大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇病原真菌的抑制作用及對(duì)平菇生長的影響

段奧其　楊亞苓　湯慧盟　呂祚森　國淑梅　周軍　牛貞福

摘要：采用抑菌圈法研究了大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇（Pieurotus ostreatus）病原真菌的抑制作用，用出菇試驗(yàn)法測(cè)定了混合提取液對(duì)平菇菌絲體和子實(shí)體生長的影響。結(jié)果表明，在pH9時(shí)，大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0質(zhì)量比例的混合提取液抑制平菇病原真菌效果最好，與對(duì)照相比增產(chǎn)31.40%，縮短了采菇間隔。大蒜、生姜、苦瓜以4.5：4.5：1.0質(zhì)量比例提取12h，pH為8、9時(shí)混合提取液抑菌效果最好，加入提取12h混合提取液的菌袋增產(chǎn)35.84%，縮短了采菇間隔，增大了蓋柄比，提高了商品性。

關(guān)鍵詞：混合提取液；平菇（Pieurotus ostreatus）；病原真菌；抑制作用

中圖分類號(hào)：S646.1⁺4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）09-2283-04

平菇（Pleuyotus ostreatus）屬側(cè)耳科側(cè)耳屬，是中國栽培最為廣泛的食用菌之一。目前平菇生產(chǎn)以農(nóng)戶分散栽培為主，栽培管理不規(guī)范，生產(chǎn)過程中易受細(xì)菌、真菌為害，菇農(nóng)常用多菌靈、百菌清等化學(xué)藥劑進(jìn)行防治，給食用菌產(chǎn)品帶來一定的安全隱患。

研究表明，大蒜、生姜、苦瓜等的提取液對(duì)細(xì)菌、真菌具有一定的抑制作用。為此。本試驗(yàn)以大蒜、生姜、苦瓜的混合提取液對(duì)平菇生產(chǎn)中的主要病原真菌進(jìn)行室內(nèi)抑菌測(cè)定和平菇生產(chǎn)試驗(yàn)，以期為相關(guān)生物農(nóng)藥的開發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

大蒜為脫毒品種，苦瓜為航天九號(hào)（F₁），均取自山東農(nóng)業(yè)工程學(xué)院校內(nèi)實(shí)習(xí)基地：生姜為山東綿姜，山東萊蕪生產(chǎn)。

真菌為青霉（Penicillium）、木霉（T.viride）、擬青霉（Paecilomyces）、枝孢霉（Cladosporium）。

平菇為德豐5號(hào)，由禹城市清香園蔬菜種植專業(yè)合作社提供。

1.2 方法

1.2.1 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的制備 用食品加工機(jī)將大蒜（鮮）、生姜（鮮）、苦瓜片（干）按照一定比例勻漿或粉碎。與乙酸乙酯（AR）按照質(zhì)液比（m/V）1：1的比例置于28℃下恒溫振蕩一定時(shí)間，轉(zhuǎn)速120r/min。其中大蒜、生姜、苦瓜質(zhì)量比例分別為4：4：2、5：4：1、4：5：1、4，5：4，5：1.0，提取時(shí)間為24h；大蒜、生姜、苦瓜比例為4.5：4.5：1.0的提取時(shí)間為4、6、12、24、36、48h；不加乙酸乙酯的為空白對(duì)照（CK）：用乙酸乙酯浸泡的濾片為對(duì)照（CK1）。最后用抽濾裝置抽濾得大蒜、生姜、苦瓜混合提取液，置于4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 真菌菌懸液的制備 將上述真菌菌株分別經(jīng)PDA培養(yǎng)基純化、活化培養(yǎng)后。用無菌生理鹽水進(jìn)行梯度稀釋，菌體濃度為10⁵-10⁶cfu/mL，置于4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 不同DH平板的制備 PDA培養(yǎng)基高壓滅菌后，在45℃左右用NaOH調(diào)pH至7、8、9，無菌條件下倒入直徑90mm的培養(yǎng)皿中即可。

1.2.4 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液抑菌效果測(cè)定 ①用移液槍取0，01mL“1.2.2”中制備的菌懸液于平板上。用無菌涂布棒涂布均勻：⑦用無菌鑷子將滅菌后的濾紙片（直徑6mm，用大蒜、生姜、苦瓜混合提取液充分浸泡20min再晾干）貼入涂菌的平板內(nèi)：③將平板倒置在24℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。采用十字交叉法測(cè)量抑菌圉直徑。3次重復(fù)。

1.2.5 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇生長的影響 ①平菇栽培料配方：棉子殼90%，麥麩5%，石灰3%，石膏2%，料水比1.0：1.2：培養(yǎng)料中分別加入培養(yǎng)基含水量1%的大蒜、生姜、苦瓜不同質(zhì)量比例（提取24h）的混合提取液、不同提取時(shí)間（大蒜、生姜、苦瓜質(zhì)量比4.5：4.5：1.0）的混合提取液，不加混合提取液的為對(duì)照（CK2）：各處理水分（包括對(duì)照）調(diào)節(jié)一致后拌勻。⑦按4層菌種3層料的方式把平菇菌種接至17cm×45cm×0，04cm的聚乙烯塑料袋中。③測(cè)定混合提取液對(duì)平菇菌絲及子實(shí)體生長的影響。5次重復(fù)。

1.3 分析方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用DPS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇病原真菌的抑制作用

2.1.1 不同比例大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇病原真菌的抑制作用 從表1可以看出，提取溶劑乙酸乙酯和CK對(duì)4種病原真菌均無抑菌效果：大蒜、生姜、苦瓜不同質(zhì)量比例的混合提取液對(duì)4種病原真菌都有抑制作用，不同處理的抑菌效果有一定差異。4.5：4.5：1.0質(zhì)量比例的混合提取液抑制效果較好，其次為比例4：5：1。

DH對(duì)大蒜、生姜、苦瓜不同比例混合提取液的抑菌效果也有一定影響，從表1可以看出，pH為9時(shí)對(duì)平菇病原真菌抑制效果最好。

2.1.2 不同提取時(shí)間的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇病原真菌的抑制作用 表1結(jié)果表明，4.5：4.5：1.0質(zhì)量比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液抑菌效果最好，故選用此比例進(jìn)行不同提取時(shí)間的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的抑菌試驗(yàn)。從表2可以看出，提取溶劑乙酸乙酯對(duì)平菇病原真菌無抑菌效果；大蒜、生姜、苦瓜不同提取時(shí)間的混合提取液對(duì)4種真菌都有抑制作用，其中以提取12h的抑菌效果較好。

pH對(duì)不同提取時(shí)間的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的抑菌效果也有一定影響，混合提取液pH為8時(shí)，對(duì)青霉、枝孢霉抑菌效果較好，pH為9時(shí)對(duì)木霉、擬青霉抑制效果較好。

2.2 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇生長的影響

2.2.1 不同質(zhì)量比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇生長的影響

1）對(duì)菌絲生長的影響。從圖1可以看出，不同質(zhì)量比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇菌絲的生長均有影響，其中比例為4：5：1時(shí)平菇菌絲生長速度最快，其次是CK2，再依次為比例5：4：1、4.5：4.5：1.0、4：4：2；但各處理的菌絲生長與CK2相比沒有明顯差異。

2）對(duì)平菇子實(shí)體的影響。從表3可以看出，大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇的顏色無影響；但不同比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇產(chǎn)量有較大影響，其中比例為5：4：1和4，5：4.5：1.0的混合提取液具有明顯的增產(chǎn)效果，與CK2相比分別增產(chǎn)39.89%和31.40%：比例為4：5：1和4：4：2的混合提取液則表現(xiàn)出一定的減產(chǎn)，與CK2相比分別減產(chǎn)26.75%和43.20%。

大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇的現(xiàn)蕾時(shí)間和采菇間隔有所影響，與CK2相比，比例為4.5：4.5：1，0的處理現(xiàn)蕾晚11d。但采菇間隔縮短27d：大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇的形態(tài)有所改變，比例為5：4：1和4.5：4.5：1，0的混合提取液處理的平菇，與CK2相比蓋柄比分別增加7.17%、7.60%。

2.2.2 不同提取時(shí)間的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇生長的影響

1）對(duì)菌絲生長的影響。從圖2可以看出。不同提取時(shí)間的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液一定程度上減緩了平菇菌絲的生長速度，但總體上與CK2沒有明顯差異。

2）對(duì)子實(shí)體的影響。從表4可以看出。大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇的顏色無影響：但不同提取時(shí)間的混合提取液對(duì)平菇產(chǎn)量的影響較為明顯，與CK2相比，提取時(shí)間為6、12、24h的混合提取液處理分別增產(chǎn)33.76%、35.84%和31.40%；提取時(shí)間為4、36、48h的處理分別減產(chǎn)31.94%、63.47%和65.41%。

大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0比例的混合提取液。其不同提取時(shí)間處理的平菇現(xiàn)蕾時(shí)間、采菇間隔和蓋柄比均有差異。與CK2相比，除提取6、12h的處理外，其他處理的現(xiàn)蕾時(shí)間均延長，以提取36、4h的處理延長最多，分別為22、12d；采菇間隔與CK2相比均縮短，以提取24、36h的處理縮短最多，分別縮短27、25d；平菇蓋柄比除提取4h的處理外，其他處理均增加，以提取48、36h的處理增加最大，分別增加34.60%、50.74%。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0質(zhì)量比例的混合提取液對(duì)平菇生產(chǎn)中的病原真菌抑制效果較好，不同比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液pH為9時(shí)抑菌效果較好；大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對(duì)平菇菌絲生長有一定影響，但與CK2相比差異不顯著；大蒜、生姜、苦瓜5：4：1和4，5：4.5：1.0比例的混合提取液具有明顯的增產(chǎn)效果。與CK2相比，分別增產(chǎn)39.89%和31.40%?？傊笏?、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0質(zhì)量比例的混合提取液抑菌效果最好，表現(xiàn)出增產(chǎn)效果?？s短了采菇間隔。增大了蓋柄比。

大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0質(zhì)量比例提取12h的混合提取液抑菌效果最好：pH為8、9時(shí)抑菌效果較好。平菇菌絲生長與CK2相比無顯著差異。與CK2相比，提取時(shí)間為6-24h的混合提取液增產(chǎn)31.40%-35.84%，并縮短了采菇間隔，增大了蓋柄比。

大蒜、生姜、苦瓜混合提取液改善了單一提取液在中性偏堿條件下抑菌效果下降的缺點(diǎn)，并且在5：4：1和4.5：4.5：1.0的比例下分別增產(chǎn)39.89%和31.40%。研究還表明，4.5：4.5：1.0質(zhì)量比例提取時(shí)間為12h的混合提取液抑菌效果較好，增產(chǎn)35.84%，蓋柄比提高5.877%；大蒜、生姜、苦瓜混合提取液在一定程度上延長了平菇的現(xiàn)蕾時(shí)間，在生產(chǎn)時(shí)提前15d種菇，不會(huì)影響產(chǎn)品上市：出菇期菇潮間隔縮短8-10d，可縮短平菇的生產(chǎn)周期，減少人力、物力的投入。

大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的增產(chǎn)機(jī)理、延長平菇的現(xiàn)蕾時(shí)間和縮短菇潮間隔的原因，其理化性質(zhì)如何等有待進(jìn)一步研究。