GPV感染擾動(dòng)雛鵝系統(tǒng)互作網(wǎng)絡(luò)的研究

朱新產(chǎn),王倩文,朱峰偉,楊麗金

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,山東省高校植物生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 青島　266109;2.青島即墨畜牧獸醫(yī)局,山東 即墨　266200)

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GPV感染擾動(dòng)雛鵝系統(tǒng)互作網(wǎng)絡(luò)的研究

朱新產(chǎn)1,王倩文1,朱峰偉2,楊麗金1

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,山東省高校植物生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 青島266109;2.青島即墨畜牧獸醫(yī)局,山東 即墨266200)

摘要：為了解GPV(Goose parvovirus)侵染的病理學(xué)致病機(jī)理,探究GPV感染擾動(dòng)雛鵝動(dòng)態(tài)代謝網(wǎng)絡(luò)平衡系統(tǒng),對(duì)GPV感染雛鵝血液中的蛋白質(zhì)、代謝酶活性及其同工酶結(jié)構(gòu)和功能等進(jìn)行生化分析。結(jié)果顯示,GPV感染雛鵝的血液中,蛋白酶、Est、POD、SOD、ALP、ADH、Amy、CAT、GPT、LDH活性分別提高約41%/63%,30%/53%,50%/14%,36%/73%,156%/142%,1005%/22%,36%/26%,13%/51%,60%/244%,289%/139%;IgG、IgM含量分別降低約50%,40%;蛋白質(zhì)含量增長(zhǎng)約50%,GPV感染雛鵝的血漿Est、SOD、ADH、Amy同工酶分別新增2,2,1,3條酶譜帶,Est同工酶消減2條慢區(qū)譜帶;血細(xì)胞Est、POD、SOD、Amy同工酶分別新增1,2,1,2條酶譜帶;血液中CAT、LDH、GPT、ALP同工酶分別出現(xiàn)7,1,3,3條酶帶變異,血細(xì)胞CAT、ADH同工酶分別缺少快區(qū)和慢、快區(qū)酶帶,ALP同工酶在血漿與血細(xì)胞方面分別缺少慢區(qū)和快區(qū)酶帶。同時(shí)顯示重鏈59 kDa蛋白帶是CK組IgM/G的共同特征,感染組IgG還缺失258,36 kDa蛋白帶;血漿與血細(xì)胞分別新增加131,86,43,33 kDa和144,104,58,53 kDa蛋白。血漿消減1條慢區(qū)酶蛋白,血細(xì)胞增加2條慢區(qū)酶蛋白。提示GPV感染應(yīng)激與寄主蛋白質(zhì)、蛋白酶及同工酶基因表達(dá)的協(xié)同作用,通過獨(dú)特的擾動(dòng)宿主動(dòng)態(tài)平衡代謝網(wǎng)絡(luò)直接或間接調(diào)控細(xì)胞易感性能。

關(guān)鍵詞：雛鵝;鵝細(xì)小病毒;蛋白/酶;同工酶;代謝網(wǎng)絡(luò)

小鵝瘟(Derzsy′s病)是由鵝細(xì)小病毒(Gooseparvovirus,GPV)引起的一種高度接觸性、敗血性傳染病,感染致病具有選擇性,主要侵害雛鵝和雛番鴨,病程短,致病性強(qiáng),病死率高,其流行形式隨環(huán)境發(fā)生新的轉(zhuǎn)變,呈現(xiàn)無規(guī)律的散發(fā)性流行[1]。雖然宿主在進(jìn)化中逐步演化、形成了高效的天然免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng),分別識(shí)別病原體模式分子和抗原分子,二者相互協(xié)同,依靠動(dòng)態(tài)平衡調(diào)控來抵御病原體干擾,從而實(shí)現(xiàn)自我防御功能[2-3]。然而由于病毒基因組大小的限制,病毒已形成了利用宿主細(xì)胞機(jī)制的能力來推動(dòng)自身生命周期的有效途徑,建立了針對(duì)宿主免疫反應(yīng)的逃逸機(jī)制以拮抗宿主的免疫攻擊,從而逃避免疫清除,導(dǎo)致病毒性的傳染病[4-5]。因此,病毒的免疫調(diào)節(jié)可能會(huì)通過常規(guī)或獨(dú)特的擾動(dòng)宿主分子防御網(wǎng)絡(luò)來調(diào)控細(xì)胞先天免疫反應(yīng)?；蚪M測(cè)序已確定了諸多與病毒易感性相關(guān)聯(lián)的胚系突變及大量的體細(xì)胞基因組變異,但從這些引起或驅(qū)動(dòng)突變的數(shù)據(jù)集仍然難以區(qū)分突變的背景或致病突變[6]。故此研究GPV感染雛鵝的蛋白質(zhì)、酶與同工酶的變異性,試圖探究GPV病毒在侵染過程中與宿主細(xì)胞的相互作用,了解病毒入侵細(xì)胞擾動(dòng)代謝網(wǎng)絡(luò)由穩(wěn)定的平衡狀態(tài)到紊亂狀態(tài)的轉(zhuǎn)換,旨為研究病毒侵入機(jī)制和有效預(yù)防和控制病毒傳播與感染提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1材料和方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

隨機(jī)挑選生長(zhǎng)一致、健康的3日齡雛鵝60只(萊陽五龍鵝實(shí)驗(yàn)基地提供)。處理組(RD):將種毒GPV YZ(由揚(yáng)州大學(xué)王永坤老師提供)用無菌生理鹽水(內(nèi)含青、鏈霉素各1 000 U/mL)適當(dāng)稀釋,經(jīng)口腔接種6日齡的雛鵝,每只接種0.2 mL;對(duì)照組(CK)接種等量的生理鹽水,連續(xù)觀察發(fā)病癥狀,分別采集血液,肝素抗凝。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1血漿與血細(xì)胞的分離將血樣在0～4 ℃,3 000 r/min離心15 min,分別收集上部血漿和下部血細(xì)胞。

1.2.2酶/蛋白液的制備取血漿或血細(xì)胞0.5 mL,在4 ℃下,用0.5 mol/L PBS (pH值6.8)提取,10 000 r/min離心10 min,收集上清液。

1.2.3蛋白酶和淀粉酶(Amy)活性測(cè)定參照文獻(xiàn)[7]的方法,分別以酪氨酸和葡萄糖建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,蛋白酶用福林酚法,680 nm波長(zhǎng)測(cè)定光吸收值;淀粉酶用3,5-二硝基水楊酸(DNS)顯色,540 nm波長(zhǎng)測(cè)定光吸收值,按公式:U=A·K·D/10 計(jì)算酶活力,U(μg/(mL·min)),A表示吸光值,K為換算系數(shù),D是稀釋倍數(shù)。

1.2.4乳酸脫氫酶(LDH)和乙醇脫氫酶(ADH)活力測(cè)定參照文獻(xiàn)[8]的方法,采用丙酮酸鈉/乙醇-輔酶Ⅰ法,取80 μL各組織制備酶液,NADH顯色,測(cè)定340 nm波長(zhǎng)吸光度值。以每分鐘內(nèi)吸光度值變化0.001為1個(gè)LDH或ADH酶活性單位(U)。計(jì)算公式:酶活性單位(U)= ΔA340×Vt/W×Vs×0.001×t,式中,ΔA340為ΔA酶樣/min-ΔA空白/min;Vt為酶液總體積;Vs為酶液用量;t為反應(yīng)時(shí)間;W為樣品重量。

1.2.5過氧化物酶(POD)和過氧化氫酶(CAT)活力的測(cè)定參照文獻(xiàn)[9]的方法,分別用愈創(chuàng)木酚法和乙醇-鉬酸銨法,取50 μL各組織制備酶液,愈創(chuàng)木酚和鉬酸銨顯色,在470或405 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值。以每分鐘內(nèi)吸光度值變化 0.01為1個(gè)POD或CAT酶活性單位(U)。計(jì)算公式:酶活性(U)=ΔA470×Vt/W×Vs×0.01×t,式中,ΔA470(ΔA405)為ΔA酶樣-ΔA空白;Vt為酶液總體積(mL),Vs為酶液用量(mL),t為反應(yīng)時(shí)間(min),W為樣品重量(g)。

1.2.8堿性磷酸酶(ALP)活力測(cè)定參照文獻(xiàn)[12]的方法,用磷酸苯二鈉法,在510 nm測(cè)吸光度值。每100 mL血清在 37 ℃與底物作用 15 min,產(chǎn)生1 mg 酚為1 個(gè)金氏單位(Kinggs)。按公式:ALP活力(金氏單位)=(A測(cè)定-A對(duì)照)×0.05×100/(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)計(jì)算。式中:A為吸光度,0.05為酚標(biāo)準(zhǔn)液(0.05 mg/mL),100為所加酶液體積 (mL)。

1.2.9谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (GPT) 活性的測(cè)定參照文獻(xiàn)[13]的方法,以丙酮酸鈉-谷氨酸為反應(yīng)液,2,4-二硝基苯肼顯色,520 nm波長(zhǎng)測(cè)定光吸收值。按公式:轉(zhuǎn)氨酶活性(U)=4×ΔA520×酶液總體積/樣品總體積,式中:ΔA520= (A測(cè)定-A對(duì)照)/(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白),4為丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶換算單位。1.2.10蛋白質(zhì)含量檢測(cè)參照文獻(xiàn)[14]的方法,用牛血漿蛋白為標(biāo)準(zhǔn),紫外法檢測(cè),蛋白質(zhì)(mg/mL)=1.55×A280-0.76×A260,F1=1.115,F2=0.76。1.2.11同工酶PAGE參照文獻(xiàn)[15]的方法,分離膠7.0%,濃縮膠2.5%,4 ℃恒流20 mA,電泳6～7 h。蛋白酶用0.12%考馬斯亮藍(lán)R250 (CBB) 染色顯帶;EST 同工酶采用α/β醋酸-偶聯(lián)劑固蘭RR系統(tǒng)染色;POD同工酶和SOD同工酶分別選用聯(lián)苯胺-Vc-H2O2乙酸緩沖液系統(tǒng)及NBT-核黃素磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(負(fù)染法)染色;ALP 同工酶采用α-萘酚磷酸鈉-固蘭RR硼酸緩沖液染色系統(tǒng);LDH同工酶采用輔酶Ⅰ-NBT-乳酸鈉-Tris-HCl系統(tǒng)染色;ADH同工酶采用輔酶Ⅰ-NBT-乙醇-Tris-HCl系統(tǒng)染色;GPT同工酶用L-天冬氨酸、α-酮戊二酸Tris-HCl 緩沖系統(tǒng),吡哆醛-5-磷酸-固藍(lán)BB顯色條帶;Amy同工酶用淀粉-乙酸緩沖體系預(yù)孵,碘顯色,冰乙酸/甲醇液固定;CAT同工酶用KMnO4-H2O2中性染色系統(tǒng)(負(fù)染法)染色;用無離子水漂洗脫色至背景清晰,pH值4.7乙酸緩沖液固定保存,透射光下照相記錄。

1.2.12血液蛋白SDS-PAGE參照文獻(xiàn)[16]的方法,分離膠10.0%,濃縮膠2.5%,恒流25 mA,電泳6～7 h,標(biāo)準(zhǔn)蛋白:BM523(M1)、MBI SM0431(M2)。0.12%考馬斯亮藍(lán)染色,透射光成像記錄。

1.2.13數(shù)據(jù)分析用BandScan 5.0掃描PAGE凝膠,標(biāo)記分析。

2結(jié)果與分析

2.1血液中蛋白質(zhì)含量與酶活性的變化

由圖1可知,受GPV感染雛鵝的血液,與對(duì)照組相比,血漿中RD組的蛋白酶、Est、POD、SOD、ALP、ADH、Amy、CAT、GPT、LDH活性分別增高0.41,0.30,0.50,0.36,1.56,10.05,0.36,0.13,0.64,2.89倍,血細(xì)胞中分別增高0.63,0.53,0.14,0.73,1.42,0.22,0.26,0.51,2.44,1.39倍;并且血細(xì)胞的POD與GPT活性分別是血漿的202～265,8～17倍,表明POD和GPT主要存在于血細(xì)胞內(nèi)。血漿與血細(xì)胞的蛋白質(zhì)含量也分別升高0.51,0.49倍增長(zhǎng)約50%;而免疫球蛋白IgG、IgM含量在血漿與血細(xì)胞中分別降低了0.541,0.567和0.475,0.247倍，降低約50%和40%。

指標(biāo)的系數(shù):Est/LDH/ADH×103;POD(1)×105、(2)×104;ALP/Protein×10;SOD/CAT×102;Amy×10-1;GPT×10-2;

2.2血液中蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)組成的變化

2.2.1血液中的酶蛋白由圖2顯示,雛鵝的血液出現(xiàn)了5～9條不同酶蛋白譜帶,與對(duì)照組相比,受GPV感染雛鵝的血漿中減少1條慢區(qū)酶蛋白帶,而血細(xì)胞增加了2條慢區(qū)酶蛋白帶,并且酶蛋白帶灰度值變化與蛋白酶活性變化相一致。

2.2.2血液中的蛋白質(zhì)由圖3可看出,雛鵝的血液出現(xiàn)了12～18條差別蛋白質(zhì)譜帶,與對(duì)照組相比較,GPV感染雛鵝的血漿中新增加131,86,43,33 kDa蛋白條帶,血細(xì)胞中新增加144,104,58,53 kDa蛋白條帶。并且血漿及血細(xì)胞蛋白帶灰度值變化與其含量變化相一致。

M.遷移距離;G.灰度值;S.信號(hào)；CK1.血漿對(duì)照組;CK2.血細(xì)胞對(duì)照組;RD1.血漿GPV感染組;RD2.血細(xì)胞GPV感染組。圖3-13同。

M1.標(biāo)準(zhǔn)蛋白BM523；M2.標(biāo)準(zhǔn)蛋白MBI SM0431；W.分子質(zhì)量(kDa)。

2.2.3血清中的免疫球蛋白由圖4顯示,雛鵝血清IgG的特征蛋白帶是58～70 kDa,CK組IgM/G的共同特征蛋白帶為59 kDa。CKIgM與RDIgM相比較,大于116 kDa的為6∶4,116～40 kDa的為4∶3,小于45 kDa的為3∶5,RDIgM明顯缺失59 kDa特征蛋白帶,低分子量蛋白明顯占優(yōu)勢(shì),而CKIgM的高分子量蛋白居多。CKIgG與RDIgG相比較,大于116 kDa的為5∶3,116～45 kDa的為5∶5,小于40 kDa的為6∶5,RDIgG明顯缺失258,36,59 kDa蛋白帶。

M.標(biāo)準(zhǔn)蛋白BM523;CKIgM.對(duì)照組IgM;CKIgG.對(duì)照組IgG;RDIgM.感染IgM;RDIgG.感染組IgG。

2.3保護(hù)酶同工酶的變化

2.3.1酯酶(Est)同工酶由圖5顯示,雛鵝血液的Est同工酶出現(xiàn)4條差異明顯變化譜帶,與對(duì)照組相比,GPV感染鵝的血漿減少了2條慢區(qū)譜帶,增加了2條快區(qū)譜帶。而血細(xì)胞新出現(xiàn)1條快區(qū)同工酶帶,并且Est同工酶譜帶灰度值變化與Est的活性變化相一致。

圖5　GPV感染雛鵝血液的Est同工酶譜與掃描參數(shù)分析

2.3.2過氧化物酶(POD)同工酶由圖6可知,GPV感染雛鵝的血細(xì)胞POD同工酶出現(xiàn)5條酶帶(中區(qū)),與對(duì)照組比較,新出現(xiàn)2條酶帶,而血漿的POD同工酶未顯出酶帶。血細(xì)胞POD同工酶譜帶灰度值變化與POD活性的變化相一致。

圖6　GPV感染雛鵝血液的POD同工酶譜與掃描參數(shù)分析

2.3.3超氧化物歧化酶(SOD)同工酶由圖7顯示,GPV感染雛鵝血液中的SOD同工酶存在慢、中、快區(qū)酶帶變異,與對(duì)照組比較,GPV感染的血漿與血細(xì)胞的SOD同工酶分別增加2，1條中區(qū)酶譜帶,并且SOD同工酶帶灰度值變化與SOD的活性變化相一致。2.3.4過氧化氫酶(CAT)同工酶由圖8可知,GPV感染雛鵝血漿中的CAT同工酶存在慢、中、快區(qū)7條酶帶變異,而血細(xì)胞中出現(xiàn)慢、中區(qū)3條酶帶,缺少快區(qū)酶帶。與對(duì)照組比較,RD組的血漿與血細(xì)胞的CAT同工酶譜帶灰度值與其酶活性變化相一致。

圖7　GPV感染雛鵝血液的SOD同工酶譜與掃描參數(shù)分析

2.4脫氫酶同工酶的變化

2.4.1乳酸脫氫酶(LDH)同工酶由圖9可看出,GPV感染雛鵝血液中的LDH同工酶出現(xiàn)1個(gè)慢區(qū)同工酶譜帶,與對(duì)照組相比,RD組的血漿與血細(xì)胞的LDH同工酶譜帶灰度值與其酶活性變化相一致。

圖9　GPV感染雛鵝血液的LDH同工酶譜與掃描參數(shù)分析

2.4.2乙醇脫氫酶(ADH) 同工酶由圖10顯示,GPV感染雛鵝血液中的ADH同工酶存在慢、中、快區(qū)酶帶變異,與對(duì)照相比,GPV感染的血漿ADH同工酶增加1條快區(qū)酶譜帶,血細(xì)胞缺少慢、快區(qū)酶帶。并且ADH同工酶帶灰度值變化與其活性的變化相一致。

圖10　GPV感染雛鵝血液的ADH同工酶譜與掃描參數(shù)分析

圖11　GPV感染雛鵝血液的Amy同工酶譜與掃描參數(shù)分析

2.5代謝酶同工酶的變化

2.5.1淀粉酶(Amy)同工酶由圖11可知,GPV感染雛鵝血液中出現(xiàn)了3～7個(gè)淀粉酶同工酶譜帶變化,與對(duì)照組相比,GPV感染的血漿與血細(xì)胞Amy同工酶分別增加了3,2條中區(qū)同工酶帶,并且Amy同工酶譜帶灰度值變化與Est的活性變化趨勢(shì)相一致。

2.5.2谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)同工酶由圖12顯示,GPV感染雛鵝的血細(xì)胞GPT同工酶出現(xiàn)3條中區(qū)酶帶,而血漿的GPT同工酶未顯出酶帶,并且血細(xì)胞GPT同工酶譜帶灰度值變化與其活性的變化相一致。

圖12　GPV感染雛鵝血液的GPT同工酶譜與掃描參數(shù)分析

2.5.3堿性磷酸酶(ALP)同工酶由圖13可看出,GPV感染雛鵝的血漿與血細(xì)胞ALP同工酶存在2,3條酶帶變異,分別缺少慢區(qū)和快區(qū)酶帶。ALP同工酶帶灰度值變化與其活性的變化相一致。

圖13　GPV感染雛鵝血液的ALP同工酶譜與掃描參數(shù)分析

2.6GPV感染對(duì)動(dòng)態(tài)代謝平衡網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控

受GPV感染雛鵝的血液中,蛋白質(zhì)含量增長(zhǎng),IgG、IgM含量降低,蛋白酶、Est、POD、SOD、ALP、ADH、Amy、CAT、GPT、LDH活性分別不同程度的增高,及其他同工酶譜帶的消長(zhǎng)差異變化。反映蛋白、酶與同工酶基因表達(dá)譜型出現(xiàn)變異體,直接參與了體內(nèi)代謝網(wǎng)絡(luò),GPV感染擾動(dòng)代謝網(wǎng)絡(luò)平衡,宿主通過酶蛋白/酶與GPV相互作用調(diào)節(jié)多種代謝活動(dòng),應(yīng)激理化病狀如圖14所示。

3討論

GPV的侵入感染是利用宿主細(xì)胞機(jī)制的能力來推動(dòng)自身生命周期,易感性的蛋白/酶是必需的,每一種都會(huì)綁定到人類細(xì)胞表面的一種特殊受體,并刺激宿主細(xì)胞接受病原體。通常情況下,這些受體分子能夠執(zhí)行不同的功能,如調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)和修復(fù)創(chuàng)傷等[17]。酶蛋白/酶多肽締合分子間互相作用的類型和頻率及構(gòu)型、大小、數(shù)目,隨細(xì)胞的應(yīng)激環(huán)境及功能狀態(tài)發(fā)生特異性變化,密切關(guān)聯(lián)著個(gè)體發(fā)育的病理理化特征和基因調(diào)控機(jī)制[18]。因此,GPV病毒在侵染過程中與宿主細(xì)胞協(xié)同作用,通過常規(guī)或獨(dú)特的擾動(dòng)宿主分子防御網(wǎng)絡(luò),由穩(wěn)定的代謝平衡狀態(tài)轉(zhuǎn)換為紊亂狀態(tài),從而調(diào)控細(xì)胞先天免疫反應(yīng)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,在受GPV感染雛鵝的血液中,IgG、IgM含量分別降低約50%和40%;蛋白質(zhì)含量增長(zhǎng)約50%,蛋白酶、Est、POD、SOD、ALP、ADH、Amy、CAT、GPT、LDH酶活性分別提高約41%/63%，30%/53%，50%/14%，36%/73%，156%/142%，1005%/22%，36%/26%，13%/51%，60%/244%，289%/139%,蛋白酶和其他酶的同工酶譜帶灰度值也呈現(xiàn)類似的增強(qiáng)趨勢(shì)。Ig具有抗體活性,調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)[19],蛋白酶調(diào)節(jié)基質(zhì)動(dòng)態(tài)平衡,SOD、POD和CAT是演化過程中建立的關(guān)鍵生物防御系統(tǒng)酶,形成解毒系統(tǒng)[20]。Est維持免疫耐受[21],Amy參與生理活動(dòng)的能量供給和抵御病毒的侵害作用[22];LDH、ADH調(diào)節(jié)機(jī)體的NAD+/NADH的比率與生理機(jī)能，GPT調(diào)節(jié)各種生理活動(dòng),增強(qiáng)抗逆性,ALP直接參與磷代謝,與DNA、RNA和蛋白質(zhì)脂質(zhì)代謝關(guān)聯(lián),輔助標(biāo)記組織損傷程度病理狀態(tài)。提示GPV感染擾動(dòng)代謝網(wǎng)絡(luò)平衡,宿主通過酶蛋白/酶的特征變化與GPV相互作用調(diào)節(jié)多種代謝活動(dòng),協(xié)調(diào)體內(nèi)代謝平衡網(wǎng)絡(luò)。

圖14　GPV感染擾動(dòng)動(dòng)態(tài)代謝平衡調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

同工酶的變異型等位基因頻率及基因型,隨應(yīng)激環(huán)境和遺傳基礎(chǔ)的不同導(dǎo)致其結(jié)構(gòu)或活性差異變化,反映基因表達(dá)差異或特殊功能[23]。本試驗(yàn)結(jié)果表明,GPV感染雛鵝的血漿Est、SOD、ADH、Amy同工酶分別新增2，2，1，3條酶譜帶,Est同工酶消減2條慢區(qū)譜帶,POD/GPT同工酶未顯出酶帶;血細(xì)胞Est、POD、SOD、Amy同工酶分別新增1，2，1，2條酶譜帶;血液中CAT、LDH、GPT、ALP同工酶分別出現(xiàn)7，1，3，3條酶帶變異,血細(xì)胞CAT、ADH同工酶分別缺少快區(qū)和慢、快區(qū)酶帶,ALP同工酶在血漿與血細(xì)胞分別缺少慢區(qū)和快區(qū)酶帶。提示GPV感染應(yīng)激同工酶基因與寄主的互作,誘發(fā)同工酶基因表達(dá)譜型出現(xiàn)變異體,出現(xiàn)顯性等位新基因,直接或間接調(diào)控酶促反應(yīng)防御體系,是雛鵝應(yīng)激GPV感染的敏感酶。

Ig不同組分間共同協(xié)作,強(qiáng)化功能,應(yīng)答多種變化,抵御外源病原微生物的侵襲,而對(duì)機(jī)體無任何副作用[24]。本試驗(yàn)研究顯示,鵝血清IgG的特征蛋白帶是重鏈(58～70 kDa),重鏈59 kDa蛋白帶是CK組IgM/G的共同特征,而RD組明顯缺失這個(gè)特征蛋白帶,RDIgG還缺失258,36 kDa蛋白帶。提示GPV的感染影響了雛鵝血清Ig基因的表達(dá),使雛鵝血清IgM/G基因表達(dá)的蛋白圖譜發(fā)生了改變,59 kDa重鏈Ig是GPV的敏感蛋白,Ig基因是鵝細(xì)小病毒的易感基因。同時(shí)GPV感染雛鵝的血漿消減了1條慢區(qū)酶蛋白,新增加131,86,43,33 kDa蛋白。而血細(xì)胞增加2條慢區(qū)酶蛋白和144,104,58,53 kDa蛋白。提示GPV感染應(yīng)激基因表達(dá)的變異,改變酶/蛋白構(gòu)成的亞基結(jié)構(gòu),直接或間接地調(diào)控代謝途徑與生理機(jī)能,因此，蛋白質(zhì)、酶及同工酶發(fā)生變異的基礎(chǔ)是GPV感染與宿主基因表達(dá)的協(xié)同互作,通過擾動(dòng)平衡代謝網(wǎng)絡(luò)直接或間接調(diào)節(jié)病理性能,是雛鵝應(yīng)激病癥的有效標(biāo)記。

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Study on Perturbing Systematic Interaction Network of GPV-gosling in an Infectious Context

ZHU Xinchan1,WANG Qianwen1,ZHU Fengwei2,YANG Lijin1

(1.College of Life Science,Qingdao Agricultural University,Key Laboratory of Plant Biotechnology in University of Shandong Province,Qingdao266109,China;2.Jimo Bureau of Animal Husbandry and Veterinary,Jimo266200,China)

Abstract：Perturbing systematic host network for Goose parvovirus (GPV) in natural infection were still unknown.Understanding pathogenic mechanism required that protein,enzymes and isozyme from goslings infected as manifestations of network properties,rather than simply as the result of individual variations.Here blood of experimentally GPV infected goslings were examined by biochemical analysis.The results indicated that the activity of protease,Est,POD,SOD,ALP,ADH,Amy,CAT,GPT and LDH from goslings infected GPV were higher 41%/63%,30%/53%,50%/14%,36%/73%,156%/142%,1005%/22%,36%/26%,13%/51%,60%/244%,289%/139% than that of control group respectively.The content of IgG and IgM from goslings infected GPV were lower 50%,40% than that of control group respectively,but protein was higher 50%.The isozyme of Est,SOD,ADH and Amy appeared 2,2,1,3 new enzyme band respectively,but deleted 2 slow-zone Est isozyme band in the serum of goslings infected Goose parvovirus.The isozyme of Est,POD,SOD and Amy appeared 1,2,1,2 new enzyme band in the blood corpuscle of goslings infected Goose parvovirus respectively.The isozyme of CAT,LDH,GPT and ALP appeared 7,1,3,3 variation band in the blood of goslings infected GPV respectively.The isozyme of CAT and ADH defected fast-zone and slow-zone,fast-zone band in the blood corpuscle of goslings infected Goose parvovirus respectively.The isozyme of ALP defected slow-zone and fast-zone band in the serum and blood corpuscle of goslings infected GPV respectively.At the same time,it also showed that the 59 kDa protein band was a common feature of IgM/G in gosling,and IgG deleted still 258,36 kDa protein in the blood of goslings infected Goose parvovirus.The protein were increased by 131,86,43,33 kDa and 144,104,58,53 kDa band in the serum and blood corpuscle of goslings infected Goose parvovirus respectively.There were deleted 1 slow-zone zymoprotein band in the serum of goslings infected GPV,and increased 2 slow-zone zymoprotein band in the blood corpuscle of goslings infected GPV.Those suggested that the interaction of GPV stress and host protein/enzymes and isozyme gene expression,through unique host dynamic balance of metabolic network directly or indirectly regulated cell disturbance susceptible performance.

Key words:Gosling;Goose parvovirus;Protein/Enzymes;Isozyme;Metabolic network

doi:10.7668/hbnxb.2016.02.032

中圖分類號(hào)：S852.3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-7091(2016)02-0195-10

作者簡(jiǎn)介：朱新產(chǎn)(1959-),男,陜西武功人,教授,博士,主要從事病毒感染致病機(jī)制研究。

基金項(xiàng)目：山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(ZR2011CM008);青島市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(12-1-4-5-(2)-jch)

收稿日期：2015-12-04