霸力360°系列消毒劑體外殺菌效果驗證實驗報告

楊日明　秦玲　薛薔

目前，我國養(yǎng)殖業(yè)普遍重視畜禽“體內(nèi)用藥”，畜禽患病后抗生素等藥物大量使用，導(dǎo)致出現(xiàn)藥物殘留、畜禽免疫力和生產(chǎn)性能下降、畜禽產(chǎn)品質(zhì)量差、養(yǎng)殖成本加大、養(yǎng)殖效益差等系列問題。為保障養(yǎng)殖效益和倡導(dǎo)綠色無抗養(yǎng)殖模式，沈陽中亞獸藥業(yè)有限公司從“生物安全理念”和“體外用藥理念”角度出發(fā)，推出霸力360°系列消毒劑產(chǎn)品?！吧锇踩砟睢笔侵割A(yù)防臨床或亞臨床疾病發(fā)生的畜禽生產(chǎn)安全體系，重點強(qiáng)調(diào)環(huán)境因素在保證動物健康中所起的決定性作用，也就是保證畜禽生長處在最佳狀態(tài)的生態(tài)環(huán)境中，保證其發(fā)揮最佳的生產(chǎn)性能，是實現(xiàn)養(yǎng)殖效益最大化的必要條件?！绑w外用藥理念”即消毒，是指病原體處于養(yǎng)殖環(huán)境中，尚未進(jìn)入畜禽體內(nèi)，在此階段利用敏感的消毒劑殺滅病原，突出在畜禽體外（環(huán)境）中殺滅病原體，是實現(xiàn)養(yǎng)殖效益最大化的必要途徑。

為確保霸力360°系列消毒劑產(chǎn)品的殺毒和臨床應(yīng)用效果，沈陽中亞獸藥業(yè)有限公司科研中心選用了大腸桿菌（8099）進(jìn)行體外殺菌試驗。

1 試驗用菌

消毒劑指標(biāo)菌分別為大腸桿菌（8099）。

2 霸力360°系列消毒劑產(chǎn)品（見表1）

3 中和劑的配制

3.1 中和劑Ⅰ

用于中和二氯異氰尿酸鈉粉、速潔、安晶、佳晶、口蹄滅、中亞噴達(dá)康等消毒劑。無水磷酸氫二鈉2.83克、磷酸二氫鉀1.36克、胰蛋白胨10克、牛肉粉3克、葡萄糖2克、硫代硫酸鈉5克、卵磷脂3克、甘氨酸3克、吐溫-80 30毫升。將各成分加入到1升蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)pH至7.2～7.4，于121℃壓力蒸氣滅菌20分鐘，冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

3.2 中和劑Ⅱ

用于中和復(fù)合酚。卵磷脂30克、吐溫80 30毫升，將各成分加入到1升蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)pH至7.2～7.4，于121℃壓力蒸氣滅菌20分鐘，冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

4 細(xì)菌懸液的制備

取大腸桿菌菌株加入生理鹽水混勻后，取少量菌種接種于5毫升LB培養(yǎng)液中，37℃水浴18～24 小時，為第1代培養(yǎng)物；取第1代培養(yǎng)物接種于營養(yǎng)瓊脂中，37℃培養(yǎng)18～24小時，為第2代培養(yǎng)物。在營養(yǎng)瓊脂平板轉(zhuǎn)接4次后，作為試驗用；檢測試驗用菌懸液濃度為大腸桿菌（1×108cfu/mL）。

5 消毒效果驗證

5.1 消毒劑稀釋

見表1。

5.2 體外殺菌

將培養(yǎng)后的菌液原液稀釋107倍后，取1毫升接種于瓊脂平板，做倒置培養(yǎng)，24小時后記錄平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)即得菌液原液濃度（約1×108 cfu/mL）。

每個試管中加入4.5毫升中和劑；另取試管，每管加入0.5毫升菌液，再加入0.5毫升液體培養(yǎng)基，20℃水浴5分鐘，加入4毫升稀釋好的消毒劑（對照組為PBS），作用15分鐘后吸取0.5毫升加入裝有4.5毫升中和劑的試管中，混合作用10分鐘。取0.5毫升接種于瓊脂平板，做倒置培養(yǎng)，24小時后記錄平板菌落數(shù)。

6 殺菌率的計算方法

殺菌率= [1-（平板菌落數(shù)÷105）] × 100%

注：①菌液原濃度為108cfu/mL，經(jīng)消毒劑、中和劑和涂平板三步驟時，分別各被稀釋10倍，涂于每個瓊脂平板的細(xì)菌數(shù)量約105個。②殺菌率>99%，視為合格；殺菌率99%視為不合格。

7 結(jié)果

7.1 衛(wèi)保

7.2 速潔

7.3 復(fù)合酚

7.4 二氯異氰尿酸鈉粉

7.5 安晶

7.6 中亞噴達(dá)康

7.7 佳晶

7.8 口蹄滅

8 討論

在實驗室條件下驗證消毒劑的殺菌效果時，當(dāng)細(xì)菌和消毒劑的混合液移入瓊脂平板時，無法避免帶有部分殘余消毒劑，導(dǎo)致殘留于瓊脂平板上繼續(xù)發(fā)揮殺菌作用，進(jìn)而導(dǎo)致對消毒劑殺菌效果的過高評價。因此本研究中，在測定消毒劑的殺菌率時，必須除去殘余消毒劑的影響，本研究所選用的中和劑能有效中和消毒劑，且不影響細(xì)菌生長。

9 結(jié)論

沈陽中亞獸藥業(yè)有限公司科研中心對8種霸力360°系列消毒劑產(chǎn)品的24個稀釋倍數(shù)進(jìn)行了體外殺菌實驗，殺菌率全部 >99%。