化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測血清中前列腺特異抗原復(fù)合物

周友俊 李嬌霞 程繪珺 楊喬芬 何美瓊 郭麗萍 鄧智勇

摘 要 采用雜交瘤技術(shù)構(gòu)建抗前列腺特異抗原-α1-抗胰凝乳蛋白酶（Prostate specific antigen -α1-antichymotrypsin complex，PSA-ACT）單克隆抗體（單抗）細(xì)胞株，共獲得8株穩(wěn)定分泌PSA-ACT單抗的細(xì)胞株，純化后進(jìn)行免疫特性鑒定并做單抗配對。選擇其中一對單抗，采用辣根過氧化物酶（HRP）催化魯米諾（lumino）-H2O2 化學(xué)發(fā)光體系，建立了測定人血清中PSA-ACT濃度的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析方法（CLEIA）。對包被緩沖液、包被抗體濃度、酶標(biāo)抗體稀釋度、溫育時(shí)間、發(fā)光反應(yīng)時(shí)間和免疫反應(yīng)步驟等實(shí)驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下， PSA-ACT濃度在5～40 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.9943），檢出限為0.53 ng/mL，批內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.6%～6.6%，批間RSD為5.7%～8.0%，回收率為95.4%～104.2%，與游離前列腺特異性抗原F-PSA的交叉反應(yīng)率為0.6%。本方法簡單、穩(wěn)定、靈敏、快速，為開發(fā)檢測PSA-ACT的CLEIA試劑盒奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 前列腺特異抗原； 前列腺癌； 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析； 辣根過氧化物酶