吳小建 吳圣進(jìn) 汪茜 韋仕巖 王燦琴
摘要:【目的】對(duì)一株從木薯渣堆中分離得到的產(chǎn)木聚糖酶嗜熱真菌JG-50菌株進(jìn)行分類鑒定,并研究其利用木薯渣固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶的最佳條件,為該菌株在農(nóng)業(yè)有機(jī)廢棄物發(fā)酵利用中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。【方法】采用真菌形態(tài)學(xué)觀察和26S rDNA基因D1/D2區(qū)序列同源性分析方法對(duì)JG-50菌株進(jìn)行分類鑒定,并以單因素試驗(yàn)方法對(duì)JG-50菌株產(chǎn)木聚糖酶的最佳碳源、氮源、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基初始pH等發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化?!窘Y(jié)果】菌株JG-50與嗜熱子囊菌(Thermoascus aurantiacus isolate MTCC 4890)的26S rDNA序列相似性為99%,結(jié)合形態(tài)學(xué)特征初步鑒定為嗜熱子囊菌屬的一種。該菌株能以木薯渣為碳源固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶,其產(chǎn)酶的最佳條件為:以木薯渣為碳源,添加60%麥麩,0.3%蛋白胨和0.2%酵母粉,pH 6.0,以此培養(yǎng)基50 ℃培養(yǎng)8 d,木聚糖酶活可達(dá)4625.4 U/g(干培養(yǎng)基)。【結(jié)論】嗜熱真菌JG-50具有較強(qiáng)的產(chǎn)木聚糖酶能力,在農(nóng)業(yè)有機(jī)廢棄物發(fā)酵利用領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。
關(guān)鍵詞: 嗜熱子囊菌;分類鑒定;木聚糖酶;木薯渣
中圖分類號(hào): Q939.96 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號(hào):2095-1191(2016)09-1522-06
Abstract:【Objective】A xylanase-producing thermophilic fungi strain JG-50 isolated from cassava residue was classified and identified, and its fermentation conditions for enzyme production was optimized, in order to provide technical support for its application in agricultural organic waste fermentation utilization. 【Method】Strain JG-50 was identified based on morphologic observation and sequence homology analysis of D1/D2 domain of 26S rDNA gene. The fermentation conditions including carbon source, nitrogen source, culture time, culture temperature and initial pH were optimized by single factor test, for producing xylanase by strain JG-50. 【Result】26S rDNA sequences similarity was as high as 99% between strain JG-50 and Thermoascus aurantiacus isolate MTCC 4890. Based on morphological observation and data of 26S rDNA sequences alignment, the strain JG-50 was identified as T. aurantiacus. Strain JG-50 was able to produce xylanase during solid state fermentation using cassava residue as carbon resource, and the optimal fermentation substrate were, 60% of wheat bran, 0.3% of peptone and 0.2% yeast powder, with pH of 6.0. In the above substrate, the enzyme activity of xylanase reached 4625. 4 U/g after fermenting for 8 days at 50 ℃. 【Conclusion】Strain JG-50 has a considerable ability of producing xylanase, and shows good application prospect on fermentation utilization of agricultural organic waste.
Key words: Thermoascus aurantiacus; classification and identification; xylanase; cassava residue
0 引言
【研究意義】半纖維素是農(nóng)作物秸稈等植物材料的重要組成成分,其含量?jī)H次于纖維素,而木聚糖是植物半纖維素的主要成分。木聚糖酶是一類可以將木聚糖降解成低聚糖和木糖的水解酶,主要包括內(nèi)切β-1,4-木聚糖酶(β-D-1,4-xylanase, EC 3.2.1.8)、外切β-1,4-木聚糖酶(β-D-1,4-xylanase, EC 3.2.1.92)和β-木糖苷酶(β-1,4-xylosidase, EC 3.2.1.37)。內(nèi)切β-1,4-木聚糖酶是木聚糖降解酶中最關(guān)鍵的酶,其以內(nèi)切方式水解木聚糖分子中β-1,4-木糖苷鍵,水解產(chǎn)物主要為不同聚合度的木寡糖和少量木糖(Collins et al.,2005)。木聚糖酶對(duì)半纖維素物質(zhì)的降解對(duì)于秸稈資源的利用具有重要意義,已被廣泛應(yīng)用于生物轉(zhuǎn)化、食品、飼料、醫(yī)藥、能源和造紙等行業(yè)(Collins et al.,2005;包怡紅和李雪龍,2006;Nortey et al., 2007)。但木聚糖酶應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)中多數(shù)需要具備嗜熱或嗜堿的特性,至今為止,關(guān)于嗜熱嗜堿特性的木聚糖酶僅有10余種(柏文琴等,2014),與已經(jīng)分離到的數(shù)百個(gè)木聚糖酶資源相比,嗜熱嗜堿木聚糖酶的數(shù)量非常有限。生產(chǎn)應(yīng)用酶制劑除了考慮酶活性及表達(dá)量外,還需根據(jù)不同的應(yīng)用條件考慮其穩(wěn)定性(包怡紅和李雪龍,2006),因此,分離選育適應(yīng)能力強(qiáng)和產(chǎn)酶能力高的微生物菌株仍是木聚糖酶生產(chǎn)應(yīng)用的關(guān)鍵。同時(shí),利用廉價(jià)的農(nóng)業(yè)廢棄物如秸稈、玉米芯、蔗渣和麩皮等誘導(dǎo)生產(chǎn)木聚糖酶能有效降低酶制劑的生產(chǎn)成本(李秀婷等,2004),也是木聚糖酶生產(chǎn)利用的主要發(fā)展方向之一?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】木聚糖酶廣泛存在于細(xì)菌、霉菌和酵母菌等微生物中(萬(wàn)紅貴等,2001),其中霉菌如嗜熱棉毛菌、木霉、曲霉和青霉等因產(chǎn)酶能力強(qiáng)而備受關(guān)注(宋紅霞等,2011)。目前研究較多的是木霉、曲霉和細(xì)菌所產(chǎn)生的木聚糖酶,不同來(lái)源的木聚糖酶其酶學(xué)性質(zhì)也有所差異(Wong et al.,1988),工業(yè)生產(chǎn)中多數(shù)需要具備耐熱、耐酸堿特性的木聚糖酶,因此,有不少科研工作者從土壤、酸堿等極端環(huán)境中篩選產(chǎn)木聚糖酶的菌株,以期獲得具有相應(yīng)特性的木聚糖酶。龐宗文等(2012)從土壤中分離到一株高產(chǎn)木聚糖酶的嗜熱子囊菌,其最佳產(chǎn)酶條件為:玉米芯∶麩皮=7∶3(w/w);最佳氮源為酵母膏和胰蛋白胨的混合氮源,添加量1.5%;吐溫-80添加量0.5%,初始pH 7.2,培養(yǎng)基水含量80%,250 mL三角瓶裝料量8 g,發(fā)酵溫度50 ℃,發(fā)酵時(shí)間72 h;該酶最適溫度為75 ℃,最適pH 4.5,在70 ℃以下具有良好的穩(wěn)定性。單志瓊等(2012)從鹽堿湖土壤中篩選到25株產(chǎn)堿性木聚糖酶菌株,所產(chǎn)木聚糖酶具有較好的熱穩(wěn)定性和堿穩(wěn)定性。目前,利用農(nóng)業(yè)廢棄物產(chǎn)木聚糖酶的報(bào)道較多,常見的麩皮、麥稈、玉米芯、稻稈、稻殼、高粱稈、甘蔗渣等均可誘導(dǎo)生產(chǎn)木聚糖酶(吳萍和姚伍,2006;叢倩千等,2009),利用此類農(nóng)業(yè)廢棄物作誘導(dǎo)底物能有效降低生產(chǎn)成本,產(chǎn)生的木聚糖酶也適合于工業(yè)應(yīng)用。【本研究切入點(diǎn)】廣西是我國(guó)第一大木薯生產(chǎn)省份,木薯生產(chǎn)加工產(chǎn)生大量的木薯渣。目前對(duì)木薯渣的再利用主要有制作肥料、飼料,栽培食用菌,制沼氣等(劉倩等,2012),利用木薯渣發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶的研究報(bào)道較少。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】采用真菌經(jīng)典形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)鑒定技術(shù),對(duì)一株從廢棄木薯渣堆中分離獲得的產(chǎn)木聚糖酶的嗜熱真菌JG-50進(jìn)行分類鑒定,并進(jìn)一步采用單因素試驗(yàn)研究其利用木薯渣為碳源生產(chǎn)木聚糖酶的適宜條件,旨在獲得能利用木薯渣等農(nóng)業(yè)有機(jī)廢棄物發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶的優(yōu)良菌株,為該菌株在農(nóng)業(yè)有機(jī)廢棄物發(fā)酵中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1 材料與方法
1. 1 試驗(yàn)材料
供試菌株JG-50分離自廣西金光農(nóng)場(chǎng)木薯渣堆積物,保存于廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所。樺木木聚糖購(gòu)自Sigma公司,3,5-二硝基水楊酸(DNS)等其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。斜面培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g、蔗糖20 g、瓊脂20 g、水1000 mL,pH為自然值,在121 ℃下滅菌20 min。液體種子培養(yǎng)基(g/L):(NH4)2SO4 1.4、MgSO4·7H2O 0.3、KH2PO4 2.0、CaCl2 0.3、FeSO4·7H2O 0.005、MnSO4·H2O 0.0016、ZnSO4·7H2O 0.0014、CoCl2·7H2O 0.002、酵母提取物1.0、蛋白胨3.0、葡萄糖10.0,pH調(diào)至6.0,在121 ℃下滅菌20 min。固體發(fā)酵培養(yǎng)基:木薯渣,用不含葡萄糖的液體種子培養(yǎng)基調(diào)節(jié)水含量為60%,在121 ℃下滅菌30 min。
1. 2 試驗(yàn)方法
1. 2. 1 菌株培養(yǎng)條件 將目的菌株從斜面接入裝有50 mL種子培養(yǎng)基的250 mL錐形瓶,于50 ℃下160 r/min恒溫培養(yǎng)3 d,再以2%的接種量將菌種接入固體發(fā)酵培養(yǎng)基,于50 ℃恒溫培養(yǎng)7 d。
1. 2. 2 菌株形態(tài)鑒定 參考《真菌鑒定手冊(cè)》(魏景超,1979), 通過(guò)觀察菌落特征,菌絲形態(tài),孢子形態(tài)、大小及產(chǎn)孢類型等對(duì)菌株進(jìn)行經(jīng)典形態(tài)學(xué)鑒定。
1. 2. 3 菌株26S rDNA鑒定 通過(guò)PCR擴(kuò)增真菌基因組26S D1/D2區(qū),其中正向引物26S-F: 5'-GCATATC
AATAAGCGGAGGAAAAG-3',反向引物26S-R: 5'-
GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3'。PCR反應(yīng)體系(100.0 μL):10×擴(kuò)增緩沖液10.0 μL,dNTPs(每種2.5 mmol/L)8.0 μL,引物(10 μL/L)各2.5 μL,Taq DNA聚合酶(2.5 U/μL)1.3 μL,無(wú)菌超純水補(bǔ)足至100.0 μL。擴(kuò)增程序:98 ℃預(yù)變性5 min;95 ℃ 35 s,55 ℃ 35 s,72 ℃ 40 s,進(jìn)行35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸8 min。將擴(kuò)增條帶進(jìn)行膠回收后送至生工生物工程(上海)股分有限公司測(cè)序。測(cè)序后所得序列提交GenBank進(jìn)行BLASTn比對(duì),用ClustalX 1.8進(jìn)行多序列比對(duì)分析,利用MEGA 4.0中的Neighbor-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。
1. 2. 4 發(fā)酵粗酶液制備與部分純化 粗酶液制備:取固態(tài)發(fā)酵好的培養(yǎng)物10 g,加入100 mL蒸餾水,于40 ℃下浸提2 h,過(guò)濾,于4 ℃下5000 r/min離心30 min,上清液即為粗酶液。硫酸銨沉淀:取7支試管,各加入10 mL粗酶液,分別加硫酸銨至飽和度30%、40%、50%、60%、70%、80%和90%,于4 ℃過(guò)夜后10000 r/min離心15 min,棄上清液,沉淀溶于20 mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.0,下同),測(cè)酶活和蛋白含量。粗酶純化:參照硫酸銨沉淀中確定的硫酸銨濃度進(jìn)行分級(jí)沉淀,收集飽和度40%~60%的沉淀,沉淀再用20 mmol/L Tris-HCl緩沖液溶解并置于相同緩沖液4 ℃透析過(guò)夜,凍干備用。
1. 2. 5 酶活性和蛋白測(cè)定 DNS液配制和木糖含量測(cè)定參照Miller(1959)的方法。酶活性測(cè)定參照Bailey等(1992)的方法:取適當(dāng)稀釋的酶液0.5 mL,加入1.5 mL 1%木聚糖溶液,70 ℃恒溫水浴,精確反應(yīng)10 min,立即加入3.0 mL DNS溶液,沸水浴12 min,置于冰上定容至50.0 mL,于490 nm處測(cè)吸光值并參照木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線求得木糖含量,計(jì)算酶活;空白組不經(jīng)過(guò)70 ℃恒溫水浴直接加入DNS溶液反應(yīng)。酶活性單位定義:每分鐘產(chǎn)生1 μmol還原糖(以木糖計(jì))所需的酶量為1個(gè)酶活性單位,以U/mL(g)表示。
酶活性計(jì)算公式:E=nC×1000/MT。式中,E為酶活性(U/mL);n為稀釋倍數(shù);C為木糖含量(g/L);M為木糖分子量(150);T為反應(yīng)時(shí)間(min)。
蛋白測(cè)定:參照考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白含量,標(biāo)準(zhǔn)蛋白為牛血清白蛋白(BSA)。
1. 2. 6 發(fā)酵產(chǎn)酶條件研究 最佳培養(yǎng)時(shí)間的確定:將菌株接入固體發(fā)酵培養(yǎng)基中,于50 ℃培養(yǎng)21 d,每2 d取樣1次,測(cè)定酶活力;初始pH對(duì)產(chǎn)酶的影響:將固體發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH分別調(diào)節(jié)為5.0、5.5、6.0、6.5、7.0和7.5,接種菌株后50 ℃下培養(yǎng)8 d,測(cè)定酶活力;發(fā)酵溫度對(duì)產(chǎn)酶的影響:將菌株接入固體發(fā)酵培養(yǎng)基中后,分別在40、45、50、55和60 ℃下培養(yǎng)8 d,測(cè)定酶活力;可溶性碳源對(duì)產(chǎn)酶的影響:分別以1%蔗糖、乳糖、麥芽糖和可溶性淀粉替代液體種子培養(yǎng)基中的1%葡萄糖,再用這些液體培養(yǎng)基配制固體發(fā)酵培養(yǎng)基,接種菌株后在50 ℃下培養(yǎng)8 d,測(cè)定酶活性;氮源對(duì)產(chǎn)酶的影響:分別以NH4NO3、KNO3、蛋白胨、尿素和牛肉膏替代液體發(fā)酵培養(yǎng)基中的(NH4)2SO4,在50 ℃下培養(yǎng)8 d,測(cè)定酶活力。
2 結(jié)果與分析
2. 1 菌種鑒定
2. 1. 1 形態(tài)學(xué)特征 JG-50菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng),30 ℃以下不生長(zhǎng),50 ℃下菌絲生長(zhǎng)迅速,培養(yǎng)2 d菌落滿皿(直徑90 mm),初期菌落正反面均白色,有叢狀立起的氣生菌絲,高10~16 mm,3 d后菌落表面有白色顆粒狀出現(xiàn),4 d后轉(zhuǎn)為紅褐色,粉狀,輻射狀,圓形,邊緣整齊,5~6 d左右產(chǎn)生黃色或棕色的水珠狀分泌物,后期菌絲均為匍匐狀(圖1-a、圖1-b、圖1-c)。分生孢子梗直立,菌絲無(wú)色,壁光滑,粗細(xì)不等,直徑1.5~12.5 μm(圖1-d、圖1-e);分生孢子著生于菌絲末端,0~2個(gè)隔膜,顏色較菌絲稍深,球形至紡錘形,壁光滑,窄端平截,長(zhǎng)13.0~17.5 μm,寬10.0~15.0 μm。子囊果單生或群生,紅棕色,球形或不規(guī)則形;子囊易消解,亞球形或橢圓形,長(zhǎng)10.0~13.0 μm,寬6.0~8.0 μm,內(nèi)含8個(gè)不規(guī)則排列的子囊孢子;子囊孢子透明,長(zhǎng)5.0~7.0 μm,寬4.0~5.0 μm(圖1-f)。
嗜熱子囊菌屬(Thermoascus)共包括6個(gè)種及變種,其模式菌株T. aurantiacus Miehe由Miehe于1907年從自熱干草中分離并描述,本研究分離獲得的菌株在形態(tài)上與T. aurantiacus相同,因此鑒定為該菌。
2. 1. 2 26S rDNA序列分析結(jié)果 菌株的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖2所示。
菌株JG-50的26S rDNA序列全長(zhǎng)為575 bp,比對(duì)結(jié)果顯示菌株JG-50與嗜熱子囊菌MTCC 4890菌株有99%的相似性。與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中相關(guān)嗜熱真菌菌株的26S rDNA序列進(jìn)行比較,用MEGA 4.0進(jìn)行分析,按Neighbor-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹,結(jié)果如圖3所示。JG-50菌株與Dichotomomyces cejpii菌株相距最遠(yuǎn),與Byssochlamys verrucosa和Thermoascus aurantiacus isolate MTCC 4890遺傳距離最近,但Bysso-
chlamys verrucosa 屬耐熱真菌,20 ℃下仍可生長(zhǎng),而本研究分離到的JG-50菌株在30 ℃以下不能生長(zhǎng),結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果,判斷JG-50菌株為嗜熱子囊菌。
2. 2 JG-50菌株產(chǎn)酶條件研究
2. 2. 1 不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)JG-50菌株產(chǎn)酶的影響 由圖4可知,在培養(yǎng)初期,木聚糖酶活性不斷上升,至第8 d達(dá)150.9 U/g,繼續(xù)培養(yǎng)至21 d,酶活性始終維持在150.0 U/g左右,綜合考慮培養(yǎng)時(shí)間與生產(chǎn)成本,最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)天數(shù)為8 d。
2. 2. 2 初始pH對(duì)JG-50菌株產(chǎn)酶的影響 由圖5可知,在pH 4~10時(shí)JG-50菌株產(chǎn)木聚糖酶活性均維持在較高水平,但以pH 5下生長(zhǎng)最快,因此培養(yǎng)基最佳初始pH為5。
2. 2. 3 培養(yǎng)溫度對(duì)JG-50菌株產(chǎn)酶的影響 由圖6可知,培養(yǎng)溫度在40~50 ℃時(shí)JG-50菌株均維持在較高的產(chǎn)酶水平,但50 ℃下菌絲生長(zhǎng)速度最快,故確定該溫度為最佳產(chǎn)酶溫度。
2. 2. 4 可溶性碳源對(duì)JG-50菌株產(chǎn)酶的影響 菌株JG-50在添加不同可溶性碳源的木薯渣基質(zhì)中培養(yǎng),以添加纖維二糖的產(chǎn)酶量最高,添加其他碳源與不添加可溶性碳源相比差異不明顯(圖7)。
2. 2. 5 氮源對(duì)JG-50菌株產(chǎn)酶的影響 菌株JG-50在添加不同氮源的木薯渣基質(zhì)中培養(yǎng)的產(chǎn)酶水平(圖8)表明,添加無(wú)機(jī)氮源無(wú)促進(jìn)產(chǎn)酶作用,而添加有機(jī)氮源如麥麩、米糠、黃豆粉和豆粕對(duì)產(chǎn)酶均有促進(jìn)作用,其中麥麩的促進(jìn)作用最明顯。
2. 2. 6 添加不同比例的麥麩對(duì)JG-50菌株產(chǎn)酶的影響 不同氮源對(duì)JG-50菌株產(chǎn)酶的影響試驗(yàn)結(jié)果表明,麥麩的促進(jìn)作用最明顯。通過(guò)添加不同比例的麥麩研究其對(duì)JG-50產(chǎn)酶能力的影響,結(jié)果(圖9)顯示,隨著麥麩添加比例的增加,JG-50的產(chǎn)酶能力也隨之上升,至麥麩添加比例為60%時(shí)菌株產(chǎn)酶能力達(dá)峰值。
3 討論
木聚糖酶是一類重要的木糖苷鍵水解酶,在食品和發(fā)酵等可再生資源生物轉(zhuǎn)化利用中發(fā)揮重要作用(萬(wàn)紅貴等,2010;彭靜靜,2014),但目前商業(yè)化木聚糖酶數(shù)量不多。Wong等(1988)指出不同來(lái)源的木聚糖酶其酶學(xué)性質(zhì)存在差異。李秀婷等(2004)以麥麩和玉米芯粉(8∶2)為復(fù)合碳源(99%), 酵母膏和胰蛋白胨(1∶1)為復(fù)合氮源(1%)培養(yǎng)嗜熱真菌(Thermomyces lanuginosus CBS288.54-M18)生產(chǎn)木聚糖酶,其活力高達(dá)15023 U/g(干基碳源),但其固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)料以麥麩為主,成本較高。龐宗文等(2012)以從土壤中分離到的嗜熱子囊菌為發(fā)酵菌株,優(yōu)化了以玉米芯∶麩皮為碳源的產(chǎn)酶條件,取得了較高的酶活性,同時(shí)也分析了以木薯渣作為單一碳源對(duì)其酶活性的影響,但未對(duì)以木薯渣為碳源的產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化。本研究以從廢置木薯渣堆中分離得到的嗜熱真菌為發(fā)酵菌株,利用木薯渣發(fā)酵產(chǎn)木聚糖,在最佳產(chǎn)酶條件下,木聚糖酶活性可達(dá)4625.4 U/g(干培養(yǎng)基)。對(duì)比李秀婷等(2004)和龐宗文等(2012)的研究結(jié)果,發(fā)現(xiàn)JG-50菌株的木聚糖酶活性偏低,可能是本研究采用木薯渣為主要碳源導(dǎo)致培養(yǎng)基透氣性較差,影響菌株產(chǎn)酶能力。Maciel等(2008)采用甘蔗渣(65%)和豆粕(35%)為培養(yǎng)基固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)黑曲霉LPB326生產(chǎn)木聚糖酶,培養(yǎng)4 d酶活性達(dá)3099.0 U/g(干培養(yǎng)基);本研究與之相比培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng),需發(fā)酵8 d,但酶活性更高。由此可見,本研究在利用木薯渣生產(chǎn)木聚糖酶中具有一定的應(yīng)用前景,后續(xù)研究可進(jìn)一步考察所產(chǎn)木聚糖酶耐熱及耐酸堿性及相關(guān)酶學(xué)特性,為其實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支持和理論依據(jù)。
4 結(jié)論
嗜熱真菌JG-50菌株具有較強(qiáng)的產(chǎn)木聚糖酶能力,在農(nóng)業(yè)有機(jī)廢棄物發(fā)酵利用和食用菌栽培料生產(chǎn)等領(lǐng)域具有很好的應(yīng)用前景
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(責(zé)任編輯 麻小燕)