苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合胸腺肽抗HBV作用研究

劉曉瓊　沈宏輝　陳佳欣　柏兆方　王伽伯　肖小河

[摘要]該文主要研究4種苦參堿類(lèi)生物堿分別聯(lián)合胸腺肽在HepG2215細(xì)胞上的抗病毒效果。分別將氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿、槐定堿（濃度均為02 mmol·L-1）聯(lián)合胸腺肽（0025，01 g·L-1）于HepG2215細(xì)胞作用48，72 h后收集細(xì)胞及上清。采用CCK8法測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的（活性）來(lái)評(píng)價(jià)藥物對(duì)HepG2215細(xì)胞的毒性作用；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定實(shí)驗(yàn)組上清液中HBsAg，HBeAg的含量；采用熒光定量PCR法分別檢測(cè)細(xì)胞上清和胞內(nèi)HBV DNA水平；采用CBA方法檢測(cè)上清液中細(xì)胞因子IFNα的表達(dá)量。結(jié)果顯示，單獨(dú)胸腺肽0025～04 g· L-1對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，在此濃度范圍內(nèi)聯(lián)合02 mmol·L-1苦參堿類(lèi)生物堿對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性；苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合胸腺肽抗HBV效果優(yōu)于單獨(dú)用堿或胸腺肽；單獨(dú)0025 g· L-1胸腺肽組對(duì)胞內(nèi)HBV DNA的抑制效果優(yōu)于單獨(dú)01 g· L-1胸腺肽組，而對(duì)于上清HBeAg的抑制效果則相反；01 g· L-1胸腺肽聯(lián)合堿和0025 g· L-1胸腺肽聯(lián)合堿抗HBV效果相當(dāng)，4個(gè)生物堿和胸腺肽聯(lián)合抗HBV效果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；總體來(lái)看，72 h抗HBV效果優(yōu)于48 h（P<005）；聯(lián)合用藥之后IFNα的分泌量升高，和其他4個(gè)指標(biāo)的變化成正相關(guān)（P<005）。結(jié)果表明，氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿、槐定堿聯(lián)合胸腺肽可通過(guò)促進(jìn)IFNα的表達(dá)來(lái)抑制HepG2215細(xì)胞HBsAg，HBeAg的分泌和HBV DNA的復(fù)制，進(jìn)而促進(jìn)抗病毒作用。

[關(guān)鍵詞]胸腺肽；苦參堿類(lèi)生物堿；HepG2215細(xì)胞株；乙肝病毒

[Abstract]To investigate the antiviral effect of thymopolypeptides combined with 4 kinds of matrine type alkaloids on HepG2215 cells， oxymatrine， sophocarpidine， sophocarpine， and sophoridine （at concentration of 02 mmol·L-1 respectively） were respectively combined with thymopolypeptides （0025， 01 g·L-1）， and after 48 h and 72 h treatment on HepG2215 cells， the cells and supernatants were collected The cells activity in various groups was determined by CCK8 method to evaluate the toxic effects of the drugs on HepG2215 cells Enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） was used to determine HBeAg and HBsAg levels in cellular supernatants HBV DNA levels in cellular supernatants andcells were quantified with fluorogenic quantitative PCR method； and the expression level of IFNα in supernatants was detected with CBA method The results indicated that single thymopolypeptides at 002504 g·L-1 had no toxicity to cells Thymopolypeptides in this concentration range combined with 02 mmol·L-1 matrine type alkaloids also had no toxicity to cells AntiHBV activity of drug combination was better than that of alkali or thymopolypeptides alone Thymopolypeptides at 0025 g·L-1 had better inhibitory effect than thymopolypeptides at 01 g·L-1 on intracellular HBV DNA expression， but the inhibitory effect on supernatant HBeAg level was on the contrary AntiHBV activity was similar between alkaloids combined with 01 g·L-1and alkaloids combined with 0025 g·L-1 There was no statistical difference in antiHBV effect between various combined groups （P<005） In general， 72 h antiHBV effect was better than 48 h antiHBV effect （P<005） The expression of IFNα was increased after drug combination， with positive correlation to the changes of other four indicators （P<005） In conclusion， oxymatrine， sophocarpidine， sophocarpine and sophoridine combined with thymopolypeptides could inhibit HBsAg and HBeAg secretion in HepG2215 cells and HBV DNA replication， and further promote the antiviral effect by promoting the expression of IFNα

[Key words]thymopolypeptides； matrine type alkaloids； HepG2215 cells； hepatitis B virus

doi：10.4268/cjcmm20160719

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的傳染性疾病，其發(fā)病機(jī)制與機(jī)體免疫功能低下和免疫調(diào)節(jié)紊亂有關(guān)[1]。目前乙肝的治療主要是以核苷（酸）類(lèi)似物、干擾素等抗病毒藥物為主，但是長(zhǎng)期用藥容易導(dǎo)致病毒產(chǎn)生耐藥機(jī)制，使HBV難以被徹底清除。胸腺肽作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，對(duì)腫瘤和慢性乙肝有一定的療效[2]；體外實(shí)驗(yàn)研究已證實(shí)胸腺肽α1（Tα1）能顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HBsAg和HBeAg的濃度[3]，具有一定的體外抗病毒活性。但是胸腺肽效果不強(qiáng)，單獨(dú)使用胸腺肽難以達(dá)到完全清除HBV的目的?？鄥A類(lèi)生物堿是從山豆根、苦參、苦豆子類(lèi)中草藥中提取分離出來(lái)的單體化合物，主要包括氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿、槐定堿，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，以氧化苦參堿為代表的苦參堿類(lèi)生物堿具有保肝降酶、免疫調(diào)節(jié)以及抗乙肝病毒的作用，其免疫調(diào)節(jié)和抗病毒作用備受關(guān)注[45]。胸腺肽和苦參堿類(lèi)生物堿的抗HBV機(jī)制不同于核苷類(lèi)藥物，前者調(diào)控患者的免疫，后者具有多種生物學(xué)效應(yīng)，因此可以考慮從胸腺肽聯(lián)合苦參堿類(lèi)生物堿入手開(kāi)展抗HBV尤其是耐藥株的治療，從而加強(qiáng)胸腺肽治療慢性乙肝的療效。由于目前尚未見(jiàn)到有關(guān)胸腺肽聯(lián)合苦參堿類(lèi)生物堿抗HBV的報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)在細(xì)胞水平上對(duì)其聯(lián)合應(yīng)用后的抗HBV效果進(jìn)行研究。

1材料

HepG2215細(xì)胞株由北京市解放軍第302醫(yī)院實(shí)驗(yàn)技術(shù)保障中心贈(zèng)與。

氧化苦參堿，苦參堿，槐果堿，槐定堿（陜西昂盛生物醫(yī)藥科技有限公司，純度>98%）；DMEM培養(yǎng)液，胎牛血清FBS，G418（美國(guó)GIBCO公司）；胰蛋白酶和二甲基亞砜（美國(guó)Sigma公司）；Cell Counting Kit8檢測(cè)試劑盒（日本同仁化學(xué)研究所，批號(hào)JE914）；注射用胸腺肽（湖南科倫制藥有限公司，批號(hào)13111272B）；HBsAg 和HBeAg檢測(cè)試劑盒（北京科衛(wèi)臨床診斷試劑有限公司，批號(hào)分別為201410003，201501001）；乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒（北京鑫諾美迪基因檢測(cè)技術(shù)有限公司）；96 孔板，24孔板，細(xì)胞培養(yǎng)瓶（康寧公司）；Human IFNα Flex Set （美國(guó)BD公司，批號(hào)560379）。

酶標(biāo)儀（BioTek Synergy H1 H1MFD，美國(guó)）；二氧化碳培養(yǎng)箱（NAPCO Model 5410，美國(guó)）；臺(tái)式低速離心機(jī)（TD5A，湖南赫西儀器裝備有限公司）；常規(guī)倒置顯微鏡（上海澤權(quán)儀器設(shè)備有限公司）；臺(tái)式低速離心機(jī)（湖南赫西儀器裝備有限公司）；超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司）； FACS Calibur Flow Cytometry Syatem（BD 公司） 。

2方法

21細(xì)胞培養(yǎng)

HepG2215細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10%肽牛血清的DMEM培養(yǎng)基（含青霉素100 U·mL-1，鏈霉素100 U·mL-1，G418 400 mg·L-1）中，置于37 ℃，5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱。

22CCK8法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的毒性

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2215細(xì)胞，以2×105個(gè)/mL接種100 μL于96孔板，24 h后加入不同濃度藥物，氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿、槐定堿選擇02 mmol·L-1，胸腺肽選擇0025，005，01，02，04 g· L-1，設(shè)置單獨(dú)生物堿組、單獨(dú)胸腺肽組以及兩者聯(lián)合組，每個(gè)藥物濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，置于37 ℃，5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱培養(yǎng)72 h后，吸出上清，每孔加入含10% CCK8的培養(yǎng)基100 μL，37 ℃孵育1 h，用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm的吸光度（A）。設(shè)置空白對(duì)照和細(xì)胞對(duì)照，實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。用以下公式計(jì)算不同濃度藥物作用的細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率=（A實(shí)驗(yàn)孔-A空白孔） /（A對(duì)照孔-A空白孔）×100%。

23藥物體外抗HBV效果

231HBV DNA的檢測(cè)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HepG2215細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)瓶后轉(zhuǎn)種于24孔培養(yǎng)板上。細(xì)胞濃度稀釋為2×105個(gè)/mL，每孔1 mL細(xì)胞，24 h后加入不同濃度的藥物，氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿、槐定堿選擇02 mmol·L-1，胸腺肽選擇0025，01 g· L-1，濃度設(shè)置均根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及參考文獻(xiàn)，設(shè)置單獨(dú)生物堿組、單獨(dú)胸腺肽組以及兩者聯(lián)合組，每個(gè)藥物濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，設(shè)置不加藥的對(duì)照孔，每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。48，72 h收集上清培養(yǎng)液和細(xì)胞，收集的細(xì)胞上清用于HBsAg，HBeAg和HBV DNA的檢測(cè)，用PBS洗3遍細(xì)胞，加入500 μL PBS，將培養(yǎng)板凍于-80 ℃冰箱，反復(fù)凍融3次，高速離心，取上清，檢測(cè)HBV DNA。

232HBsAg和HBeAg的檢測(cè)按231項(xiàng)操作收集的細(xì)胞上清液，用HBsAg及HBeAg診斷試劑盒檢測(cè)HBsAg及HBeAg的表達(dá)，均用ELISA法檢測(cè)。按照試劑盒的說(shuō)明操作，于酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度（A），計(jì)算其抑制率，抑制率=（A對(duì)照孔-A實(shí)驗(yàn)孔）/A對(duì)照孔×100%。

233上清HBV DNA和胞內(nèi)HBV DNA的檢測(cè)按231項(xiàng)操作收集的細(xì)胞上清液，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)HBV DNA，操作按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。用實(shí)驗(yàn)孔與對(duì)照孔的滴度計(jì)算其抑制率，抑制率=（對(duì)照孔滴度-實(shí)驗(yàn)孔滴度） /對(duì)照孔滴度×100%。

234CBA法檢測(cè)IFNα的表達(dá)水平將待檢樣品從-20 ℃冰箱中取出，置于37 ℃復(fù)蘇30 min，1 500 r·min-1離心5 min，吸取上層超懸物 50 μL 置于待檢管，同時(shí)加入50 μL捕獲微球，50 μL PE檢測(cè)試劑，室溫、避光孵育3 h。加入1 mL洗液，1 500 r·min-1離心5 min，棄上清，加入300 μL洗液上機(jī)。使用 BD Cell Quest 檢測(cè)，將標(biāo)準(zhǔn)品和待檢品捕獲數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)入 BD CBA 軟件，劃出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和分析得出待檢品的結(jié)果。

24相互作用分析

用金正均Q值法判斷藥物相互作用程度。Q=Ea+b/（Ea+Eb-Ea×Eb），Ea+b為合并用藥的抑制率，Ea，Eb分別為A藥和B藥單獨(dú)用藥時(shí)的抑制率，式中分子代表實(shí)測(cè)合并效應(yīng)，分母代表期望合并效應(yīng)，Q即二者的比值。Q<085為拮抗（-），085≤Q<115為相加（+），Q≥115為協(xié)同（）。

25統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 200軟件，應(yīng)用配比t檢驗(yàn)、相關(guān)分析和Oneway ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。如果P<005，數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；反之，則沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3結(jié)果

31藥物對(duì)HepG2215細(xì)胞的細(xì)胞毒性

采用CCK8法研究藥物對(duì)HepG2215細(xì)胞的毒性作用，結(jié)果見(jiàn)圖2，單獨(dú)胸腺肽0025～04 g·L-1和其聯(lián)合02 mmol·L-1苦參堿類(lèi)生物堿對(duì)HepG2215細(xì)胞存活率都在90%以上，說(shuō)明所選濃度對(duì)細(xì)胞正常生長(zhǎng)無(wú)顯著性影響。

32胸腺肽和苦參堿類(lèi)生物堿單獨(dú)給藥及聯(lián)合給藥的抗HBV效果比較

321苦參堿類(lèi)生物堿和胸腺肽聯(lián)合應(yīng)用的抗HBV效果優(yōu)于單藥氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿和槐定堿聯(lián)合胸腺肽的抗HBV效果見(jiàn)圖3，表1。當(dāng)苦參堿類(lèi)生物堿分別聯(lián)合0025 g·L-1胸腺肽時(shí)，給藥48 h后，氧化苦參堿聯(lián)合胸腺肽組對(duì)上清HBsAg和HBeAg抑制率均高于單用生物堿或胸腺肽，4個(gè)生物堿分別聯(lián)合胸腺肽對(duì)上清HBV DNA抑制率均高于單用生物堿或胸腺肽；72 h后4個(gè)生物堿聯(lián)合用藥的HBsAg，HBeAg，上清HBV DNA抑制率都顯著高于相應(yīng)的單用生物堿或胸腺肽。當(dāng)苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合01 g·L-1胸腺肽時(shí)，48 h后氧化苦參堿、苦參堿分別聯(lián)合胸腺肽組的上清HBV DNA抑制率均高于相應(yīng)的單用生物堿或胸腺肽組，4個(gè)生物堿分別聯(lián)合胸腺肽的HBsAg，HBeAg，胞內(nèi)HBV DNA抑制率都顯著高于相應(yīng)的單用生物堿或胸腺肽；72 h后4個(gè)生物堿聯(lián)合用藥的HBsAg，HBeAg，上清HBV DNA，胞內(nèi)HBV DNA抑制率都顯著高于相應(yīng)的單用生物堿或胸腺肽。結(jié)果顯示苦參堿類(lèi)生物堿氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿和槐定堿聯(lián)合胸腺肽的抗HBV效果顯著優(yōu)于單用生物堿或胸腺肽。

322苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合不同濃度胸腺肽的抗HBV效果給藥48 h后，單獨(dú)01 g·L-1胸腺肽對(duì)胞內(nèi)HBV DNA的抑制率高于單獨(dú)0025 g·L-1胸腺肽；72 h時(shí)，單獨(dú)0025 g·L-1胸腺肽對(duì)HBsAg抑制率、胞內(nèi)HBV DNA抑制率高于單獨(dú)01 g·L-1胸腺肽。

苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合01 g·L-1胸腺肽對(duì)HBeAg抑制率高于其聯(lián)合0025 g·L-1胸腺肽；但是苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合0025 g·L-1胸腺肽對(duì)上清HBV DNA抑制率高于其聯(lián)合01 g·L-1胸腺肽。

323不同苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合胸腺肽的抗HBV效果比較當(dāng)苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合0025 g·L-1胸腺肽時(shí)，給藥48 h后，苦參堿對(duì)上清HBV DNA抑制率和HBeAg抑制率高于氧化苦參堿；給藥72 h時(shí)，氧化苦參堿對(duì)上清HBV DNA抑制率低于其他生物堿，苦參堿對(duì)HBeAg抑制率低于其他生物堿。

當(dāng)苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合01 g·L-1胸腺肽時(shí)，給藥48 h后，槐定堿對(duì)HBsAg抑制率高于表抗；給藥72 h后，氧化苦參堿對(duì)胞內(nèi)HBV DNA抑制率、HBsAg抑制率、HBeAg抑制率低于苦參堿。

3242個(gè)時(shí)間點(diǎn)的比較當(dāng)苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合0025 g·L-1胸腺肽時(shí)，72 h的苦參堿和槐果堿對(duì)上清HBV DNA，HBsAg，HBeAg抑制率高于48 h；當(dāng)苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合01 g·L-1胸腺肽時(shí)，72 h后4個(gè)生物堿對(duì)上清HBV DNA抑制率和胞內(nèi)HBV DNA抑制率高于48 h后。

33細(xì)胞上清中IFNα的表達(dá)

各組IFNα的表達(dá)量見(jiàn)表2，48 h 02 mmol·L-1生物堿聯(lián)合0025 g·L-1胸腺肽組的IFNα分泌量高于單獨(dú)胸腺肽組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<005），02 mmol·L-1生物堿聯(lián)合0025 g·L-1胸腺肽組的IFNα分泌量高于聯(lián)合01 g·L-1胸腺肽組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；72 h所有的聯(lián)合用藥組的IFNα分泌量高于單獨(dú)用藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；各時(shí)間點(diǎn)不同生物堿聯(lián)合用藥組之間無(wú)顯著性差異。

IFNα與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析見(jiàn)表3，IFNα的表達(dá)變化和上清HBV DNA，胞內(nèi)HBV DNA，上清HBsAg，上清HBeAg的變化呈正相關(guān)性。

4討論

HepG2215細(xì)胞株是1986年Sureau等[6]用克隆的HBVDNA轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞HepG2建立的細(xì)胞株，該細(xì)胞株攜帶有HBV基因組，能夠模擬體內(nèi)肝細(xì)胞復(fù)制、組裝和分泌HBV的過(guò)程，持續(xù)穩(wěn)定地高水平分泌 HBsAg，HBeAg和乙肝病毒Dane顆粒， 是一個(gè)研究HBV生命活動(dòng)的良好細(xì)胞系。HepG2215細(xì)胞出現(xiàn)后，很快應(yīng)用于HBV致病機(jī)制和抗HBV藥物評(píng)價(jià)研究，得到國(guó)內(nèi)外廣泛認(rèn)可，一直應(yīng)用至今[79]。HBV感染機(jī)體后通過(guò)其基因組與人體肝細(xì)胞整合來(lái)持續(xù)產(chǎn)生HBV，HepG2215細(xì)胞與此類(lèi)似，同時(shí)還具有HepG2的穩(wěn)定生長(zhǎng)特性所以易于體外培養(yǎng)。因此，雖然HepG2215的來(lái)源細(xì)胞HepG2是腫瘤細(xì)胞，但是并不影響其HBV相關(guān)研究。

胸腺肽是從健康動(dòng)物組織中提取出來(lái)的天然多肽，具有增強(qiáng)和調(diào)節(jié)人體免疫功能的作用。用于治療各種原發(fā)性或繼發(fā)性T細(xì)胞缺陷病，某些自身免疫性疾病，各種細(xì)胞免疫功能低下的疾病及腫瘤的輔助治療[10]。由于胸腺肽能夠促進(jìn) T 細(xì)胞免疫功能的恢復(fù)[11]，而且胸腺肽增加乙肝患者抗病毒蛋白的合成，所以胸腺肽用于免疫治療在臨床上受到重視。據(jù)報(bào)道，很多中藥比如山豆根、艾葉、白術(shù)可以誘生干擾素[12]，而干擾素有直接抗病毒作用[13]。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)苦參堿類(lèi)生物堿可以誘導(dǎo)IFNα的A，B分別為48，72 h上清HBV DNA抑制率；C，D分別為48，72 h胞內(nèi)HBV DNA抑制率；E，F(xiàn)分別為48，72 h HBsAg抑制率；G，H分別為48，72 h HBeAg抑制率。聯(lián)合用藥1組. 02 mmol·L-1苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合0025 g·L-1胸腺肽；聯(lián)合用藥2組. 02 mmol·L-1苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合01 g·L-1。與單獨(dú)胸腺肽組比較1）P<005，與單獨(dú)生物堿組比較2）P<005。

表達(dá)，聯(lián)合胸腺肽之后，IFNα的表達(dá)量增加，IFNα的變化和其他指標(biāo)呈正相關(guān)性，提示胸腺肽和苦參堿類(lèi)生物堿單獨(dú)或者聯(lián)合用藥可能是通過(guò)促進(jìn)IFNα的表達(dá)來(lái)增強(qiáng)抗病毒效果的。

胸腺肽目前常用于慢性乙型肝炎的臨床治療，但是使用劑量不統(tǒng)一。通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，不同濃度的胸腺肽對(duì)HepG2215細(xì)胞的抗HBV效果不同。在抑制HBeAg方面，單獨(dú)0025 g· L-1胸腺肽的效果優(yōu)于單獨(dú)01 g· L-1胸腺肽，但是對(duì)于胞內(nèi)HBV DNA抑制率，單獨(dú)01 g· L-1胸腺肽效果優(yōu)于單獨(dú)0025 g· L-1胸腺肽。胸腺肽不同濃度在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)上的不同效果可知胸腺肽不同劑量對(duì)機(jī)體反應(yīng)功能的調(diào)節(jié)也不同。這提示，在今后的臨床合理應(yīng)用中，針對(duì)不同疾病不同表征的用藥劑量及規(guī)律，需要根據(jù)病人體質(zhì)和病情的發(fā)展來(lái)研究和探討。

臨床研究表明采用胸腺肽聯(lián)合干擾素或核苷（酸）類(lèi)似物治療慢性乙肝具有確切療效[1416] ，體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)氧化苦參堿和拉米夫定聯(lián)合用藥能夠顯著提高HBV的抑制水平[17]，氧化苦參堿可能會(huì)抑制耐藥HBV的復(fù)制，從而和核苷類(lèi)藥物形成互補(bǔ)關(guān)系來(lái)協(xié)同抗病毒。但對(duì)于那些對(duì)核苷類(lèi)似物容易產(chǎn)生耐藥性以及對(duì)干擾素的治療無(wú)效的慢性乙型肝炎患者來(lái)說(shuō)，該療法仍有一定的局限性。苦參堿類(lèi)藥品聯(lián)合胸腺肽較少運(yùn)用于實(shí)際臨床治療中，但是其對(duì)慢性乙型肝炎和腫瘤的預(yù)后治療還是有一定療效[1820]。本實(shí)驗(yàn)中，2個(gè)濃度的胸腺肽聯(lián)合苦參堿類(lèi)生物堿之后的抗HBV效果基本相當(dāng)，且都優(yōu)于單獨(dú)胸腺肽的效果。這提示在臨床用藥中，對(duì)于不宜接受干擾素或核苷（酸）類(lèi)似物治療的病人，可以嘗試用苦參堿類(lèi)藥品聯(lián)合胸腺肽進(jìn)行抗病毒治療。

綜上所述，苦參堿類(lèi)生物堿聯(lián)合胸腺肽抗HBV效果優(yōu)于單獨(dú)用藥，其抗病毒機(jī)制可能與誘導(dǎo)IFNα的表達(dá)有關(guān)。二者的聯(lián)合使用具有較高的臨床研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景。此外，苦參堿類(lèi)生物堿無(wú)論是單獨(dú)還是聯(lián)合用藥，其抗病毒機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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