α-蒎烯衍生物對(duì)山核桃干腐病菌作用機(jī)理1)

楊洋　馬玲　　　馬巖　　　陳旭日　潘佳亮　葛康康　姚翰文　劉雪峰

(東北林業(yè)大學(xué)，哈爾濱，150040)　(哈爾濱商業(yè)大學(xué))　　　　　　　　　　　　　　　(東北林業(yè)大學(xué))

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α-蒎烯衍生物對(duì)山核桃干腐病菌作用機(jī)理1)

楊洋馬玲馬巖陳旭日潘佳亮葛康康姚翰文劉雪峰

(東北林業(yè)大學(xué)，哈爾濱，150040)(哈爾濱商業(yè)大學(xué))(東北林業(yè)大學(xué))

摘要為了探討α-蒎烯衍生物3-甲氧基-4-羥基苯基-α-蒎烯馬來(lái)酰亞胺基酰腙對(duì)病原菌的作用機(jī)理，采用平板擴(kuò)散法研究了α-蒎烯衍生物對(duì)山核桃干腐病原菌(Botryosphaeria fusisporae)的抑制作用。結(jié)果表明：該衍生物可以抑制山核桃干腐病原菌生長(zhǎng)，最大抑制率為63.37%，EC50為0.059 4 g·L-1，可導(dǎo)致山核桃干腐病菌菌絲體生長(zhǎng)緩慢、質(zhì)量減輕、菌液中pH值減小程度逐漸變大、電導(dǎo)率明顯升高、大分子物質(zhì)的吸光值增大、可溶性蛋白增加、過(guò)氧化物酶(POD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)活性降低。說(shuō)明α-蒎烯衍生物主要改變病原菌細(xì)胞膜的通透性，具有開發(fā)利用的潛力。

關(guān)鍵詞α-蒎烯衍生物；作用機(jī)理；山核桃干腐病

分類號(hào)S763.1

α-pinene Derivative on Action Mechanism ofBotryosphaeriafusisporae//

Yang Yang, Ma Ling

(Northeast Forestry University, Harbin 150040, P. R. China); Ma Yan(Harbin University of Commerce); Chen Xuri, Pan Jialiang, Ge Kangkang, Yao Hanwen, Liu Xuefeng(Northeast Forestry University)//Journal of Northeast Forestry University，2016,44(5)：88-91,96.

To explore theα-pinene derivative of 3-methoxy-4-hydroxyphenyl-α-pinene maleimido acylhydrazone mechanism of pathogenic bacteria, we used the plate diffusion method to study theα-pinene derivative inhibition ofBotryosphaeriafusisporaepathogens. The derivative can inhibit the growth of B. fusisporae pathogens, the largest inhibition was 63.37%, EC50was 0.059 4 g/L, which led toB.fusisporaepathogens mycelial growth slow weight loss, pH value decrease degree of bacteria gradually increased, the electrical conductivity significantly increased, the absorbance macromolecules increases, the soluble protein increased, POD and CAT activity decreased. Theα-pinene derivative mainly changes the permeability of cell membrane pathogens with the potential development and utilization.

Keywordsα-pinene derivative; Function mechanism; Botryosphaeria fusisporae

山核桃干腐病是山核桃生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)的1種新病害，是一類主要由山核桃干腐病菌(Botryosphaeriafusisporae)引起的病害，又稱潰瘍病[1]。在山核桃主栽培區(qū)普遍發(fā)生，個(gè)別地區(qū)受害嚴(yán)重，病株上少則幾個(gè)病斑，多則幾十個(gè)病斑，最嚴(yán)重的可達(dá)數(shù)百個(gè)病斑，發(fā)病率在30%以上，不但影響山核桃的生長(zhǎng)和產(chǎn)量，而且嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致樹木過(guò)早死亡，造成重大經(jīng)濟(jì)損失[2]。目前，關(guān)于該病的防治方法研究報(bào)道較少，只見(jiàn)物理刮除病斑法[3]和化學(xué)農(nóng)藥噴灑法[4]。直接刮除病斑會(huì)造成樹木產(chǎn)生新的傷口，易再度引發(fā)病菌侵入，且防治效果較短；化學(xué)農(nóng)藥噴灑對(duì)防治山核桃干腐病效果更好[5]，但從長(zhǎng)遠(yuǎn)考慮，山核桃是一種高檔干果，對(duì)食品安全性要求很高，因此尋找高效、低毒、低殘留的生物防治方法迫在眉睫。

α-蒎烯是多種植物精油活性成分的重要組成部分，是植物揮發(fā)性有機(jī)化合物，具有廣譜的抗真菌作用和很強(qiáng)的殺蟲活性[6]。已有研究表明，α-蒎烯以及含有α-蒎烯的植物精油對(duì)很多森林害蟲和某些病原菌具有很好的控制作用[7-8]，例如土傳病菌尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)和斜紋夜蛾(Spodopteralitura)。但是α-蒎烯單體對(duì)病原菌的作用效果并不理想，所以對(duì)α-蒎烯的結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾改造合成具有更好抑菌效果的衍生物是非常必要的。與此同時(shí)，國(guó)內(nèi)外對(duì)其抗菌機(jī)制報(bào)道較少，因此，選擇α-蒎烯的1種衍生物3-甲氧基-4-羥基苯基-α-蒎烯馬來(lái)酰亞胺基酰腙處理山核桃干腐病原菌，觀察菌落生長(zhǎng)情況，通過(guò)比較處理前后菌絲體質(zhì)量的變化以及菌液中pH值、電導(dǎo)率等理化性質(zhì)的變化，并比較α-蒎烯衍生物處理菌絲體后，其過(guò)氧化物酶(POD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)的差異，旨在探究出α-蒎烯衍生物對(duì)山核桃干腐病的作用機(jī)理，為開發(fā)新型植物源殺菌劑，有效防治病原菌提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試菌種

山核桃干腐病菌(Botryosphaeriafusisporae)菌株，由東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院森林保護(hù)學(xué)專業(yè)病理實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1α-蒎烯衍生物對(duì)山核桃干腐病抑菌試驗(yàn)

PDA培養(yǎng)基的配制：準(zhǔn)確稱量洗凈去皮馬鈴薯200 g，切碎，加入1 L蒸餾水煮沸30 min，用2層紗布過(guò)濾至燒杯。分別稱量20 g的葡萄糖和瓊脂，加入煮好的培養(yǎng)基中，充分?jǐn)嚢枋蛊淙芙?，定容? L，分裝在錐形瓶中高溫高壓滅菌，冷卻后保存?zhèn)溆谩?/p>

山核桃干腐病抑菌試驗(yàn)：山核桃干腐病菌種接種在固體斜面培養(yǎng)基上，活化2次，然后挑取第2次活化菌種于固體培養(yǎng)基中，25 ℃、131 r·min-1搖床培養(yǎng)。采用平板擴(kuò)散法[9-10]進(jìn)行試驗(yàn)，在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將直徑0.5 cm菌餅接種在滅好菌直徑為9.0 cm的培養(yǎng)皿中央，在距離菌餅中心水平方向3.5 cm處分別用無(wú)菌打孔器打2個(gè)孔，在孔內(nèi)分別注入0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 g·L-1的3-甲氧基-4-羥基苯基-α-蒎烯馬來(lái)酰亞胺基酰腙藥液，以不含藥劑但含相同體積的生理鹽水作為對(duì)照，每處理重復(fù)3次，25 ℃在霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5 d。觀察菌落生長(zhǎng)情況，并測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率和抑制中濃度EC50。

菌落凈生長(zhǎng)量=測(cè)得菌落平均值-0.5。

菌絲生長(zhǎng)抑制率=((對(duì)照組菌落凈生長(zhǎng)量-處理組菌落凈生長(zhǎng)量)/對(duì)照組菌落凈生長(zhǎng)量)×100%。

1.2.2菌絲體質(zhì)量及其理化性質(zhì)的測(cè)定

將1 mL山核桃干腐病菌的孢子懸浮液(1×107菌落·mL-1)接種到100 mL滅菌后的PDA液體培養(yǎng)基中，25 ℃、131 r·min-1搖床中培養(yǎng)。處理組加入1 mL 6.0 g·L-1的α-蒎烯衍生物使得液體培養(yǎng)基中藥液質(zhì)量濃度始終保持在0.06 g·L-1，對(duì)照組加入1 mL的生理鹽水，分別測(cè)定以下指標(biāo)。

菌絲體質(zhì)量：培養(yǎng)12、24、36、48、60、72、84、96、108、120 h后，分別取樣5 mL，過(guò)濾獲得菌絲體，放入烘箱105 ℃烘干6 h，利用干重法獲得其質(zhì)量。

pH值：培養(yǎng)12、24、36、48、60、72、84、96、108、120 h后，分別取樣，用pH計(jì)直接測(cè)定培養(yǎng)液的pH值。

培養(yǎng)液電導(dǎo)率：培養(yǎng)12、24、36、48、60、72、84、96、108、120 h后，分別取5 mL培養(yǎng)液，4 000 r·min-1離心10 min，棄沉淀，重復(fù)2次。取上清液，稀釋成一定的濃度，用電導(dǎo)率儀測(cè)其液體電導(dǎo)率[11]，每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)3次。R=((Rs-Rc)/Rc)×100%。式中：Rs為處理組電導(dǎo)率；Rc為對(duì)照組電導(dǎo)率。

培養(yǎng)液中大分子物質(zhì)吸光值：培養(yǎng)12、24、36、48、60、72、84、96、108、120 h后，分別取5 mL培養(yǎng)液，6 000 r·min-1離心10 min，留沉淀，用PBS緩沖液洗滌，重復(fù)2次。利用無(wú)菌水將離心后的沉淀制成菌懸液，在260 nm波長(zhǎng)下，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定上清液中大分子物質(zhì)的吸光值[12]。對(duì)照組為無(wú)水乙醇，每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)量濃度的測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：取6支10 mL具塞試管，按照表1加樣蓋塞后，將各試管中溶液充分混合，放置3 min后用1 cm光經(jīng)比色杯在595 nm波長(zhǎng)下比色，記錄各管測(cè)定的光密度值，并做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表1　各試管加樣標(biāo)準(zhǔn)

培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)量濃度：將1 mL山核桃干腐病菌的孢子懸浮液(1×107菌落·mL-1)接種到100 mL滅菌后的PDA液體培養(yǎng)基中，25 ℃、131 r·min-1搖床中培養(yǎng)。處理組加入1 mL 6.0 g·L-1的α-蒎烯衍生物使得液體培養(yǎng)基中藥液質(zhì)量濃度始終保持在0.06 g·L-1，對(duì)照組加入1 mL的生理鹽水。培養(yǎng)12、24、36、48、60、72、84、96、108、120 h后，分別取5 mL培養(yǎng)液，6 000 r·min-1離心10 min，棄沉淀，重復(fù)2次。取上清液，稀釋成一定的濃度，取0.5 mL稀釋提取液，加入5 mL考馬斯亮藍(lán)G-250試劑在室溫下放置3 min后在595 nm下比色[13]，記錄吸光值，用蒸餾水作對(duì)照，每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶測(cè)定

將1 mL山核桃干腐病菌的孢子懸浮液(107菌落·mL-1)接種到100 mL滅菌后的PDA液體培養(yǎng)基中，25 ℃、131 r·min-1搖床中培養(yǎng)，分別加入適量的α-蒎烯衍生物使得液體培養(yǎng)基中藥液質(zhì)量濃度始終恒定，分別為0、0.04、0.06、0.08、0.10、0.15、0.20 g·L-1，培養(yǎng)5 d后分別取5 mL培養(yǎng)液，低溫條件下用超聲波細(xì)胞破碎儀處理50 s，8 000 r·min-1離心10 min棄沉淀。

過(guò)氧化物酶測(cè)定：取1 mL上清液作為粗酶液加入比色皿中，將3 mL反應(yīng)液在室溫25 ℃保溫10 min，立即加入到含粗酶液的比色皿中，對(duì)照組加3 mL反應(yīng)液，于470 nm處測(cè)其吸光度值，1 mL 100 mmol·L-1PBS(pH=6.0)緩沖液，每個(gè)處理重復(fù)3次[14]。以每毫克蛋白每分鐘使反應(yīng)體系的吸光度降低0.01為1個(gè)比活性單位。

過(guò)氧化氫酶測(cè)定：取1 mL上清液作為粗酶液加入比色皿中，將3 mL反應(yīng)液在室溫25 ℃保溫10 min，立即加入到含粗酶液的比色皿中，對(duì)照組加3 mL反應(yīng)液，1 mL含30% H2O2150 mmol·L-1PBS(pH=7.5)緩沖液，于240 nm處測(cè)其1 min內(nèi)吸光度值的變化，每個(gè)處理重復(fù)3次[15]。以每毫克蛋白每分鐘使反應(yīng)體系的吸光度降低0.01為1個(gè)比活性單位。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用POLO軟件計(jì)算α-蒎烯衍生物對(duì)山核桃干腐病抑制中濃度EC50和95%置信區(qū)間。運(yùn)用SPSS17.0軟件分析不同時(shí)間、不同處理下各項(xiàng)指標(biāo)的變化情況，采用Duncan’s法進(jìn)行差異顯著性分析(p<0.05)。

2結(jié)果與分析

2.1α-蒎烯衍生物對(duì)山核桃干腐病抑菌效果

0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 g·L-1的3-甲氧基-4-羥基苯基-α-蒎烯馬來(lái)酰亞胺基酰腙對(duì)山核桃干腐病菌的抑制率分別為12.32%、24.84%、51.79%、60.84%、63.37%?？梢?jiàn)，α-蒎烯衍生物對(duì)山核桃干腐病菌有一定的抑制作用，導(dǎo)致菌絲體生長(zhǎng)緩慢提前衰退，而且隨著藥液質(zhì)量濃度的增大，抑制率也隨之增大。當(dāng)藥液質(zhì)量濃度為0.10 g·L-1時(shí)對(duì)山核桃干腐病菌抑制率最大，為63.37%。經(jīng)計(jì)算得EC50為0.059 4 g·L-1，所以可選擇在藥液質(zhì)量濃度為0.06 g·L-1時(shí)對(duì)山核桃干腐病菌的抑制作用為基準(zhǔn)，探究抑菌作用機(jī)理。

2.2α-蒎烯衍生物對(duì)菌絲體質(zhì)量及其理化性質(zhì)的影響

不同處理時(shí)間菌絲體質(zhì)量及其理化性質(zhì)變化情況如表2所示，2組菌絲體質(zhì)量均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，基本在96 h時(shí)，菌絲質(zhì)量同時(shí)達(dá)到最大，對(duì)照組最大可達(dá)0.027 2 g。處理組的菌絲體質(zhì)量始終小于對(duì)照組，說(shuō)明該藥液對(duì)山核桃干腐病菌有一定抑制作用，菌絲體生長(zhǎng)緩慢；隨著處理時(shí)間的增加，2組培養(yǎng)液的pH值都在相應(yīng)的減小，并且減小的幅度逐漸變緩，處理120 h，pH值達(dá)到最低。處理組菌液的pH值始終明顯小于對(duì)照組，推測(cè)該病原菌受α-蒎烯衍生物藥液的作用后，可能產(chǎn)生一定量的酸性物質(zhì)致使菌液的pH值變小，并且隨著處理時(shí)間的增加，產(chǎn)生的酸性物質(zhì)也隨之增多。

由表2可知，離心后上清液電導(dǎo)率隨著藥液作用時(shí)間的增加而增大，處理96 h，趨于穩(wěn)定，而且處理組培養(yǎng)液電導(dǎo)率始終高于對(duì)照組，推測(cè)培養(yǎng)液中電導(dǎo)率的變化可能是因?yàn)榧?xì)胞膜通透性的改變，導(dǎo)致培養(yǎng)液中陰陽(yáng)離子數(shù)目發(fā)生改變；培養(yǎng)液中大分子物質(zhì)吸光值與電導(dǎo)率變化趨勢(shì)相似，推測(cè)該藥液破壞了山核桃干腐病的細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化，從而導(dǎo)致大分子物質(zhì)外漏，并且隨著藥液處理時(shí)間的增加，大分子物質(zhì)外漏更加嚴(yán)重，導(dǎo)致大分子物質(zhì)的吸光值不斷增加，進(jìn)而說(shuō)明隨著處理時(shí)間的增加細(xì)胞膜的通透性也在增加。

2.3α-蒎烯衍生物對(duì)培養(yǎng)液中可溶性蛋白質(zhì)量濃度的影響

由表2可知，隨著藥液處理時(shí)間的增加，對(duì)照組可溶性蛋白質(zhì)量濃度呈略微下降趨勢(shì)，說(shuō)明山核桃干腐病在培養(yǎng)的過(guò)程中消耗了一定量的蛋白；處理組培養(yǎng)液中可溶性蛋白質(zhì)量濃度不斷增加，且始終高于對(duì)照組，最高可達(dá)346.2 mg·L-1，推測(cè)該藥液對(duì)山核桃干腐病原菌的細(xì)胞膜造成破壞，細(xì)胞膜內(nèi)的蛋白外漏，從而導(dǎo)致培養(yǎng)液中可溶性蛋白質(zhì)量濃度增加。

表2　不同處理時(shí)間菌絲體質(zhì)量、理化性質(zhì)及其可溶性蛋白質(zhì)量濃度

2.4α-蒎烯衍生物對(duì)過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶活性的影響

不同質(zhì)量濃度的3-甲氧基-4-羥基苯基-α-蒎烯馬來(lái)酰亞胺基酰腙藥液對(duì)過(guò)氧化物酶(POD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)活性的影響如表3所示。由表3可知，經(jīng)不同質(zhì)量濃度藥液處理后，處理組培養(yǎng)液中POD和CAT活性變化明顯，隨著藥液質(zhì)量濃度的增加山核桃干腐病菌POD和CAT的活性顯著下降，表現(xiàn)顯著的抑制作用，在藥液質(zhì)量濃度為0.20 g·L-1時(shí)達(dá)到最低值，說(shuō)明山核桃干腐病菌細(xì)胞內(nèi)原有的POD和CAT系統(tǒng)平衡被該藥液破壞，導(dǎo)致自由基清除系統(tǒng)出現(xiàn)障礙，活性不斷降低，從而影響細(xì)胞正常代謝，菌絲體生長(zhǎng)受到抑制。

表3不同質(zhì)量濃度藥液對(duì)過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶活性的影響

藥液質(zhì)量濃度/g·L-1POD/μmol·min-1·g-1對(duì)照組處理組CAT/μmol·min-1·g-1對(duì)照組處理組0 63.363.154.354.10.0462.962.353.951.20.0662.557.354.140.80.0861.955.854.331.30.1062.254.253.826.20.1562.351.754.223.10.2061.744.353.720.3

3結(jié)論與討論

山核桃干腐病是山核桃上最重要的病害，不僅影響山核桃的產(chǎn)量，而且會(huì)削弱樹勢(shì)，嚴(yán)重時(shí)則導(dǎo)致樹木過(guò)早死亡，生產(chǎn)中缺乏有效的防治方法[16]。本試驗(yàn)選擇α-蒎烯的1種衍生物3-甲氧基-4-羥基苯基-α-蒎烯馬來(lái)酰亞胺基酰腙處理山核桃干腐病原菌，并初步探究其作用機(jī)理。研究表明，α-蒎烯衍生物對(duì)山核桃干腐病原菌有一定抑制作用，隨著藥液質(zhì)量濃度的增加，抑制效果增強(qiáng)，最大抑制率為63.37%，為代替?zhèn)鹘y(tǒng)化學(xué)殺菌劑提供了可能。

菌絲體質(zhì)量、培養(yǎng)液pH值、電導(dǎo)率以及培養(yǎng)液中大分子物質(zhì)含量和可溶性蛋白含量均可衡量病原菌的生長(zhǎng)情況。其中菌絲體質(zhì)量是病原菌生長(zhǎng)是否良好的最直觀展現(xiàn)[17]。本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定菌絲體質(zhì)量發(fā)現(xiàn)，處理組的菌絲體質(zhì)量始終小于對(duì)照組，由于菌絲體通過(guò)吸收培養(yǎng)基內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)生長(zhǎng)，達(dá)到對(duì)數(shù)期后逐漸衰退，所以處理組和對(duì)照組菌絲體生長(zhǎng)均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，說(shuō)明該藥液對(duì)山核桃干腐病菌產(chǎn)生一定抑制作用，導(dǎo)致菌絲體生長(zhǎng)緩慢，質(zhì)量減輕；pH值是菌絲生長(zhǎng)環(huán)境中很重要的因素，pH值反映菌液中酸堿度的高低，過(guò)低的pH值會(huì)抑制菌絲的生長(zhǎng)[18]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，處理組菌液的pH值明顯小于對(duì)照組，說(shuō)明該藥液導(dǎo)致培養(yǎng)基內(nèi)酸性增大或者是促進(jìn)了山核桃干腐病菌的酸性次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生，抑制了菌絲正常生長(zhǎng)；菌絲體內(nèi)電解質(zhì)對(duì)菌絲的生命活性至關(guān)重要，正常情況下，由于細(xì)胞膜作用，菌絲體細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)不會(huì)滲漏[19]。本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定處理組和對(duì)照組培養(yǎng)液電導(dǎo)率和大分子物質(zhì)含量并比較其差異，推測(cè)該藥液破壞了山核桃干腐病菌的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，影響菌絲體細(xì)胞膜的通透性，導(dǎo)致電解質(zhì)從菌絲體內(nèi)滲漏到溶液中，并且隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)和藥液質(zhì)量濃度的增加，細(xì)胞內(nèi)的大分子物質(zhì)外漏加快，電導(dǎo)率隨之增大；蛋白質(zhì)是培養(yǎng)基內(nèi)重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，處理組可溶性蛋白質(zhì)量濃度始終高于對(duì)照組，推測(cè)該藥液破壞山核桃干腐病菌的細(xì)胞膜，導(dǎo)致膜內(nèi)大量蛋白外漏，培養(yǎng)液中可溶性蛋白質(zhì)量濃度增加。

過(guò)氧化物酶(POD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)屬于山核桃干腐病菌細(xì)胞內(nèi)的保護(hù)酶體系，能夠清除活性氧自由基、抵抗多種理化因子脅迫、減少活性氧積累、保持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性，同時(shí)在阻斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中起著至關(guān)重要的作用[20-21]。本研究發(fā)現(xiàn)，POD和CAT活性隨著藥液質(zhì)量濃度的增加活性逐漸下降，表現(xiàn)出顯著抑制作用，再次說(shuō)明3-甲氧基-4-羥基苯基-α-蒎烯馬來(lái)酰亞胺基酰腙改變了山核桃干腐病菌細(xì)胞膜的通透性，從而影響到POD和CAT活性，抑制病原菌生長(zhǎng)。

目前，關(guān)于有效防治山核桃干腐病的方法及其作用機(jī)理研究較少，利用活性優(yōu)良的植物源殺菌劑代替?zhèn)鹘y(tǒng)的化學(xué)藥劑是比較理想的。本研究對(duì)α-蒎烯衍生物的作用機(jī)理進(jìn)行分析，表明藥劑可能是通過(guò)改變菌絲體細(xì)胞膜的通透性，并且促進(jìn)山核桃干腐病菌次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生，進(jìn)而抑制菌絲體生長(zhǎng)，但是具體的作用位點(diǎn)和分子水平上的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。

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收稿日期：2015年12月7日。

第一作者簡(jiǎn)介：楊洋，男，1992年1月生，東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，碩士研究生。E-mail：yangyangnefu1992@163.com。通信作者：劉雪峰，東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，教授。E-mail：liuxuefeng63@sina.com。

1)國(guó)家林業(yè)局“948”項(xiàng)目(2014-4-08)。

責(zé)任編輯：程紅。