瑞舒伐他汀鈣對高尿酸大鼠尿酸及C—反應(yīng)蛋白的影響

迪麗達(dá)爾·希力甫 張向陽

【摘 要】 目的：利用酵母膏（YEP）及氧嗪酸（OA）作為誘導(dǎo)劑，血漿尿酸水平為檢測指標(biāo)，建立高尿酸血癥動物模型；并通過動物模型的瑞舒伐他汀鈣藥物干預(yù)，監(jiān)測血清尿酸（UA）及C-反應(yīng)蛋白（CPR）指標(biāo)及CPR蛋白表達(dá)水平，綜合分析，評價瑞舒伐他汀鈣對高尿酸血癥大鼠炎性因子的療效。方法：1）將36之SD大鼠隨機(jī)分為空白對照組，高尿酸血癥模型組，高尿酸血癥+瑞舒伐他汀鈣10.0m g·kg-1·d-1組。以YEP 21g·kg-1·d-1給予喂養(yǎng)，OA以200mg-1·kg-1·d-1腹腔注射，瑞舒伐他汀鈣以10.0m g·kg-1·d-1劑量灌胃，于建立模型同時進(jìn)行藥物干預(yù)，持續(xù)給藥6周后鑒定該藥對血清UA及CPR水平并取出胸主動脈監(jiān)測血管內(nèi)皮組織CRP表達(dá)水平的影響。結(jié)果：1）模型組血UA及CRP水平顯著升高，主動脈內(nèi)皮組織CRP表達(dá)水平增強(qiáng)，與空白對照組呈明顯對比；2）瑞舒伐他汀鈣干預(yù)高尿酸血癥動物模型后瑞舒伐他汀鈣降低血清UA及CRP水平，以及CRP蛋白表達(dá)水平的效應(yīng)顯著。結(jié)論：本研究結(jié)果表明瑞舒伐他汀鈣對高尿酸血癥所致大鼠炎癥反應(yīng)具有明顯療效，炎癥反應(yīng)的改善可能是瑞舒伐他汀鈣能降低尿酸的作用機(jī)制之一。

【關(guān)鍵詞】 高尿酸血癥 氧嗪酸鉀鹽 炎性因子 瑞舒伐他汀鈣

高尿酸血癥（hyperuricemia）在臨床較為常見，是指細(xì)胞外液的尿酸鹽呈超飽和狀態(tài)[1]，屬于代謝性疾病。根據(jù)國內(nèi)外臨床研究報道，血清hs-CRP水平與血尿酸，24 h尿尿酸有顯著正相關(guān)關(guān)系，提示尿酸代謝紊亂是高尿酸血癥患者血清hs-CRP水平升高的重要相關(guān)因素[2]。本研究采用YEP及OA誘導(dǎo)建立大鼠高尿酸血癥模型，在整體水平觀察高尿酸血癥對血管炎性反應(yīng)以及瑞舒伐他汀鈣對其的影響，并進(jìn)一步觀察瑞舒伐他汀鈣血管炎性反應(yīng)作用的可能機(jī)制。

1 研究方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物藥物干預(yù)

將36只雄性SD大鼠（由新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院動物實(shí)驗(yàn)室提供）隨機(jī)分為3組（12只/組），模型制作和藥物干預(yù)同步進(jìn)行，持續(xù)6周。動物以YEP21g·kg-1·d-1給予喂養(yǎng)，其方法參照文獻(xiàn)[3，4]0A用滅菌熱蒸餾水配成20g/L母液，以200mg-1·kg-1·d-1腹腔注射，其空白對照組動物以普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水。參照瑞舒伐他汀鈣的臨床用藥劑量和實(shí)驗(yàn)動物研究報道[4，5]熱蒸餾水配成5mg/1ml母液，按10.0m g·kg-1·d-1劑量灌胃。

1.2 標(biāo)本收集

藥物干預(yù)開始后，分周（0、2、4和6周）和分批采集大鼠摘眼球取抗凝血2ml，離心分離血清、分裝并保存于-80℃冰箱。6周后，利用1%戊巴比妥鈉40mg·kg-1腹腔注射麻醉，開腹取出大鼠胸主動脈，用15%中性福爾馬林固定后，石蠟包埋并切成 4μm厚的組織切片，保存于-80℃，用于免疫組化學(xué)鑒定。

1.3 指標(biāo)檢測

利用UA及CRP試劑盒和DXC800 SYNCHRON生化分析系統(tǒng)測定以上代謝產(chǎn)物的血清含量，具體遵照廠家提供的說明書和儀器操作常規(guī)方法。

1.4 免疫組織化學(xué)方法

固定和石蠟包埋胸主動脈福爾馬林（4?m）進(jìn)行脫蠟和水化?？乖诰彌_區(qū)（1mmol/L EDTA /磷酸鹽緩沖鹽水，pH 9）在98°C在水中30分鐘浴。內(nèi)源性過氧化氫阻斷進(jìn)行3%過氧化氫10分鐘。接下來入兔抗鼠CRP抗體（一抗，Santa Cruz）在4°C染色切片。次日每張切片加入山羊抗兔辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體（二抗，Goat-anti-rabbit-HRPO）并顯棕黃色。在光學(xué)顯微鏡下五個隨機(jī)視野觀察CRP陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度。NSCLC PBAD表達(dá)陽性程度得分為：0，0%；1，1%–25%；2，26%–50%；3，51%–75%或4，76%-100%。得分為：0，無污點(diǎn)；1，稻草黃；2，棕色；和3，暗褐色的。根據(jù)陽性細(xì)胞著色強(qiáng)的百分比。取1cm個胸主動脈平滑肌平均得分為n。0分為陰性（-），04分為強(qiáng)陽性（+++）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±SD表示，用One-Way ANOVA作統(tǒng)計推斷，多組間兩兩比較采用單因素方差分析（LSD法），方差不齊者采用Tamhane法，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高尿酸血癥模型大鼠血UA水平的變化

表1可見，用藥2周后模型組血UA較其他組顯著升高（P<0.01），6周后模型組仍高于其他組（P<0.01）。實(shí)驗(yàn) 2周時瑞舒伐他汀鈣UA水平低于模型組（P<0.01），但較空白對照組高（P<0.05）； 6周時趨向于正常，與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。

2.2 各組大鼠血清CRP水平的變化

表2可見，實(shí)驗(yàn)2周后模型組和藥物干預(yù)組血清CRP水平均開始升高，與空白對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）；4周至6周，模型組CRP水平繼續(xù)升高，與空白對照組及藥物干預(yù)組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）。實(shí)驗(yàn)4周起，藥物干預(yù)組CRP水平開始下降，到了6周，CRP水平下降顯著，與模型組有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）。

2.3 各組大鼠動脈組織CRP表達(dá)的判定

模型組CRP表達(dá)為強(qiáng)陽性，空白對照組CRP的表達(dá)為陰性（P<0.05）。瑞舒伐他汀鈣10mg/kg干預(yù)組CRP表達(dá)強(qiáng)度較模型組顯著減弱，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。

3 討論

近些年來，眾多研究發(fā)現(xiàn)[6，7，8]高尿酸血癥與CRP、TNF-α、IL-6等炎性因子有密切關(guān)系，Kanellis等[9]學(xué)者發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)的人內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞均有C-反應(yīng)蛋白mRNA和蛋白表達(dá)，提示血管細(xì)胞是產(chǎn)生C-反應(yīng)蛋白的另一來源，尿酸能上調(diào)C-反應(yīng)蛋白的表達(dá)，這進(jìn)一步提供了尿酸的前炎癥因子和致動脈粥樣硬化作用的直接證據(jù)。本研究通過檢測炎癥反應(yīng)相關(guān)性血清指標(biāo)后發(fā)現(xiàn)，高尿酸血癥大鼠血清UA升高的同時，血清CRP水平也顯著升高。CRP染色后出現(xiàn)主動脈內(nèi)皮細(xì)胞胞漿呈陽性反應(yīng)，表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞胞漿有較多棕黃色顆粒，CRP的蛋白表達(dá)顯示強(qiáng)陽性，炎性因子升高程度蛋白表達(dá)強(qiáng)度與尿酸水平呈正相關(guān)性。與文獻(xiàn)報道一致。有學(xué)者認(rèn)為[10]，尿酸鹽本身作為啟動白細(xì)胞釋放炎癥因子的始動因素[11]，可能不僅引起炎性損傷，還參與炎性損傷的發(fā)生、發(fā)展。

本研究結(jié)果提示，瑞舒伐他汀鈣顯著降低血清CRP同時減弱主動脈內(nèi)皮細(xì)胞CRP的表達(dá)。他汀類藥物的抗炎的可能機(jī)制包括[12]：1）抑制巨噬細(xì)胞生成細(xì)胞因子，并通過降低巨噬細(xì)胞的活性穩(wěn)定斑塊；2）抑制黏附分子表達(dá)。他汀類藥物通過減少血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的P選擇素、細(xì)胞間黏附分子1（ICAM-1）、巨噬細(xì)胞黏附分子1（Mac-1）、血管細(xì)胞黏附分子1（VCAM-1）及單核細(xì)胞表達(dá)的CD11b/CD18和CD40增加，抑制單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，從而減少血管實(shí)質(zhì)的損傷[13]；3）降低C-反應(yīng)蛋白，C-反應(yīng)蛋白是炎癥急性期的反應(yīng)產(chǎn)物，在早期動脈粥樣硬化斑塊中就有沉積，其水平可反映與缺血性病理相關(guān)的炎癥程度。

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