MEIA運(yùn)用最新的熒光技術(shù)，被測(cè)物的乙型肝炎病毒檢測(cè)方法的研究現(xiàn)狀

黎燕瓊

【摘要】 目前乙型肝炎病毒（HBV）感染仍是一個(gè)較嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一。全球有近3億HBV攜帶者，我國(guó)占45%，準(zhǔn)確、及時(shí)地檢測(cè)HBV，對(duì)控制HBV傳播、提高診療效果非常重要。隨著HBV檢測(cè)方法的不斷發(fā)展，臨床已廣泛開展與其相關(guān)的檢測(cè)技術(shù)，對(duì)防治HBV感染發(fā)揮了重要作用。目前HBV的檢測(cè)方法主要有電子顯微鏡法、免疫學(xué)法、分子生物學(xué)法。本文對(duì)HBV幾種檢測(cè)方法進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎病毒； 檢測(cè)方法

中圖分類號(hào) R512.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1674-6805（2016）8-0159-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.8.091

濃度通過測(cè)定熒光強(qiáng)度來檢測(cè)，極微的熒光就能被特別的感光結(jié)構(gòu)感應(yīng)到，使其檢測(cè)靈敏度更高。ELISA和MEIA對(duì)HBV血清標(biāo)志物的檢測(cè)均有較高的特異性，但ELISA的敏感性低于MEIA[12]。

化學(xué)發(fā)光微粒免疫檢測(cè)法（CMIA）是目前應(yīng)用較多的化學(xué)發(fā)光法。譚璐[13]報(bào)道ELISA和CMIA靈敏度差別不大，但從自動(dòng)化程度和方法學(xué)角度看CMIA法優(yōu)于ELISA法。

3 分子生物學(xué)法

3.1 HBV DNA檢測(cè)技術(shù)

HBV DNA是HBV具有傳染性和復(fù)制的標(biāo)志，是判斷抗HBV藥物療效的重要指標(biāo)[14-15]。檢測(cè)方法有PCR、支鏈DNA（bDNA）、核酸雜交、雜交捕獲系統(tǒng)、基因芯片技術(shù)。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）采用熒光技術(shù)和閉管檢測(cè)，完全克服了常規(guī)PCR方法操作繁雜，不能準(zhǔn)確定量、產(chǎn)物間的交叉污染、重復(fù)性差和強(qiáng)致癌物溴化乙啶的使用造成的環(huán)境污染[16-18]。目前的試劑盒多采用FQ-PCR進(jìn)行HBV DNA的定量檢測(cè)。bDNA技術(shù)的缺點(diǎn)是放大倍數(shù)少、檢測(cè)范圍窄、敏感性低，不適用于低水平檢測(cè)。袁靜等[19]報(bào)道FQ-PCR用于HBV DNA含量的檢測(cè)靈敏度明顯高于bDNA法。核酸雜交包括斑點(diǎn)雜交和液相雜交?；蛐酒夹g(shù)為近幾年發(fā)展的新技術(shù)，根據(jù)HBV高度保守的特異性基因序列設(shè)計(jì)寡核苷酸探針制備基因芯片，將待測(cè)患者的樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增的同時(shí)進(jìn)行產(chǎn)物熒光標(biāo)記，標(biāo)記產(chǎn)物與基因芯片進(jìn)行雜交，雜交結(jié)果經(jīng)掃描儀讀數(shù)并輸出圖像，然后通過計(jì)算機(jī)分析，從而檢測(cè)樣本是否存在病毒感染[20]。由于基因芯片可以一次性對(duì)大量序列進(jìn)行檢測(cè)分析，具有快速、高通量、并行等特點(diǎn)，解決了傳統(tǒng)核酸印跡雜交技術(shù)自動(dòng)化程度低、檢測(cè)序列少、操作繁雜、效率低的缺點(diǎn)[21]。

3.2 HBV耐藥性檢測(cè)技術(shù)

目前臨床上應(yīng)用的HBV耐藥性檢測(cè)主要是針對(duì)HBV DNA聚合酶P基因的檢測(cè)，鑒別野生型（YMDD）及耐藥突變型（YVDD、YIDD），檢測(cè)結(jié)果可為抗病毒藥物治療中HBV耐藥性的產(chǎn)生提供依據(jù)，以指導(dǎo)臨床用藥和監(jiān)測(cè)病情。常用的檢測(cè)方法有FQ-PCR、核酸雜交和基因芯片技術(shù)等。

3.3 HBV基因分型

常用FQ-PCR、PCR-反向點(diǎn)雜交法（PCR-RDB）、聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（PCR-RFLP）、DNA測(cè)序和基因芯片技術(shù)進(jìn)行HBV基因分型。上述方法各有優(yōu)缺點(diǎn)?；驕y(cè)序除能準(zhǔn)確確定病毒株基因型、亞型外，還能發(fā)現(xiàn)其他方法很難鑒別的重組病毒株，是檢測(cè)病毒基因變異公認(rèn)的金標(biāo)準(zhǔn)，但是技術(shù)要求高，價(jià)格昂貴，操作復(fù)雜，很難常規(guī)開展。實(shí)時(shí)熒光PCR、多位點(diǎn)基因芯片技術(shù)等只能檢測(cè)單一突變位點(diǎn)[22]。劉蒙等[23]用PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)維生素D受體（VDR）Fok I基因的多態(tài)性在慢性乙肝患者的分布，并進(jìn)行基因型分析，認(rèn)為VDR Fok I基因的多態(tài)性與慢性乙肝患者的不同臨床表型存在一定的關(guān)系。王丹等[24]用PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)高遷移率族蛋白B1（HMGB1）第4內(nèi)含子1176G/C多態(tài)性，認(rèn)為HMGB1基因多態(tài)性與HBV感染后原發(fā)性肝癌的發(fā)生有關(guān)聯(lián)。

綜上所述，由于HBV是一種變異較高的病毒，免疫學(xué)方法檢測(cè)的是表型指標(biāo)，而且免疫學(xué)指標(biāo)的出現(xiàn)晚于HBV DNA的出現(xiàn)。隨著對(duì)HBV的不斷深入研究，PCR技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，大大提高了HBV檢測(cè)的準(zhǔn)確度，實(shí)現(xiàn)了對(duì)HBV DNA的定量檢測(cè)，能夠準(zhǔn)確地判斷HBV在體內(nèi)的復(fù)制情況。但是這些檢測(cè)技術(shù)的成本相對(duì)較高，在國(guó)內(nèi)的普及有一定難度。因各種檢測(cè)方法的靈敏度和特異性均不同，在臨床中，醫(yī)生可結(jié)合患者的具體情況進(jìn)行選擇，為提高臨床確診率，必要時(shí)采用多種方法聯(lián)合檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]何林詠，仲曉燕，肖琦.阻斷乙肝妊娠患者母嬰垂直傳播的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012，9（6）：158.

[2]盧雁英，李少芳，趙麗萍，乙肝病毒血清標(biāo)志物與HBV-DNA的檢測(cè)結(jié)果分析[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2013，11（19）：81.

[3]石華，董濤，劉麗紅.乙肝病毒的檢測(cè)進(jìn)展及臨床應(yīng)用[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2014，24（3）：454-455.

[4]崔春霞，解希帝，鄭瑞芬.乙型肝炎病毒的研究進(jìn)展[J].疾病監(jiān)測(cè)與控制雜志，2013，7（4）：229.

[5]冉光義.我國(guó)乙型肝炎病毒檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2011，15（3）：264-265.

[6]王健，閔福援.乙肝病毒血清標(biāo)志物的檢測(cè)方法及其臨床意義[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，28（1）：113-115.

[7]鄭衛(wèi)東，田彩霞，左萬超.1427例乙型肝炎患者PreS1、HBV DNA和HBV-M相關(guān)性分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（7）：802-803.

[8]杜立樹，平龍玉，王際濤，等.HBV-DNA定量與HBV血清學(xué)標(biāo)志物的相關(guān)性探討[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2009，6（25）：147-149.

[9]王榮香，祝建軍，王祖芳.膠體金法快速檢測(cè)血HBV、HIV、HCV、TP在門診患者創(chuàng)傷性操作前檢測(cè)的意義[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20（6）：1419-1420.

[10]王克珍，安社剛，顧培芬.TRFIA與RIA定量檢測(cè)乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志的分析與比較[J].放射免疫學(xué)雜志，2004，17（2）：123.

[11]富宏然.乙肝五項(xiàng)標(biāo)志物兩種方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比觀察[J].牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，30（1）：38.

[12]彭仕芳，傅蕾，譚德明.MEIA法測(cè)定HBV血清標(biāo)志物的臨床應(yīng)用意義[J].中國(guó)感染控制雜志，2007，6（3）：161-163.

[13]譚璐.化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法與酶聯(lián)免疫法測(cè)定乙肝標(biāo)志物的比較[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2008，15（3）：294-295.

[14]雷平.HBV血清標(biāo)志物與HBV-LP及HBV-DNA聯(lián)合檢測(cè)的臨床意義初探[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2013，3（1）：33.

[15]賈紅龍.乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)的臨床應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2015，12（11）：110-112.

[16]孔建新，王保龍.熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)肝病患者HBV DNA[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2002，17（4）：252.

[17]鐘永根.熒光探針定量PCR檢測(cè)HBV DNA臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].中國(guó)醫(yī)師雜志，2003，5（7）：968.

[18]馬洪熹，周淑賢，黃曉，等.FQ-PCR和TRFIA聯(lián)合檢測(cè)乙肝標(biāo)志物的應(yīng)用探討[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2013，11（24）：68-69.

[19]袁靜，馬為民，周伯平，等.熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)與分支鏈DNA信號(hào)擴(kuò)增法檢測(cè)血清HBV DNA的比較[J].廣東醫(yī)學(xué)，2000，21（10）：839.

[20]譚少明，楊友新.分子診斷技術(shù)在乙型肝炎病毒診斷中的應(yīng)用[J].內(nèi)科，2013，8（3）：307-308.

[21]馬麗國(guó)，徐興偉.基因芯片在乙肝病毒檢測(cè)中的應(yīng)用[J].中國(guó)傷殘醫(yī)學(xué)，2013，21（5）：270.

[22]王念躍，孫梅.乙型肝炎實(shí)驗(yàn)室診斷的研究進(jìn)展[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2012，30（11）：870.

[23]劉蒙，趙龍鳳.維生素D受體基因多態(tài)性與慢性乙型肝炎患者的關(guān)聯(lián)研究[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2014，11（12）：22-24.

[24]王丹，鄧春青，趙龍鳳.HMGB1基因多態(tài)性與HBV相關(guān)性肝癌的關(guān)聯(lián)性研究[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2014，11（12）：13-15.

（收稿日期：2015-11-11）