荷花腐敗病防治藥劑室內篩選及田間藥效試驗

夏玲 曾莉莎 呂順 周建坤 鄭志波 麥進培 鄧志平

摘要：【目的】篩選可有效控制荷花腐敗病的化學藥劑，為病害防控提供參考?！痉椒ā窟x用34種化學藥劑，以荷花腐敗病菌株Hhgw-2-3為供試接種體，進行室內平板抑菌試驗和土壤抑菌試驗，并從中選取4種室內抑菌效果較好的化學藥劑開展田間藥效試驗。【結果】平板抑菌試驗結果表明，硫磺·多菌靈、丙環(huán)唑、福美雙、苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、惡霉靈、乙蒜素和氟硅唑等對荷花腐敗病菌抑菌效果明顯，抑菌率達80.00%～100.00%。土壤抑菌試驗結果表明，氟硅唑、蓮藕腐敗靈、丙環(huán)唑、惡霉靈、咪鮮胺、福美雙、生石灰+硫磺（60+3）、菌毒清、硫磺·多菌靈、百菌清和生石灰+碳酸氫銨（2+1）對荷花腐敗病菌的抑菌效果較好，抑菌率在80.00%以上。田間藥效試驗結果表明，供試4種藥劑惡霉靈、硫磺·多菌靈、咪鮮胺和菌毒清對荷花腐敗病均有一定的防效，相對防效為11.15%～39.38%，其中以硫磺·多菌靈的效果最好，對荷花腐敗病的相對防效為39.38%?！窘Y論】硫磺·多菌靈對荷花腐敗病的田間防效較好，且用藥成本低，可在荷花病區(qū)大面積推廣應用。

關鍵詞： 荷花；腐敗病；藥效試驗；防治效果

中圖分類號： S436.8 文獻標志碼：A 文章編號：2095-1191（2016）07-1129-06

0 引言

【研究意義】我國栽培荷花歷史悠久，是世界荷花栽培中心。荷花腐敗病是荷花種植區(qū)發(fā)生最普遍、為害嚴重的病害之一， 其病原屬為Fusarium commune，在荷花生長期和蓮藕貯藏期均可發(fā)病。荷花腐敗病屬土傳病害，病菌常造成藕鞭、藕節(jié)、藕根腐爛，同時地上部分的葉、花也會萎蔫黃枯，發(fā)病嚴重的整株枯死（谷慧珍和張河清，2006）。因此，荷花腐敗病能否得到有效控制，已成為荷花栽培及荷花產業(yè)持續(xù)發(fā)展急需解決的重大問題。【前人研究進展】近年來，國內許多學者對蓮腐敗的發(fā)生規(guī)律及病害藥劑防治進行了研究，并篩選出多種化學藥劑。何可佳等（1997）報道，在蓮藕移栽前用70%甲基托布津1000倍液浸種藕和用“961”蓋種劑蓋種藕對蓮藕腐敗病有很好的防治效果；在蓮田翻耕時，用石灰1500 kg/ha（100 kg/667 m2）也有一定的防治效果。張夕林和楊慕林（2006）認為種藕和土壤帶菌是蓮藕發(fā)生腐敗病的主要原因，夏季氣溫高、雨水少、藕田灌水少、使用未腐熟的有機肥及連作田發(fā)病重；糧果豐、甲基托布津等藥劑處理蓮藕悶種后再栽種，或葉面噴霧對蓮藕腐敗病均有較好的防治效果，其防效可達70%～80%；糧果豐、甲基托布津、百菌清、多菌靈等藥劑的防效可達75%～80%。陳傳聰等（2008）選用凱潤等殺菌劑對蓮腐敗病進行田間防效試驗，結果表明，25%凱潤乳油2000倍液、30%愛苗乳油2500倍液、25%丙環(huán)唑乳油1500倍液和50%苯菌靈可濕性粉劑1000倍液對蓮腐敗病有較好的防治效果。葛有茂和趙士熙（2009）通過不同施藥方法對蓮腐敗病防效的比較研究發(fā)現，采用靶向施藥方式針劑注射法對蓮腐敗病有良好的防效?！颈狙芯壳腥朦c】由于荷花葉片結構特殊，葉上表層有蠟質，一般農藥噴施不易被吸收，選擇有效的農藥和適當劑型，并采用適宜的施藥方法和技術，才能提高防治效果?！緮M解決的關鍵問題】選取34種化學藥劑進行室內平板抑菌試驗及土壤抑菌試驗，并選用4種室內抑菌效果較好、用藥成本低的藥劑進行田間藥效試驗，以期篩選出安全、高效的適用藥劑，為防治荷花腐敗病提供科學依據。

1 材料與方法

1. 1 供試材料

基于前期的致病力測定試驗，選用致病力較強的荷花腐敗病菌株Hhgw-2-3（由東莞市香蕉蔬菜研究所分子實驗室分離鑒定）作為供試接種體。

供試藥劑共34種，包括殺菌劑、食品防腐劑、土壤消毒劑和復合藥劑等，另有3個組合藥劑：生石灰+硫磺（60+3）、生石灰+碳酸氫銨（2+1）、茶麩+氯溴異氰尿酸（500+1），分別縮寫為CaS、CaNH和TCl。其中32種原廠供試藥劑的有效成分名稱及其生產廠家見表1。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 菌液的準備 Hhgw-2-3接種于馬鈴薯乳糖產孢子培養(yǎng)液中（馬鈴薯200 g、乳糖20 g、水1000 mL，121 ℃高溫滅菌20 min），在25 ℃、150 r/min條件下振蕩培養(yǎng)5～7 d后，用無菌水配成濃度為106個/mL的病原菌孢子懸浮液，備用。

1. 2. 2 平板抑菌試驗 采用生長速率法對藥劑毒力進行測定。依據預試驗結果，用無菌水將供試藥劑調配成適宜濃度的母液，再將供試藥劑用巴氏消毒法滅菌（62 ℃水浴加熱30 min），調配成相對應的濃度，取2 mL藥液與18 mL融化的PDA混勻，靜置冷卻成平板。

將供試菌株Hhgw-2-3在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5～6 d后，用直徑7.0 mm的滅菌打孔器取菌餅。將菌絲片接種在含有相應濃度藥劑的PDA培養(yǎng)基上，設空白滅菌培養(yǎng)基為對照，每處理重復3次。28 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 d后，用十字交叉法測量菌落直徑。以菌落直徑或半徑長短平均值計算菌絲生長抑制率。

純生長量=菌落平均直徑-菌餅直徑

抑菌率（%）=（對照純生長量-處理菌落純生長量）/對照純生長量×100

1. 2. 3 土壤抑菌試驗 為了模擬荷花田間生長環(huán)境，選用容量50 L大塑料桶作為試驗容器。將300 mL Hhgw-2-3孢子懸浮液（約106個/mL）與約20 kg土攪拌混勻制成病土，加入30 L無菌水，倒入大塑料桶中，保持桶中土壤深度35 cm，土壤覆水深度10～20 cm。供試藥劑共34種（表3），每種藥劑處理1桶病土，使供試藥劑稀釋1000倍，設3個重復，室溫下密封放置14 d后，取各種藥劑處理中土壤深度為20～30 cm的土樣各50 g，分別加入50 mL無菌水混勻，并進行10倍梯度稀釋，取1 mL的103倍稀釋液均勻涂布于K2培養(yǎng)基上（Komada改良培養(yǎng)基）（Komada， 1975；Sun et al.， 1978；Smith et al.， 2008），每個稀釋液涂布3個培養(yǎng)基，于28 ℃培養(yǎng)3 d，計數菌落形成單位（CFU/g）。根據菌落形成單位計算各供試藥劑在土壤中的抑菌率。

1. 2. 4 田間藥效試驗 根據前期平板抑菌試驗和土壤抑菌試驗結果，選取4個室內抑菌效果較好的藥劑進行田間小區(qū)試驗。

選用一塊荷花腐敗病重病田作為試驗區(qū)（連續(xù)3年荷花腐敗病發(fā)病率在50.00%以上），試驗點位于廣東省東莞市橋頭蓮湖公園。設5個處理，每處理面積約25 m×25 m=625 m2，每處理3個重復。前期土壤統(tǒng)一用生石灰+碳酸氫氨進行處理。處理1：70%惡霉靈WP，2250 g/ha；處理2：1 mg/L硫磺·多菌靈AS，34.5 L/ha；處理3：85%菌毒清AS，3000 g/ha；處理4：25%咪鮮胺ME，15000 mL/ha；處理5：空白對照，不作任何藥劑處理（CK）。以上處理從荷花出現浮葉開始施藥，之后根據天氣情況每隔10～15 d噴藥1次，共用藥3次。

在對照處理荷花出現萎蔫后開始調查，每隔10 d調查1次發(fā)病株數，至荷花腐敗病病情不再發(fā)展為止，共調查3次。按病株率和防效計算田間試驗結果。

發(fā)病率（%）=發(fā)病株數/調查總株數×100

防效（%）=（對照發(fā)病率-處理發(fā)病率）/對照發(fā)病率×100

1. 3 統(tǒng)計分析

試驗數據采用SPSS 19.0進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2. 1 平板抑菌試驗結果

不同藥劑對病原菌菌絲生長的抑制效果存在明顯差別，結果見圖1和表2。供試藥劑中對Hhgw-2-3菌絲生長抑制效果較好的藥劑有：硫磺·多菌靈、丙環(huán)唑、福美雙、苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、惡霉靈、乙蒜素和氟硅唑等8種，8種藥劑在設計濃度水平下的抑菌率均達80.00%以上；抑菌率在60.00%以上的藥劑還有：菌毒清、肉桂醛、脫氫乙酸鈉、百菌清、CaS、棉隆、草莓酸、異菌脲、嘧菌酯和CaNH等；而抑菌效果差，甚至沒有抑菌效果的藥劑有7種，分別為多菌靈、氯溴異氰尿酸、溴氯海因、氯化苦、TCL、過氧乙酸和二氧化氯，7種藥劑在最大濃度下抑菌率小于20.00%；其余藥劑對病原菌有一定的抑菌作用。

2. 2 土壤抑菌試驗結果

不同供試藥劑對土壤中的病原菌抑菌效果存在明顯差異。由表3可知，供試34種藥劑中對病原菌抑菌率達80.00%以上的有：氟硅唑、蓮藕腐敗靈、丙環(huán)唑、惡霉靈、咪鮮胺、福美雙、CaNH、菌毒清、硫磺·多菌靈、百菌清、CaS；抑菌效果較差或沒有抑菌效果的藥劑（抑菌率低于20.00%）有：氯化苦、石灰氮、敵克松、嘧菌酯和生石灰等。

2. 3 不同藥劑對荷花腐敗病的田間防治效果

根據平板抑菌試驗和土壤抑菌試驗結果，選取惡霉靈、硫磺·多菌靈、菌毒清和咪鮮胺4個抑菌效果較好、用藥成本低、適合大面積推廣的藥劑進行田間試驗，結果見表4。由表4可知，4種藥劑對荷花腐敗病均有一定的防效，相對防效為11.15%～39.38%，且不同藥劑間的相對防效差異顯著（P<0.05），其中，硫磺·多菌靈處理的荷花腐敗病發(fā)病率最低，為28.34%，相對防效為39.38%，其次是施用菌毒清處理，荷花腐敗病發(fā)病率為35.68%，相對防效為23.68%，惡霉靈和咪鮮胺的防效較差。

3 討論

荷花腐敗病是一種典型的土傳病害，病原菌以菌絲在種藕和土壤中越冬，次年5月中旬～6月初遇適宜條件先從蓮藕植株根部侵染，逐漸擴散至地下莖及全株，以水流和種藕調運的形式傳播，病菌常造成藕鞭、藕節(jié)、藕根腐爛，同時地上部分的葉、花也會萎蔫黃枯，發(fā)病嚴重的整株枯死（谷慧珍和張河清，2006）。目前，能有效防治荷花腐敗病的化學藥劑較少且使用混亂，篩選有效防治荷花腐敗病的化學藥劑及研究其施藥方法意義重大。

唑類殺菌劑的穩(wěn)定性較高，對作物多種病原菌具有高效、內吸、廣譜的作用（姚金剛，2013）。本研究在PDA平板抑菌試驗中，以丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、惡霉靈等為唑類殺菌劑代表，對荷花腐敗病菌有明顯的抑制效果，抑菌率達80.00%以上；在土壤抑菌試驗中同樣表現良好的抑菌效果，丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑和惡霉靈的抑菌率分別為93.18%、72.52%和97.07%，表明唑類殺菌劑對荷花腐敗病菌具有良好的抑制效果。

在PDA平板抑菌試驗中，氯溴異氰尿酸、溴氯海因和二氧化氯等氯溴類殺菌劑對荷花腐敗病菌的抑菌效果較差，對土壤中的病菌抑菌效果也不明顯，可見氯溴類藥劑不適合用于防治荷花腐敗病。以多菌靈和乙酸銅等為代表的廣譜保護性殺菌劑對荷花腐敗病菌的抑制效果也較差，有些藥劑甚至沒有效果。

在平板抑菌試驗和土壤抑菌試驗的基礎上選取4種藥劑進行了田間試驗，結果顯示，惡霉靈、硫磺·多菌靈、咪鮮胺和菌毒清對荷花腐敗病均有一定的效果，但與室內試驗結果相比效果欠佳，其原因可能與施藥方法、藥劑劑型、試驗田地選擇和當年的氣候條件等因素有關，其確切原因有待繼續(xù)開展小區(qū)試驗來求證。

在荷花腐敗病防治中，由于荷花葉片結構特殊，一般農藥噴施不易被吸收，選擇有效的農藥及適當劑型的基礎上，采用適宜的施藥方法和技術，才能保證安全用藥，提高防治效果。在荷花腐敗病防治中，還應跟蹤氣候情況，如氣溫、日照時長、降水等，查清田間既往病史和種藕的來源（曾璐，2013），從而進一步了解不同因素對病害發(fā)生的影響，完善荷花腐敗病防治技術，達到有效防控的目的。

由于本研究大部分藥劑僅在室內開展試驗，要使藥劑在生產上大面積應用，還需進一步開展田間試驗示范，以便為農戶提供更為可靠的荷花腐敗病化學防治方法。

4 結論

本研究結果表明，硫磺·多菌靈、丙環(huán)唑、福美雙、咪鮮胺、惡霉靈和氟硅唑等6種藥劑對荷花腐敗病菌有較好的室內抑制效果，對病原菌的抑制率均達80.00%以上，且藥效穩(wěn)定，具有一定的應用潛力，其中，硫磺·多菌靈的田間防效較好，用藥成本低，可在荷花病區(qū)大面積推廣應用；氟硅唑、蓮藕腐敗靈、丙環(huán)唑、惡霉靈、咪鮮胺、福美雙、生石灰+碳酸氫銨（2+1）、菌毒清、硫磺·多菌靈、百菌清和生石灰+硫磺（60+3）等11種藥劑具有較好的土壤抑菌效果，可用于病區(qū)的土壤消毒。

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（責任編輯 麻小燕）