不同廠(chǎng)家及批次麻黃配方顆粒質(zhì)量差異的研究

汪賢梅，張志強(qiáng)，唐 方

（1.天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院中醫(yī)科，天津300052；2.天津紅日藥業(yè)股份有限公司，天津301700）

論著

不同廠(chǎng)家及批次麻黃配方顆粒質(zhì)量差異的研究

汪賢梅1，張志強(qiáng)2，唐 方1

（1.天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院中醫(yī)科，天津300052；2.天津紅日藥業(yè)股份有限公司，天津301700）

目的：考察不同廠(chǎng)家及不同批次麻黃配方顆粒劑質(zhì)量差異。方法：采用紅外光譜（FTIR）法明確麻黃顆粒劑與麻黃對(duì)照藥材成分的相似度；高效液相色譜法（HPLC）對(duì)其主要生物堿成分麻黃堿和偽麻黃堿進(jìn)行含量測(cè)定，分析柱：WondaSil C18（250 mm×4.6 mm,5 μm），流動(dòng)相：乙腈-0.3%磷酸溶液（含0.05%三乙胺）（4∶96，v:v）,流速：1.0 mL·min-1，柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm。結(jié)果：不同廠(chǎng)家各批次麻黃配方顆粒與麻黃對(duì)照藥材紅外特征圖譜的相似度≥92%；不同品牌麻黃顆粒劑中，麻黃堿和偽麻黃堿含量存在顯著性差異（P＜0.01）；同廠(chǎng)家不同批次麻黃顆粒劑中麻黃堿和偽麻黃堿含量間存在差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論：不同廠(chǎng)家、同廠(chǎng)家不同批次麻黃配方顆粒劑中麻黃堿和偽麻黃堿含量存在顯著差異。

麻黃配方顆粒劑；紅外光譜；高效液相色譜法；麻黃堿；偽麻黃堿

中藥配方顆粒是一種有別于傳統(tǒng)中藥飲片的新型制劑，通過(guò)現(xiàn)代制藥技術(shù)制成的單味中藥制劑[1]。目前我國(guó)批復(fù)試點(diǎn)生產(chǎn)中藥配方顆粒的企業(yè)共6家，均已具備獨(dú)立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和工藝規(guī)范。該產(chǎn)品與傳統(tǒng)飲片水煎劑相比，其便于攜帶、儲(chǔ)存、調(diào)配等優(yōu)勢(shì)，正逐漸受到醫(yī)療市場(chǎng)的認(rèn)可、推廣與使用。但由于配方顆粒劑生產(chǎn)企業(yè)缺乏統(tǒng)一、規(guī)范化生產(chǎn)工藝及統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致同品種存在規(guī)格不一、等效劑量不一等問(wèn)題。目前有5家企業(yè)生產(chǎn)的麻黃配方顆粒劑在醫(yī)療市場(chǎng)流通，但尚未有對(duì)不同廠(chǎng)家及同廠(chǎng)家不同批次間樣品比較的報(bào)道。本試驗(yàn)選取其中3個(gè)企業(yè)共6批次的麻黃配方顆粒劑，通過(guò)紅外光譜技術(shù)對(duì)其進(jìn)行定性鑒別，并采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定其主要有效成分麻黃堿和偽麻黃堿的含量，以比較其存在的差異，為產(chǎn)品質(zhì)量控制提供依據(jù)，也為不同品牌配方顆粒劑在臨床中交互應(yīng)用提供便利。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 Spectrum Two IR（PerkinElmer公司）；FW-5壓片機(jī)（天津博天勝達(dá)科技發(fā)展有限公司）；島津LC-2010AHT高效液相色譜儀【四元泵、SPD-10AVP紫外檢測(cè)器、COT-10AVP柱溫箱、WondaSil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm）（島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司）】。

1.1.2 試藥及試劑 鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào):171241-201007）、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（批號(hào): 171237-201208）由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；草麻黃對(duì)照藥材（批號(hào):121051-201005）由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。甲醇、乙腈均為色譜純（賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司），屈臣氏蒸餾水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司），其它試劑均為市售分析純。麻黃配方顆粒劑分別購(gòu)自天津紅日康仁堂（KRT）藥業(yè)銷(xiāo)售有限公司，批號(hào):14006411（KRT1）、14017809（KRT2）；四川新綠色（LS）藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，批號(hào):13070157（LS1）、14030117（LS2）；江陰天江（TJ）藥業(yè)有限公司，批號(hào):1309118（TJ1）、1403125（TJ2）。樣品基源均標(biāo)注為草麻黃。

1.2 方法

1.2.1 FTIR （1）儀器參數(shù):光譜范圍4000～400cm-1，分辨率4cm-1，信號(hào)掃描累加次數(shù)4次，自動(dòng)增益,自動(dòng)大氣背景扣除。（2）測(cè)定方法:取樣品粉末（過(guò)9號(hào)篩）約1.5 mg加溴化鉀200 mg，壓片，待測(cè)。每個(gè)樣品取樣4次測(cè)定，求取其平均光譜進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.2.2 HPLC

1.2.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性[2-6]:色譜柱:WondaSil C18（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相:乙腈-0.3%磷酸溶液（含0.05%三乙胺）（4∶96，v:v），流速:1.0 mL·min-1，柱溫:30℃，檢測(cè)波長(zhǎng):210 nm。

1.2.2.2 對(duì)照品溶液制備:取鹽酸麻黃堿對(duì)照品和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品，精密稱(chēng)定，加甲醇制成1 mL約含鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿各40 μg的混合對(duì)照品溶液，備用。

1.2.2.3 供試品溶液制備:取麻黃配方顆粒劑粉末0.25 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入1.44%磷酸溶液50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理（功率600 W，頻率50 kHz）20 min，冷卻，再稱(chēng)定質(zhì)量，用1.44%磷酸溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.2.2.4 專(zhuān)屬性試驗(yàn):分別取對(duì)照品溶液10 μL和供試品溶液5 μL，按照“1.2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。

1.2.2.5 線(xiàn)性范圍考察:精密吸取對(duì)照品貯備液分別以 1、2、4、6、8、10、12、14、16 μL進(jìn)樣，按照“1.2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。

1.2.2.6 精密度試驗(yàn):取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿混合對(duì)照品溶液，按照“1.2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10 μL，記錄峰面積和保留時(shí)間。

1.2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn):取廠(chǎng)家KRT1麻黃配方顆粒劑粉末6份，按“1.2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“1.2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10 μL測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算含量。

1.2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn):取廠(chǎng)家TJ1麻黃顆粒劑供試品溶液，按照“1.2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣10 μL測(cè)定，記錄峰面積和保留時(shí)間。

1.2.2.9 加樣回收率試驗(yàn):取已測(cè)知含量的廠(chǎng)家KRT1麻黃顆粒劑粉末6份，精密稱(chēng)定，分別精密加入一定量的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品溶液，按“1.2.2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按照“1.2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣10 μL測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算回收率。

1.2.2.10 樣品含量測(cè)定:6批次麻黃配方顆粒劑，按“1.2.2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按照“1.2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，各進(jìn)樣5 μL進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以s表示，組內(nèi)比較采用t檢驗(yàn)，組間比較用單因素方差分析，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FTIR結(jié)果 不同廠(chǎng)家、不同批次麻黃配方顆粒與草麻黃對(duì)照藥材（r=1）紅外特征圖譜相比較,相似度均不低于92%，即3個(gè)廠(chǎng)家麻黃配方顆粒劑在大生產(chǎn)過(guò)程中，其有效藥用成分保留相對(duì)完整（圖1）。

圖1 配方顆粒劑與對(duì)照藥材紅外圖譜比較Fig 1 Comparison of IR fingerprint about formula particles and contrast medicinal material

2.2 HPLC

2.2.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn)結(jié)果 按照HPLC測(cè)定方法及相應(yīng)濃度，繪制色譜圖，見(jiàn)圖2。由圖可知，該色譜條件下，鹽酸麻黃堿保留時(shí)間為19.726 min，鹽酸偽麻黃堿保留時(shí)間為21.649 min，峰形良好，且與其他峰分離較好。

圖2 鹽酸麻黃堿對(duì)照品（A）、混合對(duì)照品（B）及其樣品(C)HPLC圖Fig 2 HPLC chromatograms of reference substance(A),mixed reference substances(B)and sample(C)

2.2.2 線(xiàn)性范圍考察結(jié)果 以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的回歸方程分別是:Y= 108 242X+2 046.2（r=0.999 7，n=7）；Y=104 371X+ 14 018（r=0.999 9，n=7）。表明鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿分別在0.05～0.74 μg、0.04～0.71 μg成良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.2.3 精密度試驗(yàn)結(jié)果 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的保留時(shí)間的RSD分別是0.76%和0.83%，峰面積的RSD分別是1.22%和0.91%，均小于2%，說(shuō)明儀器的精密度良好。

2.2.4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的RSD（n=6）分別是1.01%和0.65%,表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的保留時(shí)間的RSD分別是0.66%和0.71%，峰面積的RSD分別為0.22%和0.52%（n=7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿平均回收率分別為96.27%、103.37%，RSD分別為0.40%和1.00%（n=6）。

2.2.7 樣品含量結(jié)果 如表1所示，不同品牌麻黃顆粒劑中，麻黃堿和偽麻黃堿含量存在顯著性差異（P＜0.01）；同廠(chǎng)家不同批次麻黃顆粒劑中麻黃堿和偽麻黃堿含量間存在差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。

表1 不同廠(chǎng)家及批次麻黃配方顆粒劑中麻黃堿和偽麻黃堿含量（mg·g-1）（n=4）Tab 1 The content of ephedrine and d-pseudephedrine in mahuang formula granules from different factories and batches（mg·g-1）（n=4）

3 討論

本研究首先采用FTIR測(cè)定麻黃顆粒劑與對(duì)照藥材成分的相似度，結(jié)果顯示，3個(gè)廠(chǎng)家6個(gè)批次麻黃配方顆粒與麻黃對(duì)照藥材的紅外特征圖譜相似度≥92%，提示各廠(chǎng)家在藥用有效成分保留上相對(duì)完整，且同一廠(chǎng)家不同批次麻黃顆粒劑紅外特征圖譜相似度比較相似度差異＜10%，提示各廠(chǎng)家質(zhì)量控制相對(duì)穩(wěn)定。雖然麻黃配方顆粒保留了麻黃飲片的水煎液的物質(zhì)基礎(chǔ)，但僅以大生產(chǎn)過(guò)程中成分保留相對(duì)完整作為評(píng)價(jià)麻黃配方顆粒達(dá)到“全成分轉(zhuǎn)移”的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)并不十分完善。

為此，在藥用有效成分對(duì)比分析基礎(chǔ)上，利用HPLC技術(shù)對(duì)不同廠(chǎng)家及批次麻黃配方顆粒樣品進(jìn)行了主成分含量比較。結(jié)果顯示，不同廠(chǎng)家間及部分廠(chǎng)家不同批次間麻黃堿和偽麻黃堿含量均存在差異，這與文獻(xiàn)報(bào)道[7-8]由于工藝不同導(dǎo)致配方顆粒劑主成分含量存在顯著性差異相吻合。另外，各廠(chǎng)家顆粒劑在外觀(guān)性狀上也存在差異。以上結(jié)果證實(shí)工藝間缺乏統(tǒng)一性、規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)是影響各廠(chǎng)家相同產(chǎn)品主成分含量不一，不同廠(chǎng)家同產(chǎn)品間難以交互通用的主要因素。提示以中藥紅外指紋圖譜對(duì)配方顆粒成分結(jié)構(gòu)給予的定性鑒別，與高效液相色譜法對(duì)配方顆粒主成分含量的定量分析相結(jié)合是完善質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，保證產(chǎn)品質(zhì)量的必要措施。

2010版《中國(guó)藥典》收載的麻黃為草麻黃Ephedra sinica Stapf、中麻黃 Ephedra intermedia Schrenk et C.A.Mey.或木賊麻黃Ephedra equisetina Bge.的干燥草質(zhì)莖[9]，目前市售麻黃藥材多把3種麻黃混同使用，以草麻黃為主。大量文獻(xiàn)報(bào)道[10-12]，中藥材的產(chǎn)地、種屬等都會(huì)影響藥物主成分含量。本課題前期研究結(jié)果證實(shí):麻黃種屬與主成分麻黃堿、偽麻黃堿含量的變化呈顯著正相關(guān)，且種屬間存在極顯著差異（P＜0.01）。由此提示，制定配方顆粒劑相關(guān)企業(yè)統(tǒng)一的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)和工藝規(guī)范，是提高配方顆粒劑質(zhì)量的重要措施。而科學(xué)規(guī)范地確認(rèn)、選擇藥材資源亦是確保麻黃配方顆粒劑主成分含量相對(duì)穩(wěn)定的又一重要措施。

[1]馬露，邵利潔，唐方.厚樸配方顆粒藥效學(xué)評(píng)價(jià)方法初探[J].中國(guó)中藥雜志，2014，39（8）:1490

[2]馮欣，周剛，王茜，等.HPLC法測(cè)定藏藥五味甘露藥浴顆粒中槲皮素、山柰素和鹽酸麻黃堿[J].中成藥，2015，37（1）:120

[3]劉睿，王寧，劉志輝.RP-HPLC同時(shí)測(cè)定宣肺止咳口服液中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿及苦杏仁苷含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（16）:91

[4]太成梅，那微，趙曉霞，等.HPLC法測(cè)定小兒肺熱咳喘口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2010，11（5）:380

[5]宋玉國(guó)，張新茹，李秀芬，等.HPLC測(cè)定清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2014，16（4）:319

[6]曾永長(zhǎng)，張莉，曾曉燕，等.HPLC法測(cè)定馥感啉口服液中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2015，26（2）:252

[7] 蔡樂(lè)，劉萍，郭桂明，等.不同廠(chǎng)家茜草配方顆粒中大葉茜草素含量的比較[J].北京中醫(yī)藥，2011，30（11）:856

[8]陳曉鵬，鄂秀輝，夏忠庭，等.HPLC法同時(shí)定量測(cè)定養(yǎng)血清腦顆粒中7個(gè)主要成分[J].中成藥，2013，35（9）:1921

[9]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:300-301

[10]游元元，萬(wàn)德光，楊文宇，等.HPLC法比較不同產(chǎn)地桑葉藥材品質(zhì)差異[J].中國(guó)藥房，2010，12（35）:3314

[11]盛萍，張立福，時(shí)曉娟，等.麻黃藥材中麻黃堿含量與產(chǎn)地生態(tài)環(huán)境關(guān)系的初步研究[J].中醫(yī)藥信息，2014，2（2）:1

[12]姜秋，李慧芬，梁曉，等.HPLC同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地遠(yuǎn)志飲片中6種寡糖酯類(lèi)成分[J].中成藥，2015，37（2）:360

（2015-09-20收稿）

Research on the quality differences of mahuang formula grarules between different manufacturers and batches

WANG Xian-mei1，ZHANG Zhi-qiang2,TANG Fang1
（1.Department of Traditional Chinese Medicine,General Hospital,Tianjin Medical University,Tianjin 300052,China；2.Tianjin Chase Sun Pharmaceutical.,TLD,Tianjin 301700，China）

Objective：To compare qualities of mahuang formula particles from different manufacturers and batches.Methods：First of all，the similarity of contrast medicinal material and mahuang formula granules of different manufacturers was defined by using the FTIR fingerprint.Then content of ephedrine and d-pseudephedrine in mahuang formula granules was determined with HPLC,chromatographic column was WondaSil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),the mobile phase was V(methylcyanide):V(0.3%ammonium dihydrogen phosphate solution including 0.05%triethylamine)=4∶96,flow rates was 1.0 mL·min-1,the temperature was 30℃,and length of detection wave was 210 nm.Results：FTIR showed the similarity of all components between each sample and contrast medicinal material were higher than 92%.Comparison between different manufacturers,there were significant differences between ephedrine and d-pseudephedrine (P＜0.01)；comparison of different batches of the same manufacturer,there were differences of pehedrine and d-pseudephedrine,with statistical significance(P＜0.01,P＜0.05).Conclusion：The contents of ephedrine and d-pseudephedrine of all samples from different manufacturers and different batches are significantly different.

mahuang formula granules;FTIR;HPLC;ephedrine;d-pseudephedrine

R92

A

1006－8147（2016）02-0168-03

汪賢梅(1989-),女，碩士在讀，研究方向：中藥有效成分含量分析；通信作者:唐方,E-mail:zhongyi3599@sina.com。