引喘的影響

實(shí)驗(yàn)前1 天選取體質(zhì)量250-300 g 的豚鼠，雌雄兼用，分別置多功能誘咳引喘儀的噴霧箱內(nèi)，噴入0.4 %磷酸組胺和4 %氯化乙酰膽堿的混合溶液60 s，噴霧停止后觀察6 min內(nèi)豚鼠出現(xiàn)抽搐、跌倒的時(shí)間，將噴霧開(kāi)始到抽搐的時(shí)間，記為引喘潛伏期，豚鼠出現(xiàn)跌撲記為跌撲時(shí)間。若引喘潛伏期及跌撲時(shí)間大于150 s，或不出現(xiàn)哮喘癥狀的動(dòng)物則作為哮喘不合格動(dòng)物，棄去不用。次日取篩選合格的豚鼠69只，隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組（灌胃等量0.5% CMC-Na溶液）、氨茶堿組（0.05 g·kg-1）、芪白平肺顆粒低中高劑量組（0.95 g、1.90 g、3.80 g生藥材/kg）。所有組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃給藥，連續(xù)給藥2天，第2天給藥后1 h，分別放入噴霧箱內(nèi)，依前述方法噴霧磷酸組胺及氯化乙酰膽堿的混合溶液，記錄引喘潛伏期及跌撲時(shí)間，觀察6 min，大于6 min不跌倒者，引喘潛伏期或跌撲時(shí)間按360 s計(jì)算。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 芪白平肺顆粒的鎮(zhèn)咳作用

將小鼠置于13%濃氨水中予以刺激后，小鼠出現(xiàn)咳嗽、眼睛與鼻腔分泌物增加等癥狀，與對(duì)照組比較，噴托維林能明顯減少小鼠咳嗽次數(shù)（P＜0.01）；芪白平肺顆粒高中低劑量組均能明顯減少小鼠咳嗽次數(shù)（P＜0.01），陽(yáng)性藥和芪白平肺顆粒均能有延長(zhǎng)咳嗽潛伏期的作用趨勢(shì)，但無(wú)顯著差異。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 芪白平肺顆粒的鎮(zhèn)咳作用

表1 芪白平肺顆粒的鎮(zhèn)咳作用

注：與對(duì)照組比較，**P＜0.01。

2.3 芪白平肺顆粒的祛痰作用

小鼠腹腔注射酚紅后，尾部與四肢末端皮膚呈現(xiàn)深黃色，0.5 h后處理小鼠并以5%碳酸氫鈉溶液灌洗小鼠呼吸道，發(fā)現(xiàn)灌洗液呈現(xiàn)粉紅至深紅的不同色差，將灌洗液置545 nm下測(cè)定吸光度A545。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比溶媒對(duì)照組酚紅排出量無(wú)明顯差異。與溶媒對(duì)照組相比，化痰平喘片及芪白平肺顆粒各劑量組均能明顯增加酚紅排出量（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 芪白平肺顆粒對(duì)小鼠酚紅排泄量的影響

表2 芪白平肺顆粒對(duì)小鼠酚紅排泄量的影響

注：與溶媒對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=0.028 8X+0.035 8；R2=0.998 9

2.4 芪白平肺顆粒的平喘作用

噴入0.4 %磷酸組胺和4 %氯化乙酰膽堿的混合溶液60 s后，豚鼠出現(xiàn)呼吸急促、流涎、抽搐、跌撲等癥狀，離開(kāi)誘喘環(huán)境后，豚鼠1到2 min后逐漸恢復(fù)正常，陽(yáng)性藥氨茶堿組與對(duì)照組相比，豚鼠引喘潛伏期及跌撲時(shí)間明顯延長(zhǎng)（P＜0.01）；與對(duì)照組相比，芪白平肺顆粒高劑量組能明顯延長(zhǎng)豚鼠引喘潛伏期及跌撲時(shí)間（P＜0.01），芪白平肺顆粒低中劑量均能延長(zhǎng)引喘潛伏期（P＜0.05），但對(duì)跌撲時(shí)間無(wú)顯著作用。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 芪白平肺顆粒的平喘作用

表3 芪白平肺顆粒的平喘作用

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

3 討論

慢性阻塞性肺病是一種以持續(xù)氣流受限為特征的可以預(yù)防和治療的疾病，其氣流受限多呈進(jìn)行性發(fā)展，早期表現(xiàn)為咳嗽、咳痰反復(fù)發(fā)作，進(jìn)而喘息胸悶，發(fā)展為呼吸困難、呼氣氣流受限[6]。COPD常合并心血管疾病、高血壓、心力衰竭、感染等疾病，嚴(yán)重影響患病者的生活質(zhì)量，增加致殘率和病死率[7]。中醫(yī)認(rèn)為該病與肺脹相似，提出本病證候乃肺氣虧虛、陽(yáng)氣微弱、痰淤互結(jié)所致，是慢性阻塞性肺疾病急性加重的常見(jiàn)臨床證候[8]。肺氣虛則宣肅失常而咳嗽、喘促，肺氣虛則治節(jié)失常，水液不循常道凝聚為痰，可見(jiàn)咳痰。方中黃芪、生曬參大補(bǔ)脾肺之氣，合為君藥，共奏益氣溫陽(yáng)之功；川芎活血行氣，薤白理氣通陽(yáng)，葶藶子瀉肺平喘，行水消腫，三者共為臣藥；地龍清肺定喘、通行經(jīng)絡(luò)為佐使藥，諸藥合用補(bǔ)肺氣，平喘祛痰化瘀[9]。

本實(shí)驗(yàn)采用濃氨水誘導(dǎo)小鼠咳嗽，以咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)為指標(biāo)，考察QBPF顆粒的止咳作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，QBPF各劑量組均可明顯減少咳嗽次數(shù)，與對(duì)照組相比有顯著差異，且咳嗽潛伏期也有下降趨勢(shì)。采用酚紅排出實(shí)驗(yàn)觀察到藥物各劑量組可明顯增加酚紅排泄量，具有較好祛痰效果。組胺及乙酰膽堿混合噴霧致豚鼠哮喘后，QBPF各劑量可顯著延長(zhǎng)哮喘潛伏期，以高劑量效果最佳。綜上所述，QBPF顆粒具有較好鎮(zhèn)咳祛痰平喘的功效，為其順利開(kāi)發(fā)成為能廣泛用于臨床的上市新藥提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

1 朱慧志,韓明向,梅曉冬,等.金泰沖劑治療支氣管哮喘的臨床研究.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2004, 23(4): 11-14.

2 王傳博,李澤庚,彭波等.芪白平肺膠囊對(duì)慢阻肺痰瘀阻肺證模型大鼠支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞因子的影響.中華中醫(yī)藥雜志(原中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)), 2012, 27(11): 2807-2809.

3 李澤庚,王傳博,彭波,等.芪白平肺膠囊對(duì)慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺證模型大鼠血?dú)夥治龅挠绊?時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2010, 21(3): 569-570.

4 王傳博,李澤庚,彭波,等.芪白平肺膠囊對(duì)慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺證模型大鼠NO、ET-1及FIB的影響.中華中醫(yī)藥雜志(原中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)), 2012, 27(1): 91-93.

5 王小蘭,赫金麗,張國(guó)順,等.桑白皮水煎液及化學(xué)拆分組分止咳祛痰平喘作用研究.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2014, 16(9): 1951-1956.

6 中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組.慢性阻塞性肺疾病診治指南(2013年修訂版)(一).全科醫(yī)學(xué)臨床與教育, 2013, 11(5): 484-494.

7 王佳佳,謝洋,李建生,等.慢性阻塞性肺疾病合并癥研究.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2014, 16(12): 2692-2699.

8 張海龍,李建生,王海峰,等.慢性阻塞性肺疾病急性加重危險(xiǎn)窗證候分布的臨床調(diào)查研究. 世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2014, 16(7): 1587-1592.

9 童佳兵,王傳博,彭波,等.芪白平肺膠囊治療慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺證療效分析.中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2012, 30(1): 44-45.

Antitussive, Expectorant and Antiasthmatic Effects of Qibaipingfei Granules

Sun Xiaoping1,2, Li Zhuoqiong1,2, Chang Xiujuan1,2, Li Wei1,2, Zhou Jun1,2, Wang Zhenzhong1,2, Xiao Wei1,2
(1. Jiangsu Kanion Pharmaceutical, Ltd., Lianyungang 222001, China; 2. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Lianyungang 222001 China)

This study was aimed to investigate the antitussive, expectorant and antiasthmatic effects ofQibaipingfei(QBPF) granules. Cough model was induced by ammonia. Asthma model was induced by histamine and acetylcholine in guinea pig. And the expectorant experiment was determined by phenol sulphonphthalein excretion in mice to evaluate the antitussive, expectorant and antiasthmatic effects of drug. Compared with the model group, the number of cough was significantly decreased in each dose of QBPF groups. And there was lower trend in latency of cough with no significant differences. The excretory amounts of phenol sulphonphthalein were increased by all doses of QBPF groups. The latency of asthma was extended in all doses of QBPF groups and fell time was increased by high dose of QBPF group. It was concluded that QBPF granules has significant antitussive, expectorant and antiasthmatic effect.

Qibaipingfeigranules, antitussive, expectorant, antiasthmatic

10.11842/wst.2016.03.025

R283

A

（責(zé)任編輯：馬雅靜 張志華，責(zé)任譯審：王 晶）

2015-05-22

修回日期：2015-08-21

＊ 科學(xué)技術(shù)部國(guó)家科技重大專項(xiàng)“重大新藥創(chuàng)制”項(xiàng)目（2013ZX09402203）：現(xiàn)代中藥創(chuàng)新集群與數(shù)字制藥技術(shù)平臺(tái)，負(fù)責(zé)人：蕭偉。

＊＊ 通訊作者：蕭偉，本刊編委，博士，研究員級(jí)高級(jí)工程師，主要研究方向：中藥新藥的研究與開(kāi)發(fā)。