原發(fā)性肝癌彩色多普勒超聲血流分級與微血管生成的關(guān)系

賈叢叢 周瑋 何國濃

[摘要] 目的 探討原發(fā)性肝癌彩色多普勒超聲血流分級與肝癌組織血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、微血管密度（MVD）表達(dá)的關(guān)系。 方法 選擇2012年1月～2015年8月在我院行手術(shù)治療的原發(fā)性肝癌患者80例，彩色多普勒超聲檢查采用美國GE v730型超聲診斷儀，采用免疫組化SP法染色，操作按試劑盒操作說明進(jìn)行，分別進(jìn)行VEGF、MMP-9、CD31染色，CD31反映MVD。 結(jié)果 80例患者，0級12例，Ⅰ級26例，Ⅱ級23例，Ⅲ級19例；Spearman等級相關(guān)分析，超聲血流分級與臨床分期呈正相關(guān)（r=0.489，P<0.05）。隨著超聲血流分級增加，VEGF、MMP-9、MVD表達(dá)呈升高趨勢，各血流分級VEGF、MMP-9、MVD表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），Spearman等級相關(guān)分析VEGF、MMP-9、MVD表達(dá)與超聲血流分級均呈正相關(guān)性（r=0.521、0.589、0.715，P<0.05）。 結(jié)論 超聲血流分級對肝癌病理特征有一定的判斷價值，血流分級與肝癌組織微血管生成密切相關(guān)，是一種安全性高的無創(chuàng)輔助檢查方式。

[關(guān)鍵詞] 原發(fā)性肝癌；血流分級；微血管生成；微血管密度

[中圖分類號] R445.1；R735.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2016）09-0103-03

[Abstract] Objective To explore the relationship between color Doppler ultrasound blood flow liver cancer and liver cancer tissue grading of vascular endothelial growth factor（VEGF）， matrix metalloproteinase-9（MMP-9）， microvessel density（MVD） expression. Methods From January 2012 to August 2015 selected primary liver cancer patients in our hospital surgical treatment of 80 cases， color Doppler ultrasound examination was used by the US GE v730 diagnostic ultrasound， immunohistochemical staining SP was performed， operation press kit operating instructions， respectively VEGF， MMP-9， CD31 stained， CD31 reflected MVD. Results 80 patients， 0 grade 12 cases， Ⅰ grade 26 cases， Ⅱ grade 23 cases， Ⅲ grade 19 cases， Spearman rank correlation analysis， ultrasonic flow grade were positively correlated with the clinical stage（r=0.489， P<0.05）. With the increase of ultrasonic flow grade， VEGF， MMP-9， MVD expression increased， and each flow grade VEGF， MMP-9， MVD expression， the differences were statistically significant（P<0.05）， Spearman rank correlation analysis of VEGF， MMP-9， MVD expression and ultrasonic flow grade were positively correlated（r=0.521， 0.589， 0.715， P<0.05）. Conclusion Ultrasound flow grade pathological features of liver cancer have a certain value judgments， flow grade and tumor tissue angiogenesis is closely related， is a safe， noninvasive examinations way.

[Key words] Hepatocellular carcinoma； Flow grade； Angiogenesis； Microvessel density

肝癌是我國最常見的惡性腫瘤，由于肝癌早期癥狀無特異性，診斷就診時往往已是晚期，患者預(yù)后差。惡性腫瘤對血供有明顯依賴并促進(jìn)微血管生成，豐富的血供使癌細(xì)胞獲得快速生長、轉(zhuǎn)移的條件，加快病變進(jìn)展[1]。影像學(xué)檢查是發(fā)現(xiàn)和診斷肝癌的重要手段，彩色多普勒超聲是一種簡便、快捷、無創(chuàng)、安全的檢查方式，可發(fā)現(xiàn)肝臟占位病變，并通過對肝臟占位病灶內(nèi)血流信號參數(shù)的觀察可以了解腫塊血供[2，3]。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）參與組織中新生血管形成，VEGF、MMP-9高表達(dá)與癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4-6]。本研究對原發(fā)性肝癌患者彩色多普勒超聲血流分級與肝癌組織VEGF、MMP-9、MVD表達(dá)的關(guān)系進(jìn)行分析，探討彩色多普勒超聲在肝癌早期篩查中的作用?，F(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2012年1月～2015年8月在我院行手術(shù)治療的原發(fā)性肝癌患者80例，均經(jīng)CT、MRI等影像學(xué)檢查、病理活檢或術(shù)后病理檢查證實為原發(fā)性肝癌，術(shù)前均行腹部彩色多普勒超聲檢查，排除彌漫性肝癌及其他惡性腫瘤。男57例，女23例，年齡41～73歲，平均（51.23±8.34）歲；結(jié)節(jié)型73例，巨塊型7例；TNM分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期40例，Ⅲ期19例，Ⅳ期6例。

1.2 方法

彩色多普勒超聲檢查采用美國GE v730型超聲診斷儀進(jìn)行，采用腹部探頭，探頭頻率為5.0 MHz。檢查前患者至少空腹8 h，檢查時取仰臥位，由專業(yè)超聲科醫(yī)師行腹部超聲檢查，觀察肝臟大小、形態(tài)、回聲，并仔細(xì)觀察腫塊位置、大小、形態(tài)、邊界、病灶內(nèi)部回聲和血運情況、病灶周圍回聲等。肝臟病理樣本組織經(jīng)石蠟包埋，修復(fù)后采用免疫組化SP法染色，操作按試劑盒操作說明進(jìn)行，分別進(jìn)行血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、CD31染色，CD31反映微血管密度（MVD）[7，8]。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察患者肝臟腫瘤超聲征象及內(nèi)部血運分級，血運分級[9]：0級為腫瘤內(nèi)無明顯血流信號；Ⅰ級為腫瘤內(nèi)有少量血流信號，信號呈點狀；Ⅱ級為腫瘤內(nèi)有較豐富血流信號，信號呈條狀；Ⅲ級為腫瘤內(nèi)血流豐富，存在多條粗大血管。VEGF、MMP-9組織染色結(jié)果判定：細(xì)胞內(nèi)有棕黃色顆粒為陽性，在高倍顯微鏡下觀察5個視野，每個視野下計數(shù)200個細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)量，取平均數(shù)，計算平均陽性率[10]。MVD計數(shù)，細(xì)胞內(nèi)呈棕黃色為陽性，肝細(xì)胞間染色細(xì)胞團(tuán)、血管狀或管腔狀計為1個血管，低倍鏡下選擇染色豐富區(qū)域，高倍鏡下進(jìn)行計數(shù)，多個高倍鏡視野計數(shù)取平均數(shù)[11]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理，計數(shù)資料采用%表示，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用方差分析，相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 超聲血流分級與臨床分期關(guān)系

80例患者中，0級12例，Ⅰ級26例，Ⅱ級23例，Ⅲ級19例，見封三圖5、6。Spearman等級相關(guān)分析，超聲血流分級與臨床分期呈正相關(guān)（r=0.489，P<0.05），見表1。

2.2超聲血流分級與VEGF、MMP-9、MVD表達(dá)的關(guān)系

隨著超聲血流分級增加，VEGF、MMP-9、MVD表達(dá)呈升高趨勢，各血流分級VEGF、MMP-9、MVD表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），Spearman等級相關(guān)分析VEGF、MMP-9、MVD表達(dá)與超聲血流分級均呈正相關(guān)（P<0.05），超聲血流分級越高肝癌組織微血管生成越多，見表2。

3討論

新生血管是惡性腫瘤侵襲期重要的表現(xiàn)，惡性腫瘤通過釋放大量促血管生成相關(guān)因子，誘導(dǎo)腫瘤內(nèi)及周圍形成大量微血管，從而為其快速生長侵襲提供豐富營養(yǎng)，而癌細(xì)胞可通過血液循環(huán)進(jìn)行轉(zhuǎn)移播散，可見早期發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中新生血管及其分布有利于判斷病變性質(zhì)及進(jìn)展程度，積極采取治療措施[12]。肝癌屬高血管實性腫瘤，對血供需求高，因此，肝癌組織內(nèi)微血管密度可以反映肝癌組織侵襲性[13]。新生血管的形成需要血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、管腔形成及外基質(zhì)重塑，在此過程中VEGF促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，增加血管通透性，促進(jìn)新生血管形成；MMP-9促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)重塑，并釋放VEGF，促進(jìn)新生血管形成及癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[14，15]。

MVD是組織中微血管形成情況最準(zhǔn)確的指標(biāo)，通過對組織中微血管密度的觀察，了解血管分化程度是高血管實性腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)，然而MVD需要進(jìn)行有創(chuàng)操作，在惡性腫瘤早期檢查中應(yīng)用受到一定限制[16，17]。病灶內(nèi)的大量新生血管使其內(nèi)部充滿豐富血流，彩色多普勒超聲可通過無創(chuàng)、安全的方式觀察血流速度、流量、方向等血流信號，從而較為直觀地觀察到肝癌組織中的血運，有助于判斷病變進(jìn)展程度[18]。通過對血流進(jìn)行分級可對病灶內(nèi)血流進(jìn)行半定量分析。血運分級：0級為腫瘤內(nèi)無明顯血流信號；Ⅰ級為腫瘤內(nèi)有少量血流信號，信號呈點狀；Ⅱ級為腫瘤內(nèi)有較豐富血流信號，信號呈條狀；Ⅲ級為腫瘤內(nèi)血流豐富，存在多條粗大血管，逐步提高的分級反映病灶內(nèi)血運豐富程度的提高，超聲檢查有很好的重復(fù)性。

本研究對80例不同臨床分期的肝癌患者彩色多普勒超聲檢查血流分級與肝癌臨床分期進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，早期肝癌血流分級明顯較低，說明腫瘤仍處于侵襲前期，但已有部分Ⅱ期腫瘤出現(xiàn)了豐富的血流信號，分級在Ⅱ、Ⅲ級已有可探測的新生血管形成，進(jìn)入侵襲活躍階段，提示腫瘤處于較為旺盛的生長、侵襲過程，病情進(jìn)展迅速；晚期肝癌普遍存在豐富血供，惡性程度及轉(zhuǎn)移風(fēng)險高，符合肝癌生長、侵襲、轉(zhuǎn)移的病理過程[19]。統(tǒng)計學(xué)分析顯示，超聲血流分級與肝癌臨床分期呈正相關(guān)，說明通過彩色多普勒超聲檢查血流分級可以反映肝癌病理特征及進(jìn)展程度。通過超聲血流分級與VEGF、MMP-9、MVD表達(dá)分析，結(jié)果顯示，血流分級越高，VEGF、MMP-9、MVD表達(dá)越高，均呈正相關(guān)性，反映肝癌組織通過促進(jìn)VEGF、MMP-9高表達(dá)，實現(xiàn)新生血管生成，增加微血管密度和通透性，獲取更多的營養(yǎng)物質(zhì)達(dá)到快速生長、侵襲，癌細(xì)胞更容易游離進(jìn)入血液循環(huán)而轉(zhuǎn)移，也與肝癌臨床分期特征相符[20-22]。高密度微血管形成密集血管網(wǎng)絡(luò)，彩色多普勒超聲獲取更多、更強血流信號。

綜上所述，彩色多普勒超聲血流分級可對肝癌血供豐富程度進(jìn)行半定量判斷，反映肝癌組織侵襲性及病變進(jìn)展程度，具有無創(chuàng)、安全、高效、可重復(fù)檢查、操作簡便、費用低等優(yōu)勢，在肝癌早期篩查及診斷、治療中有較高的應(yīng)用價值。

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（收稿日期：2015-12-25）