痔寧洗液抗炎和鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究

劉曉梅，谷云飛

(南京中醫(yī)藥大學(xué)如皋市中醫(yī)院肛腸科，江蘇如皋226500)

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痔寧洗液抗炎和鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究

劉曉梅，谷云飛*

(南京中醫(yī)藥大學(xué)如皋市中醫(yī)院肛腸科，江蘇如皋226500)

[摘要]目的：探討痔寧洗液抗炎鎮(zhèn)痛的效果。方法:建立炎癥模型(角叉菜膠致大鼠足跖腫脹模型及二甲苯致小鼠毛細(xì)血管通透性增高模型)與疼痛模型(扭體模型及熱板模型)，將各模型組隨機(jī)分為5組(溶劑對(duì)照組、新潔爾滅組、痔寧洗液低劑量組、痔寧洗液中劑量組、痔寧洗液高劑量組)。測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的大鼠足跖腫脹率及測(cè)定二甲苯染色后藍(lán)斑色澤深淺及含量；測(cè)定扭體次數(shù)及計(jì)算扭體率，測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的疼痛閾值。結(jié)果：痔寧洗液不同劑量組抗炎、鎮(zhèn)痛作用均優(yōu)于溶劑對(duì)照組及新潔爾滅組(P<0.05)。不同痔寧洗液劑量組間抗炎、鎮(zhèn)痛作用差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并呈劑量依賴性。結(jié)論：痔寧洗液具有良好的抗炎及鎮(zhèn)痛作用。

[關(guān)鍵詞]痔寧洗液；抗炎；鎮(zhèn)痛

痔寧洗液以魚腥草、苦參、大黃、黃柏、蒲公英、紫花地丁、玄胡、樸硝組方，具有清熱解毒、活血消腫、燥濕止癢之功，系如皋中醫(yī)院肛腸科特色制劑，療效顯著且未發(fā)現(xiàn)毒副作用等不良反應(yīng)，獲得廣大患者好評(píng)。本實(shí)驗(yàn)利用炎癥和疼痛動(dòng)物模型，觀察痔寧洗液的抗炎及鎮(zhèn)痛作用，以使該藥更有效地為廣大患者服務(wù)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物C57BL/6J小鼠，體重18～22 g，雌雄不限；SD大鼠240只，體重180～240 g，雌雄不限，由南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SYXK(蘇)2007-0021。

1.2藥品和試劑痔寧洗液以魚腥草45 g、苦參30 g、大黃45 g、黃柏30 g、蒲公英30 g、紫花地丁30 g、玄胡30 g、樸硝30 g組方，加入蒸餾水制成5 000 ml，水煎濃縮成500 ml，加入防腐劑即得，如皋中醫(yī)院藥劑科提供，批號(hào)：蘇藥制字Z04001598。將原洗液3倍、6倍和12倍加入雙蒸水稀釋后設(shè)為高劑量、中劑量和低劑量，相當(dāng)于人臨床用藥的2、1、0.5倍濃度；新潔爾滅，江西南昌白云制藥廠，批號(hào)：20100401。角叉菜膠混懸液和0.5%醋酸等由南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室提供。100%二甲苯由北京五二九五二化工廠提供，批號(hào)20090828。

1.3抗炎實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1痔寧洗液對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響取SD大鼠40只，隨機(jī)分為5組，每組8只：(1)對(duì)照組；(2)新潔爾滅組(作為陽(yáng)性對(duì)照組)；(3)痔寧洗液低劑量組；(4)痔寧洗液中劑量組；(5)痔寧洗液高劑量組。分別將各組大鼠背部脊柱兩側(cè)毛脫去，大小5 cm×8 cm。各給藥組分別給予相應(yīng)涂抹，以藥液不滴下為度，1次/d，連續(xù)3 d，對(duì)照組涂以雙蒸水。于最后1 d給藥20 min后，采用容積法測(cè)量各組大鼠左后足跖正常容積。然后分別在大鼠左后足跖掌腱膜下注射1%角叉菜膠混懸液0.1 ml/只致炎，注射結(jié)束后立即在左后足涂以上述藥物，隨后每隔1 h測(cè)1次左后足跖容積，連續(xù)6次，24 h后再測(cè)1次左后足跖容積。按以下公式計(jì)算足跖腫脹率(%)：致炎后足跖容積-致炎前足跖容積)/致炎前足跖容積×100%。

1.3.2痔寧洗液對(duì)二甲苯所致小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性增高的影響取C57BL/6J小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只：(1)對(duì)照組；(2)新潔爾滅組(作為陽(yáng)性對(duì)照組)；(3)痔寧洗液低劑量組；(4)痔寧洗液中劑量組；(5)痔寧洗液高劑量組。分別將各組小鼠腹部正中部位去毛，大小3.3 cm×3.3 cm。各給藥組分別給予相應(yīng)涂抹，以藥液不滴下為度，1次/d，連續(xù)3 d，對(duì)照組涂以雙蒸水。于末次涂藥1 h后自尾靜脈注入0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.1 ml/10 g體重，隨即于小鼠腹部正中部位去毛皮膚上滴二甲苯0.3 ml/只，20 min后小鼠頸椎脫臼處死，剝下腹部皮膚，翻轉(zhuǎn)貼于白色搪瓷盤上，根據(jù)各藍(lán)斑色澤深淺將其分為7～10個(gè)級(jí)別，1個(gè)級(jí)別記1分，評(píng)定皮膚藍(lán)色斑塊深淺后，每塊藍(lán)斑皮膚稱重，用手術(shù)剪剪碎投入有塞玻璃試管內(nèi)，加入丙酮-硫酸鈉提取液10 ml，置暗處放置，每日輕輕搖動(dòng)2～3次，3 d后2 000 r/min離心10 min，取上清液于590 nm測(cè)定光密度。最后得到每mg藍(lán)斑皮膚中染料含量。

1.4鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1扭體法[1]取C57BL/6J小鼠100只，隨機(jī)分為5組，每組20只。分組和給藥同1.3.2。于末次涂藥30 min后，每只小鼠腹腔注射0.5%醋酸溶液0.25 ml致痛。記錄注射致痛物質(zhì)后15 min內(nèi)各小鼠的扭體次數(shù)(扭體反應(yīng)的典型表現(xiàn)為腹部?jī)?nèi)凹，軀干與后肢伸展，臀部高起。如此1次記作1次扭體)。實(shí)驗(yàn)控溫為(20±1)℃。扭體反應(yīng)抑制率(%)=(對(duì)照組扭體均數(shù)-藥物組扭體均數(shù))/對(duì)照組扭體均數(shù)×100%。

1.4.2熱板法[2-3]取雌性C57BL/6J小鼠若干。將電熱套的溫度調(diào)至55 ℃。預(yù)熱10 min后將小鼠逐一放入電熱套內(nèi)，上蓋一鐵籠。以小鼠受熱后出現(xiàn)舔后足行為所需時(shí)間(s)為痛閾值。30 s之內(nèi)仍沒有舔后足者棄之不用。篩選出合格小鼠50只(10 s<痛閾值<30 s)，再測(cè)1次每只小鼠的痛閾值，作為小鼠給藥前的痛閾值。將小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分組方法同1.3.2。于小鼠后足分別涂抹上述受試物，1次/d，連續(xù)3 d。于末次給藥后0.5、1、2 h記錄小鼠投入熱板至出現(xiàn)舔后足的時(shí)間(s)作為痛閾值[4-5]。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用方差分析和SNK檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1抗炎實(shí)驗(yàn)

2.1.1痔寧洗液對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響痔寧洗液高、中劑量組致炎2 h、3 h、4 h、5 h、6 h后足跖腫脹率均顯著低于溶劑對(duì)照組和新潔爾滅組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。痔寧洗液高劑量組致炎2 h、3 h、4 h、5 h、6 h后足跖腫脹率顯著低于痔寧洗液中、低劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。新潔爾滅組各指標(biāo)與溶劑對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　痔寧洗液對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響±s)

注：與溶劑對(duì)照組比較，1)P<0.05，2)P<0.01；與新潔爾滅組比較，3)P<0.05，4)P<0.01；與痔寧洗液高劑量組比較，5)P<0.05

2.1.2痔寧洗液對(duì)二甲苯所致小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性增高的影響痔寧洗液各劑量組藍(lán)斑色澤深淺、藍(lán)斑染料量數(shù)值均明顯低于溶劑對(duì)照組和新潔爾滅組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；痔寧洗液低劑量組藍(lán)斑色澤深淺、藍(lán)斑染料量數(shù)值均明顯高于痔寧洗液中劑量組和高劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。新潔爾滅組各指標(biāo)與溶劑對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2　痔寧洗液對(duì)二甲苯所致小鼠腹部皮膚

注：與溶劑對(duì)照組比較，1)P<0.05，2)P<0.01；與新潔爾滅組比較，3)P<0.05，4)P<0.01；與痔寧洗液高、中劑量組比較，5)P<0.05

2.2鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

2.2.1痔寧洗液對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響醋酸致痛后，各組小鼠均出現(xiàn)扭體反應(yīng)。痔寧洗液各劑量組扭體次數(shù)明顯低于溶劑對(duì)照組和新潔爾滅組，抑制率均明顯高于溶劑對(duì)照組和新潔爾滅組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；痔寧洗液低劑量組體次數(shù)明顯高于其他痔寧洗液劑量組，抑制率明顯低于其他痔寧洗液劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。新潔爾滅組各指標(biāo)與溶劑對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3　痔寧洗液對(duì)醋酸致痛小鼠扭體反應(yīng)的影響±s)

注：與溶劑對(duì)照組比較，1)P<0.05，2)P<0.01；與新潔爾滅組比較，3)P<0.05，4)P<0.01；與痔寧洗液高、中劑量組比較，5)P<0.05

2.2.2痔寧洗液對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響痔寧洗液各劑量組給藥后不同時(shí)間痛閾值均顯著高于溶劑對(duì)照組、新潔爾滅組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；痔寧洗液低劑量組給藥后不同時(shí)間痛閾值均顯著低于其他痔寧洗液劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。新潔爾滅組各指標(biāo)與溶劑對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。痔寧洗液高劑量組、痔寧洗液中劑量組給藥后不同時(shí)間痛閾值均顯著高于給藥前，痔寧洗液低劑量組給藥后0.5 h、1 h痛閾值均顯著高于給藥前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表4。

表4　痔寧洗液對(duì)小鼠痛閾值的影響±s)

注：與溶劑對(duì)照組比較，1)P<0.05，2)P<0.01；與新潔爾滅組比較，3)P<0.05，4)P<0.01；與痔寧洗液低劑量組比較，5)P<0.05，6)P<0.01；與給藥前比較，7)P<0.05，8)P<0.01

3討論

本實(shí)驗(yàn)采用致炎物角叉菜膠和二甲苯，分別造成大鼠足跖腫脹和皮膚毛細(xì)血管擴(kuò)張等非特異性炎癥模型；采用扭體法和熱板法，分別造成醋酸和熱刺激誘導(dǎo)的疼痛模型，利用痔寧洗液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性治療并觀察療效。本研究結(jié)果顯示給予大鼠左后足跖皮下注射角叉菜膠后，可誘發(fā)顯著的炎癥腫脹反應(yīng)，此腫脹反應(yīng)在致炎5 h左右達(dá)到高峰；新潔爾滅無(wú)明顯的抗炎癥腫脹作用，而痔寧洗液各劑量涂抹對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹具有明顯的抑制作用，作用持續(xù)達(dá)6 h以上，24 h后仍有一定程度的抗炎作用，可知痔寧洗液對(duì)角叉菜膠導(dǎo)致大鼠足跖腫脹有明顯抑制作用。小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)結(jié)果顯示：痔寧洗液各劑量組數(shù)值均明顯低于對(duì)照組，可知痔寧洗液能顯著抑制二甲苯滴于小鼠腹部皮膚引起的毛細(xì)血管通透性的增高，但是不同劑量作用效果不同，痔寧洗液低劑量組藍(lán)斑色澤深淺、藍(lán)斑染料量數(shù)值均明顯高于痔寧洗液中劑量組和高劑量組，提示血管通透性存在劑量依賴性。

本研究發(fā)現(xiàn)，在扭體次數(shù)、抑制率方面，痔寧洗液各劑量組與溶劑對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明痔寧洗液能明顯減少醋酸致痛小鼠的扭體次數(shù)，提高抑制率；同時(shí)，研究還發(fā)現(xiàn)痔寧洗液各劑量組給藥后不同時(shí)間痛閾值與溶劑對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，痔寧洗液各劑量組給藥前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從最后一次給藥后0.5 h開始，鎮(zhèn)痛作用加強(qiáng)，且隨時(shí)間的延長(zhǎng)效果更加顯著，但是作用2 h后，鎮(zhèn)痛效果開始不再明顯；由此可見，痔寧洗液能明顯延長(zhǎng)由熱刺激引起的小鼠的痛反應(yīng)時(shí)間，對(duì)由熱刺激而導(dǎo)致的小鼠疼痛有明顯的抑制作用，表明對(duì)小鼠有鎮(zhèn)痛作用，可明顯減少醋酸致痛小鼠扭體次數(shù)和延長(zhǎng)由熱刺激而引起的小鼠痛反應(yīng)時(shí)間。

痔寧洗液方劑組成為魚腥草、苦參、大黃、黃柏、蒲公英等，其中魚腥草具有清熱解毒的作用，苦參具有燥濕止癢，生肌斂瘡之效，大黃、黃柏清熱祛濕，利水滲濕效果較好，蒲公英可祛瘀止痛，諸藥合用可清熱解毒、祛濕消腫、止痛化瘀效果良好[6-8]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)魚腥草、苦參、大黃、黃柏、蒲公英等藥物組方水浸液具有止痛、鎮(zhèn)痛、抗炎消腫、抑制血管通透性增加、促進(jìn)血液循環(huán)等作用[9]。此外，大黃、黃柏水浸液具有抑制金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌及支原體等致病菌效果，同時(shí)可減輕局部炎性反應(yīng)，促進(jìn)水腫消退，抗炎效果較好[10]。本研究結(jié)果也提示痔寧洗液方劑存在較好的鎮(zhèn)痛、抗炎效果，且痔寧洗液不同劑量組抗炎作用均優(yōu)于溶劑對(duì)照組及新潔爾滅組，并呈劑量依賴性，提示痔寧洗液高、中劑量療效相對(duì)較好。

綜上所述，痔寧洗液具有明顯的抗炎作用和鎮(zhèn)痛作用，并呈相應(yīng)的劑量依賴性。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：134-211.

[2]趙嘵風(fēng).速效戒毒液對(duì)小鼠熱刺激與化學(xué)性刺激的影響[J].中國(guó)藥師，2005，8(11)：969-970.

[3]趙萬(wàn)紅，曹永存，劉靜，等.白川膠囊的鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26(1)：19.

[4]H.G.沃格爾.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)指南--新藥發(fā)現(xiàn)和藥理學(xué)評(píng)價(jià)[M].杜冠華，李學(xué)軍，張定祥，譯.北京：科學(xué)出版社，2004：668.

[5]鄭衛(wèi)紅，錢京萍.烏紅天麻種麻對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2005，22(4)：9-10.

[6]鐘喜光,鄧曼靜.浴舒洗液抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2008,14(7):103,106.

[7]彭慶海,劉艷芳.中藥痔外洗劑抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2011,5(7):97-98.

[8]周青.“痔瘺熏洗劑”及水溶性軟膏劑“痔瘺凝膠劑”基礎(chǔ)研究[D].南京:南京中醫(yī)藥大學(xué),2012：25.

[9]吳雙.鄭氏一號(hào)熏洗藥對(duì)大鼠軟組織損傷IL-1β、PGE2影響的研究[D].成都:成都體育學(xué)院,2012：30.

[10]汪倪萍,魏偉.中藥活性成分的抗炎免疫和鎮(zhèn)痛作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2003,19(4):366-370.

(文敏編輯)

Experimental Study on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Hemorrhoids Lotion

LIU Xiaomei,GU Yunfei*

(Department of Anorectology,Rugao TCM Hospital,Nanjing University of Chinese Medicine,Rugao 226500,China)

[Abstract]Objective:To investigate the anti-inflammatory and analgesic effect of hemorrhoids lotion.Methods:Inflammation model (carrageenin-induced paw swelling in rat and increased capillary permeability induced by xylene in mice) and pain model (writhing test and hot plate model) were established.The model groups were randomly divided into 5 groups (solvent control group,the new clean Er destroy group,hemorrhoid lotion low dose group,hemorrhoid lotion middle dose group,hemorrhoid lotion high dose group).The paw swelling rate in rats and color of blue spot and content after xylene stained were determined at different points.The times and incidence rate of writhing were calculated and pain threshold was determined at different points.Results:The anti-inflammatory and analgesic effect of hemorrhoids lotion in different dose groups were better than that in the solvent control group and new clean Er destroy group(P< 0.05).There were significant differences in the analgesic and anti-inflammatory effects of hemorrhoids lotion in different dose groups in dose-dependent manner.Conclusion:Hemorrhoids lotion has good anti-inflammatory and analgesic effects.

[Key words]hemorrhoids lotion; anti-inflammation; analgesia

[收稿日期]2015-11-30

doi:10.16753/j.cnki.1008-2344.2016.02.004

[中圖分類號(hào)]R285.5

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1008-2344(2016)02-0074-04

[通訊作者]谷云飛(1960—)，男(漢)，主任醫(yī)師，副教授．研究方向：肛腸常見疾病的診治及疑難雜癥的處理．E-mail：guyunfei127@126.com