高效液相色譜法測(cè)定熟肉中羅丹明B染料結(jié)果不確定度的評(píng)定

劉曉琳，花　錦，傅英文，高媛惠，杜利君

（山西出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，山西太原　030024）

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高效液相色譜法測(cè)定熟肉中羅丹明B染料結(jié)果不確定度的評(píng)定

劉曉琳，花錦，傅英文，高媛惠，杜利君

（山西出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，山西太原030024）

摘要：因檢測(cè)需要，制定了實(shí)驗(yàn)室非標(biāo)準(zhǔn)方法“高效液相色譜法測(cè)定熟肉制品中羅丹明B的含量”，按照測(cè)定方法和程序進(jìn)行熟肉中羅丹明B的測(cè)定，對(duì)其不確定度進(jìn)行分析和評(píng)估，并根據(jù)評(píng)估結(jié)果提出使用和改進(jìn)本非標(biāo)準(zhǔn)方法的建議。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；熟肉制品；羅丹明B；不確定度；評(píng)定

0　引言

羅丹明B（Rhodamine B）又稱玫瑰紅B，或堿性玫瑰精，俗稱花粉紅，是一種具有鮮桃紅色的人工合成染料。美國(guó)曾對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行了研究，顯示其具有較強(qiáng)致癌性。1993年起在歐美一些國(guó)家和地區(qū)也已明令禁止用于食品中[1]，日本也是明令禁止使用該物質(zhì)，曾經(jīng)用作食品添加劑的我國(guó)也于2008年明確規(guī)定不允許作為食品添加劑及食品染色。由于羅丹明B具有持久鮮艷的顏色特性，于是有商販在加工熟肉時(shí)非法添加羅丹明B來改善熟肉的品相。本文根據(jù)實(shí)驗(yàn)室非標(biāo)制定的方法，對(duì)測(cè)定熟肉中羅丹明B染料結(jié)果的測(cè)量不確定[2]進(jìn)行了評(píng)定。評(píng)定從2個(gè)方面進(jìn)行，即方法重復(fù)性的不確定度和方法數(shù)學(xué)模型中涉及各個(gè)分量的不確定度。

1　試驗(yàn)部分

試樣經(jīng)乙酸乙酯-環(huán)己烷溶劑提取，經(jīng)過凝膠色譜凈化系統(tǒng)（GPC）凈化，最后用高效液相色譜法測(cè)定和確證，采用外標(biāo)峰面積法定量。

2　被測(cè)量的數(shù)學(xué)模型

式中：Y——試樣中羅丹明B的含量，mg/kg；

A——樣液中羅丹明B的峰面積，muv；

As——標(biāo)準(zhǔn)工作液中羅丹明B的峰面積，muv；

cs——標(biāo)準(zhǔn)工作液中羅丹明B質(zhì)量濃度，μg/mL；

V——樣液的最終定容體積，mL；

m——質(zhì)量，kg。

3　分析和量化不確定度分量

3.1重復(fù)性不確定度評(píng)定

熟肉中羅丹明B染料經(jīng)提取、GPC凈化濃縮和定容，再用高效液相色譜法測(cè)定，每一環(huán)節(jié)都可能會(huì)引入不確定度。要一步一步地找到其不確定度的來源很困難，一般情況下可采用方法中確認(rèn)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)（重復(fù)性）進(jìn)行統(tǒng)一評(píng)定。

對(duì)方法的重復(fù)性進(jìn)行了確證，方可使用方法，熟肉樣品添加羅丹明B，質(zhì)量濃度為0.005 mg/kg，依照標(biāo)準(zhǔn)操作步驟重復(fù)試驗(yàn)10次，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.012 mg即重復(fù)性u(píng)（rep）=0.012 mg，試驗(yàn)中不包括全部實(shí)驗(yàn)室的偏倚分量，如果能夠產(chǎn)生偏倚的量（試樣的質(zhì)量），應(yīng)對(duì)其進(jìn)行單獨(dú)的評(píng)定。

3.2數(shù)學(xué)模型中所涉及分量的不確定度

3.2.1質(zhì)量的不確定度

稱取樣品3 g，使用分度值為0.01 g的天平。獨(dú)立的不確定度分量來自天平的校準(zhǔn)，其重復(fù)性已包括在回收率試驗(yàn)當(dāng)中。所用天平需經(jīng)檢定合格，根據(jù)JJG 98[3]，其最大的允許差為±0.01 g，按照矩形分布處理，以下為引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.2.2體積的不確定度

該方法由體積的不確定度主要源于校準(zhǔn)和溫度。

（1）校準(zhǔn)。該方法的定容體積為5.0 mL，定容體積的準(zhǔn)確性直接影響到最終的結(jié)果。用移液槍獲得該體積，按照J(rèn)JG 646—2006[4]，A級(jí)5 mL的移液槍最大允許差為0.02 mL，按照三角分布處理，以下為引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

（2）溫度。溫度在20±4℃變化，實(shí)驗(yàn)室用水的膨脹系數(shù)為2.1×10-4，以下為引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

（3）體積合成的不確定度。

（2）標(biāo)準(zhǔn)工作液配制引入的不確定度。在已校準(zhǔn)的萬(wàn)分之一天平上稱取標(biāo)準(zhǔn)品，用A級(jí)100 mL的容量瓶配制。在稀釋過程中，使用了100 mL容量瓶、1 mL移液槍2次。

（3）體積。所用A級(jí)100 mL容量瓶的最大允許差為±0.10 mL，1 mL移液槍的最大允許差為±0.008 mL，由此引入的不確定度分別為：

3.2.3標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度引入的不確定度

（1）標(biāo)準(zhǔn)品的純度。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)羅丹明B的純度為98%±1.0%，使用均勻分布處理，以下為引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

稀釋過程中，移液槍和容量瓶中的溶液基本處于相同溫度，所以可忽略溫度帶來的影響。

（4）質(zhì)量。使用減量法來稱量標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量，不確定度的主要來源是天平的校準(zhǔn)與稱量中的變動(dòng)性，稱量中的變動(dòng)性歸并于重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)偏差中。而天平校準(zhǔn)引入的不確定度來自天平的線性、分辨力2個(gè)方面，因?yàn)?次稱量的質(zhì)量值處于很窄的范圍內(nèi)，所以分辨力所帶來影響可忽略不計(jì)。

根據(jù)天平的線性為±0.15 mg，采用矩形分布處理，以下為引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

由減量法涉及的2次獨(dú)立稱量，以下為天平校準(zhǔn)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度的不確定度合成

按照公式計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度合成的不確定度：

3.2.4標(biāo)準(zhǔn)工作液峰面積的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)工作液的重復(fù)性已被包含于回收率的不確定度之中，峰面積偏倚的不確定度由儀器校準(zhǔn)引入。來自儀器校準(zhǔn)證書上儀器的衰減器相對(duì)誤差為0.8%，使用均勻分布處理，以下是峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.2.5樣品峰面積的不確定度

同3.2.4中所述，樣品峰面積的相對(duì)不確定度u（A）同樣為0.004 6。

3.2.6進(jìn)樣量的不確定度

被測(cè)量的計(jì)算公式中并沒有涉及進(jìn)樣量，但實(shí)際使用了它們的比值。采用同一進(jìn)樣器等體積進(jìn)樣，比值變動(dòng)性歸并到重復(fù)性考慮，重復(fù)性的不確定度已包含于回收率。注入標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品時(shí)溫度變化不大，溫度的影響可以忽略。由于2個(gè)進(jìn)樣量的強(qiáng)相關(guān)性，使得校準(zhǔn)對(duì)體積比值的影響為0。

3.2.7數(shù)學(xué)模型涉及量合成的不確定度

通過以下計(jì)算得到：

3.3計(jì)算合成的不確定度

方法重復(fù)性引入的不確定度與數(shù)學(xué)模型中各量的合成不確定度是2個(gè)不相關(guān)的量，因此被測(cè)量的合成不確定度為：

通過計(jì)算得出：

4　測(cè)量結(jié)果及其不確定度的報(bào)告

取包含因子k=2計(jì)算擴(kuò)展不確定度為uRhodamine= 0.04 mg/kg，檢測(cè)結(jié)果為羅丹明B 0.26±0.04 mg/kg。

5　結(jié)論

為了有效提高測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性，嚴(yán)格控制不確定度貢獻(xiàn)大的、占主導(dǎo)地位的分量，嚴(yán)格控制這些分量代表的操作環(huán)節(jié)，可以有限地降低測(cè)量不確定度u。

不確定度與測(cè)試相關(guān)的各個(gè)因素，如方法、環(huán)境、設(shè)備等有很多關(guān)系，體現(xiàn)了測(cè)試狀態(tài)和水平；而測(cè)試方法的重復(fù)性，僅僅表示幾次或幾組結(jié)果的簡(jiǎn)單比較限制，不確定度的評(píng)估已包含了再現(xiàn)性[5]，在合格判定中也存在困難并無(wú)法體現(xiàn)檢測(cè)的真值信息。

參考文獻(xiàn)：

［1］中華人民共和國(guó)重慶出入境檢驗(yàn)檢疫局. SN/T 2430—2010進(jìn)出口食品中羅丹明B的檢測(cè)方法［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

［2］中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院. JJF 1059—1999測(cè)量不確定度評(píng)定和表示［S］.北京：中國(guó)計(jì)量出版社，1999.

［3］中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院. JJG 98—1990中華人民共和國(guó)計(jì)量檢定規(guī)程非自動(dòng)天平（試行）［S］.北京：中國(guó)計(jì)量出版社，1990.

［4］中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院. JJG 646—2006中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程［S］.北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2006.

［5］劉智敏.實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可中的不確定度和統(tǒng)計(jì)分析［M］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007：65.

Estimation of Uncertainty in Determination of Rhodamine B in Cooked Meat with HPLC

LIU Xiaolin，HUA Jin，F(xiàn)U Yingwen，GAO Yuanhui，DU Lijun
（Shanxi Exit/Entry Inspection and Quarantine Bureau，Taiyuan，Shanxi 030024，China）

Abstract：Non- standard laboratory method on determination of Rhodamine cooked meat with HPLC is developed for the detection. Acorrding to the determination methods and procedures，the content of Rhodamine cooked meat is determined. Uncertainty of measurement is analyzed and evaluated，suggestions based on the assessment results are proposed for applying and improving the non- standard method.

Key words：HPLC；cooked meat；Rhodamine B；uncertainty；estimation

作者簡(jiǎn)介：劉曉琳（1988—），女，本科，助理工程師，研究方向?yàn)槭称钒踩?/p>

收稿日期：2015- 10- 21

文章編號(hào)：1671- 9646（2016）03b- 0039- 02

中圖分類號(hào)：TS251.7

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

doi：10.16693/j.cnki.1671- 9646（X）.2016.03.038