DGCR8在結直腸癌中的表達及臨床意義*

陳　勇，　王向陽，　蔡　威，　王　輝

1廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院急診科，武漢　4300702武漢市中心醫(yī)院胃腸外科，武漢　430014

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DGCR8在結直腸癌中的表達及臨床意義*

陳勇1，王向陽2△，蔡威2，王輝2

1廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院急診科，武漢4300702武漢市中心醫(yī)院胃腸外科，武漢430014

摘要：目的探討DGCR8基因在結直腸癌中的表達及臨床意義。方法應用免疫組織化學的方法對126例結直腸癌組織、正常結直腸黏膜以及淋巴結病理切片中的DGCR8蛋白進行檢測。結果DGCR8的表達在結直腸癌組織和轉移淋巴結組織中明顯高于正常黏膜，其表達水平與淋巴結轉移、遠處轉移、臨床Dukes分期、CEA以及生存時間等密切相關(均P<0.05)，而且是結直腸癌重要的預后獨立危險因素之一(P<0.05)。結論DGCR8表達上調可能促進結直腸癌的發(fā)生、發(fā)展、轉移并且影響預后。

關鍵詞：DGCR8；結直腸癌；預后

在世界范圍內，結直腸癌死亡率位于惡性腫瘤的第2位[1]，我國結直腸癌的發(fā)病率和死亡率均保持上升趨勢，2012《中國衛(wèi)生統(tǒng)計年鑒》中指出2004～2005年結直腸癌患者的死亡率達到了7.25/10萬[2]。結直腸癌的發(fā)生、發(fā)展以及轉移經歷多個步驟并受到多個基因調控[3]。最近研究證實，DGCR8的異?？梢砸餸iRNA的表達發(fā)生改變，從而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，影響腫瘤的預后[4-7]。我們用免疫組織化學的方法檢測DGCR8在結直腸癌組織、正常黏膜及轉移淋巴結中的表達水平，結合患者臨床資料，探討其臨床意義。

1資料與方法

1.1研究對象

126例結直腸癌組織切片和與之相配對的正常結直腸黏膜及淋巴結標本均取自我院2005年1月至2010年6月的結直腸癌患者，所有患者術前均未行放化療，病理檢查均證實為結直腸癌，所有臨床資料均獲得完整的5年隨訪資料，全組男64例，女62例，年齡21～84歲，平均年齡54.6歲。按2010年國際抗癌聯(lián)盟/美國癌癥聯(lián)合委員會(UICC/AJCC)TNM分期標準進行分期[8]。其中DukesA/B 30例，DukesC/D 96例。

1.2實驗試劑及方法

羊抗人DGCR8單克隆抗體、二抗及免疫組化SP法染色試劑盒均購自武漢巴菲爾生物技術有限公司。免疫組織化學檢測方法按SP試劑盒說明操作。

1.3結果判定

由2位病理學專家采用雙盲法閱片。具體方法如下：①按染色強度分為4個分值：0(陰性)，1(弱陽性)，2(中等陽性)，3(強陽性)；②按染色范圍分為4個分值：1(<25%)，2(25%～)，3(50%～)，4(>75%)；③染色強度和范圍評分之和為其分值，2位病理學專家評分的均值為每張切片的最終評分。最終評分0～3分為DGCR8低表達，4～7分為DGCR8高表達。

1.4隨訪

采用電話、書信和電子郵件進行隨訪，所有病例均有5年回訪的完整資料，生存時間為手術之日至2015年6月(回訪截止時間)或死亡時間。隨訪自術后開始進行。

1.5統(tǒng)計學處理

應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析數據，組間差異用χ2檢驗分析，生存率的比較采用Kaplan-Meier生存曲線法及Log-rank檢驗，建立Cox比例風險模型進行單、多因素預后分析，均以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1DGCR8蛋白在結直腸癌組織、正常黏膜和淋巴結中的表達

DGCR8蛋白的表達在結直腸癌組織和陽性淋巴結組織中明顯高于正常黏膜(P<0.05)，有淋巴結轉移的結直腸癌組織高于無淋巴結轉移的結直腸癌組織(P<0.05)，見表1。免疫組化圖片顯示DGCR8蛋白表達，結直腸癌組織和陽性淋巴結組織較正常黏膜明顯增高，有淋巴結轉移的結直腸癌組織高于無淋巴結轉移的結直腸癌組織，見圖1。

表1　DGCR8蛋白在結直腸癌組織、正常黏膜和淋巴結中的表達

2.2結直腸癌中DGCR8的表達與臨床病理特征之間的關系

結直腸癌中DGCR8的表達與淋巴結轉移、遠處轉移、Dukes分期及CEA有關(均P<0.05)；與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度及淋巴結轉移度(LNR)無關(均P>0.05)，見表2。

2.3DGCR8與結直腸癌的關系

多因素Cox比例風險模型分析結果顯示DGCR8、Dukes分期、遠處轉移和CEA是預后獨立危險因素(均P<0.05)，見表3。

A：正常黏膜；B：無淋巴結轉移結直腸癌組織；C：有淋巴結轉移結直腸癌組織；D：陽性淋巴結圖1　DGCR8蛋白表達的免疫組織化學染色圖片(×200)Fig.1 Immunohistochemistry staining of DGCR8 protein(×200)

項目總數高表達低表達P值病例1269927年齡 <55歲 ≥55歲5967485111160.475性別 男 女6462485116110.321腫瘤大小 <3cm ≥3cm4383326711160.414分化程度 高 中 低2438641832496615各組間比較均>0.05淋巴結轉移 無 有4284277215120.006LNR <30% ≥30%5868465312150.852遠處轉移 無 有分期 DukesA/B DukesC/D864042846237277224315120.0180.006CEA ≤5ng/mL >5ng/mL5274356417100.010

淋巴結轉移度(LNR)=陽性淋巴結數/總檢查淋巴結數×100%

表3　多因素Cox比例風險模型分析

HR：風險率；CI：可信區(qū)間

2.4DGCR8的表達與結直腸癌生存時間之間的關系

結直腸癌組織中DGCR8表達水平與患者生存時間明顯相關(P<0.01)，DGCR8表達越高，生存時間越短，見圖2。

圖2　DGCR8的表達與結直腸癌生存時間之間的關系Fig.2 Relationship between the DGCR8 protein expression level and survival time in colorectal cancer

3討論

DGCR8是位于人類22號染色體ql 1.2區(qū)域的一個等位基因，其與迪喬治綜合癥(Digeorge Syndrome，DGCS)相關，故命名為DGCR8[9]。DGCR8是一種RNA結合蛋白，參與miRNA的合成，在miRNA的合成過程中，結合pri-miRNA，并通過與Drosha相互作用和穩(wěn)定微處理器來促進Drosha的切割，調控miRNA的生成，以此影響腫瘤的增殖、遷移和侵襲能力[4-7]。研究表明，DGCR8高表達促進癌的發(fā)生、發(fā)展及轉移，在前列腺癌、喉癌和卵巢癌等腫瘤中已得到證實[10-12]。到目前為止，該蛋白在結直腸癌中的報道甚少，其功能還不太清楚。

我們的研究中發(fā)現，DGCR8在結直腸癌和轉移淋巴結組織中的表達明顯高于正常黏膜(P<0.05)，有淋巴結轉移的結直腸癌組織高于無轉移的結直腸癌組織(P<0.05)。這些與上述腫瘤中的表達情況相似。DGCR8的上調與淋巴結轉移、遠處轉移、Dukes分期和CEA密切相關(均P<0.05)，DGCR8的上調與腫瘤的發(fā)展相關聯(lián)。結直腸癌中DGCR8在CEA正常值以內和高于正常值時的比較顯示，CEA檢測值越高的患者，同樣DGCR8表達越高(P<0.05)，在今后的臨床診斷和預后評估中，DGCR8可能與CEA有相似的臨床意義，作為臨床腫瘤常用的監(jiān)測指標。Cox比例風險模型單、多因素分析發(fā)現DGCR8與遠處轉移、Dukes臨床分期和CEA一樣均是影響預后的獨立因素，體現了DGCR8表達的高低可能是預測患者分期及預后的重要參考指標。生存分析顯示，結直腸癌中高表達DGCR8患者生存時間明顯低于低表達患者，這也提示DGCR8對預測患者的預后有重要的意義。

綜上所述，DGCR8的上調與結直腸癌的發(fā)生、進展以及預后均有著密切的關系，將來可能在結直腸癌患者的篩選、診斷、術后療效評估、病情監(jiān)測、預后等方面發(fā)揮重要作用，并成為結直腸癌的理想標志物之一。

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(2015-08-03收稿)

Expression of DGCR8 in Colorectal Cancer and Its Clinical Significance

Chen Yong1，Wang Xiangyang2△，Cai Wei2etal

1DepartmentofEmergency，WuhanGeneralHospitalofGuangzhouMilitaryCommand，Wuhan430070，China2DepartmentofGastrointestinalSurgery，WuhanCentralHospital，Wuhan430014，China

AbstractObjectiveTo study the expression and clinical significance of DGCR8 in colorectal cancer.MethodsImmunohistochemical method(IHC)was used to detect the expression level of DGCR8 protein in 126 cases of colorectal cancer tissues，normal mucosae and lymph nodes.ResultsThe expression level of DGCR8 in colorectal cancer tissues and metastatic lymph nodes was obviously higher than that in normal mucosae，and the up-regulated DGCR8 was related to lymph node metastasis，remote metastasis，clinical Dukes stage，CEA and survival time(P<0.05 for all).Furthermore，DGCR8 was an important independent prognosis factor for colorectal cancer(P<0.05).ConclusionUp-regulated DGCR8 may play an important role in the occurrence，progression，metastasis and prognosis of colorectal cancer.

Key wordsDGCR8；colorectal cancer；prognosis

中圖分類號：R735.3

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2016.02.017

*湖北省衛(wèi)生計生委立項課題(No.WJ2015Z067)；湖北省自然科學基金資助項目(No.2015CFB542)；武漢市衛(wèi)生計生委立項課題(No.WX15D62)陳勇，男，1977年生，主治醫(yī)師，醫(yī)學碩士，E-mail：fzqy1212@163.com

△通訊作者，Corresponding author，E-mail：wxydoctor@163.com