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    地膚子總黃酮含量測定及其抗氧化活性

    2016-05-14 08:41李培源盧汝梅蘇煒滕明敏郭娜娜吳采穎
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年7期
    關(guān)鍵詞:清除率光度黃酮

    李培源 盧汝梅 蘇煒 滕明敏 郭娜娜 吳采穎

    摘要:研究地膚子不同溶劑提取物的總黃酮含量及其抗氧化活性。用冷浸法得到地膚子乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物。測定了三種提取物的總黃酮含量,并通過測定其對(duì)DPPH自由基的清除能力和還原能力來研究其抗氧化能力。地膚子不同溶劑提取物均表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗氧化性能,其抗氧化能力隨提取物濃度增大而增強(qiáng)。地膚子提取物具有作為天然抗氧化劑的潛力。

    關(guān)鍵詞:地膚子;DPPH;還原能力;抗氧化;總黃酮含量

    地膚(Kochia scoparia)是藜科一年生草本植物,高50-100 am。地膚子為地膚的果實(shí),扁球狀五角星形,直徑1~3 mm,具有清熱利濕、祛風(fēng)止癢等功效,主治小便澀痛、陰癢帶下、風(fēng)疹、濕疹、皮膚瘙癢等疾病。地膚子在民間使用廣泛,但其抗氧化方面的研究鮮見報(bào)道。抗氧劑可以清除人體內(nèi)過量的自由基,預(yù)防動(dòng)脈硬化、關(guān)節(jié)炎、糖尿病、肌肉萎縮和老年癡呆等多種疾病。目前,使用較多的合成抗氧化劑如2.6-二叔丁基4-甲基苯酚等具有較多副作用,因此近年來科研工作者致力于尋找來源于植物的天然抗氧化劑。本試驗(yàn)通過測定地膚子3種溶劑提取物(乙醇提取物、丙酮提取物和乙酸乙酯提取物)對(duì)DPPH自由基的清除能力和還原能力來對(duì)其抗氧化能力進(jìn)行研究,為地膚子作為一種天然高效抗氧化物的推廣利用提供理論依據(jù)。

    1.材料與方法

    1.1材料、試劑和儀器

    地膚子來源于廣西玉林。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購于百靈威試劑公司(北京)。所有試劑均為分析純。UV1901型紫外可見分光光度計(jì)(北京普析電子科技有限公司)。

    1.2方法

    1.2.1地膚子不同溶劑提取物制備 稱取20 g地膚子粉末,加入200 mL乙醇(95%),冷浸72 h。重復(fù)上述操作3次,合并提取液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑,得到地膚子乙醇提取物(EE)0.8 g,得率為4.0%。采用相同方法,用丙酮及乙酸乙酯提取,得到丙酮提取物(AE)0.6 g和乙酸乙酯提取物(EAE)0.8 g,得率分別為3.0%和4.0%。

    1.2.2地膚子總黃酮含量的測定

    1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精確吸取蘆丁對(duì)照品溶液(1 mg/mL)于10 mL量瓶中,分別加入5%亞硝酸鈉0.4 mL,靜置6 min,加入5%硝酸鋁0.4 mL,靜置6 min。再加入5%氫氧化鈉試液4.0 mL,用95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,靜置15 min,在510nm處測定其吸光度。以吸光度對(duì)溶液濃度進(jìn)行回歸分析,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求出回歸方程。

    2)地膚子提取物總黃酮含量測定。將蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液換為固定濃度提取物溶液,同上操作測定其吸光度,多次測量求平均值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮的蘆丁當(dāng)量,總黃酮含量以每克干物質(zhì)的蘆丁當(dāng)量(mg)表示,并計(jì)算提取得率。

    1.2.3地膚子提取物對(duì)DPPH 自由基的清除能力測定取不同濃度地膚子提取物溶液(0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0 mg/mL)加入8 mL DPPH(0.004%)溶液中。在最大波長處(517 nm)測定其吸光度,直到平衡為止。清除率計(jì)算公式為s=(1-A樣品)/A空白×100%。其中,A空白為未加藥液的DPPH溶液的吸光度,A樣品為加入藥液的DPPH溶液的吸光度。

    1.2.4還原能力測定 取上述不同濃度地膚子提取物溶液0.2 mL,加入2.5 mL PBS溶液(pH 7.4),2.5 mL KFe(CN)4(1%)。于50℃恒溫20 min后,加入2.5 mL三氯乙酸溶液(10%),離心10 min。取上清液2.5 mL,加入2.5 mL蒸餾水、0.5 mL FeCl3(1%),混勻。在700 nm處測定其吸光度,以蒸餾水為參比。

    2.結(jié)果與分析

    2.1地膚子提取物總黃酮含量

    以吸光度對(duì)溶液濃度進(jìn)行回歸分析,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程y=9.677 8x+0.016 7(R=0.9992)。根據(jù)線性方程得出地膚子乙醇提取物(EE)、丙酮取物(AE)和乙酸乙酯提取物(EAE)的總黃酮含量測定結(jié)果。結(jié)果表明,3種提取物的總黃酮含量在29.5~43.5 mg/g之間,均具有較高的黃酮含量,具有作為自由基清除劑應(yīng)用的潛力。

    2.2地膚子提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力

    地膚子3種溶劑提取物對(duì)DPPH自由基清除能力的測定結(jié)果如圖1所示。3種提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力均隨其濃度的升高而增強(qiáng)。對(duì)于AE,濃度為0.5和0.8 mg/mL時(shí),清除率分別為27.8%和37.7%,濃度增加到1.2、1.5 mg/mL時(shí),清除率增大為47.9%和57.6%。當(dāng)AE濃度增加到1.8、2.0 mg/mL時(shí),清除率增大到64.8%和70.2%。對(duì)于EAE,當(dāng)濃度從0.5 mg/mL增加到2.0 mg/mL,清除率從23.9%增加到72.4%。

    當(dāng)提取物濃度較低時(shí)(0.5和0.8 mg/mL),AE和EE表現(xiàn)出相近的DPPH自由基清除能力。而在較高提取物濃度(1.8和2.0 mg/mL)時(shí),EE表現(xiàn)出最強(qiáng)的清除能力,在1.8 mg/mL時(shí)清除率為73.6%,在最高濃度2.0 mg_/mL時(shí)清除率為85.8%。結(jié)果表明,地膚子的3種提取物對(duì)于DPPH自由基均具有很強(qiáng)的清除能力。

    2.3不同溶劑提取物EC50值

    EG50代表抗氧化劑對(duì)自由基達(dá)到半抑制時(shí)的質(zhì)量濃度。EG50的數(shù)值越大,則表明抗氧化劑對(duì)自由基的清除能力越強(qiáng)。地膚子3種提取物EE、AE和EAE對(duì)DPPH自由基的EC值分別為1.13、1.28、1.15 mg/mL。因此,3種提取物的EGo值大小順序?yàn)锳E、EAE、EE。即,地膚子不同溶劑提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力順序?yàn)镋E>EAE>AE。

    2.4地膚子提取物的還原能力

    地膚子不同溶劑提取物的還原能力如圖2所示??寡趸瘎┩ㄟ^自身的還原作用給出電子從而達(dá)到清除自由基的效果,還原能力越強(qiáng),則抗氧化性越強(qiáng)。測定結(jié)果以吸光度表示,吸光度越高表示還原能力越強(qiáng)。地膚子3種提取物的還原能力均與提取物濃度呈正相關(guān),即提取物濃度越高,其還原能力越強(qiáng)。對(duì)于AE,濃度為0.5和0.8mg/mL時(shí)吸光度分別為0.29和0.33,濃度為1.0和1.2mg/mL時(shí)吸光度分別為0.46和0.53,當(dāng)濃度增大為1.8和2.0mg/mL時(shí),吸光度分別為0.73和0.89。對(duì)于EE,按濃度由低至高其吸光度分別為0.21、0.41、0.51、0.61、0.63、0.80和0.86,其還原能力隨濃度增大而增強(qiáng)。在較高濃度時(shí)(2.0 mg/mL),3種提取物的還原能力接近,AE、EE和EAE的吸光度分別為0.89、0.86和0.88。

    3.小結(jié)

    本試驗(yàn)測定了常用中藥地膚子不同溶劑提取物的總黃酮含量,并通過DPPH自由基體系和還原能力來研究其抗氧化性能。結(jié)果表明,地膚子不同溶劑提取物對(duì)DPPH自由基均顯現(xiàn)出較強(qiáng)的清除能力,濃度為2.0 mg/mL時(shí)EE的清除率為85.8%。EC值分析結(jié)果表明,不同溶劑提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力順序?yàn)镋E>EAE>AE。不同地膚子提取物均具有很強(qiáng)的還原能力,且還原能力隨提取物濃度增大而增強(qiáng)。研究結(jié)果表明,地膚子不同溶劑提取物,特別是EAE,具有優(yōu)良的清除自由基能力和抗氧化能力,有望作為天然抗氧化劑在工業(yè)上應(yīng)用。

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