直接提取法檢測(cè)有機(jī)氯農(nóng)藥殘留方法探尋

崔承遠(yuǎn)

摘 要：本課題通過方案預(yù)設(shè)、正交試驗(yàn)及加標(biāo)回收率試驗(yàn)確定直接提取法的最終執(zhí)行方案。直接提取法為通過正己烷旋轉(zhuǎn)震蕩對(duì)待測(cè)試樣中有機(jī)氯農(nóng)藥成分進(jìn)行有效提取，并通過配置有電子俘獲檢測(cè)器的氣相色譜儀進(jìn)行外標(biāo)法定量分析，是一種高效快速的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法。

關(guān)鍵詞：直接提取法；有機(jī)氯農(nóng)藥；電子俘獲檢測(cè)器；氣相色譜儀；檢測(cè)高效性

有機(jī)氯農(nóng)藥作為一種高效的含有有機(jī)氯的農(nóng)藥，于20世紀(jì)30年代相繼問世。常見的有機(jī)氯農(nóng)藥有艾氏劑、狄氏劑、滴滴涕、硫丹、氯丹、六氯苯、七氯等。

由于其具有殺蟲范圍廣，急性毒性小，且易于大量生產(chǎn)、價(jià)格低廉等特點(diǎn)，曾被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)之中。但由于此類農(nóng)藥半衰期長、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、不易降解和代謝，生物蓄積性較高，所以能長期積累并存于植物和土壤中。因此，自上世紀(jì)70年代起，世界各國相繼開始限用并逐步禁用有機(jī)氯農(nóng)藥。我國也已于1983年起全面停止了有機(jī)氯農(nóng)藥的生產(chǎn)，并自1984年起全面禁止使用有機(jī)氯農(nóng)藥。但由于有機(jī)氯農(nóng)藥化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，因此即便在今日，在我國很多地區(qū)的土壤中仍舊能夠檢測(cè)到有機(jī)氯農(nóng)藥殘留。所以，直至今日，對(duì)于食品中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的檢測(cè)工作仍尤為重要。

本課題所要探尋的直接提取法是一種高效的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法，具有操作步驟少，檢測(cè)耗時(shí)短，組分回收率高等優(yōu)點(diǎn)。

1 材料與儀器

1.1 試劑與材料

（1）正己烷：色譜純；（2）濃硫酸：優(yōu)級(jí)純；（3）濾紙；（4）錫箔紙。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備

（1）旋轉(zhuǎn)振蕩儀：HZQ-Y型，常州諾基儀器有限公司；（2）氣相色譜儀：Clarus580型，美國PerkinElmer（珀金埃爾默）公司；（3）色譜柱：Elite-5型，美國PerkinElmer（珀金埃爾默）公司；（4）鋼瓶裝高純氮?dú)猓杭兌?9.999%，哈爾濱卿華工業(yè)氣體有限公司；（5）電子天平：FA214型，上海力衡儀器儀表有限公司；（6）高速離心機(jī)：3K15型，美國Sigma公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、ρ， ρ-DDT、ο， ρ-DDT、ρ，ρ-DDE、ρ，ρ-DDD、α-硫丹、β-硫丹、順式氯丹、反式氯丹、七氯、艾氏劑及狄氏劑。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度均為100μg/mL，溶劑載體均為正己烷，生產(chǎn)機(jī)構(gòu)均為農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。

1.4 氣相色譜儀參數(shù)設(shè)置

色譜柱：Eilte-5石英毛細(xì)管柱（30m×0.25×0.25μm）；柱溫箱：初溫100℃，保持1min；以20℃/min的速率升至200℃，保持0min；再以4℃/min的速率升至260℃，保持4min；升溫程序結(jié)束；載氣流速：1.0mL/min；輔助氣（尾吹）流速：50.0mL/min；信號(hào)不衰減；不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積：1.0μL。

1.5 實(shí)驗(yàn)對(duì)象

本課題選取混合水果粉作為試驗(yàn)對(duì)象。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 方法檢出限

各組分有機(jī)氯農(nóng)藥方法檢出限按照如下公式進(jìn)行計(jì)算：

檢出限定義公式：

CL=KSb/M

其中，CL—方法檢測(cè)限；M—標(biāo)準(zhǔn)曲線在低濃度范圍內(nèi)的斜率；Sb—空白標(biāo)準(zhǔn)偏差；K—置信因子，本實(shí)驗(yàn)取3。

2.2 直接提取法方案設(shè)定

直接提取法操作流程設(shè)定如下：

試樣稱取→正己烷試劑添加→旋轉(zhuǎn)震蕩提取→樣液過濾

↓

測(cè)試樣液收集←上清液提取←樣液離心←濃硫酸凈化（磺化）

2.3 正交試驗(yàn)方案設(shè)定

選取上述2.1試驗(yàn)方案中正己烷試劑添加量、旋轉(zhuǎn)震蕩提取時(shí)間以及濃硫酸添加量三個(gè)因素作為正交試驗(yàn)的水平因素。

正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案如表1所示：

按照以上實(shí)施方案進(jìn)行9次加標(biāo)回收率試驗(yàn)，判定標(biāo)準(zhǔn)為每次試驗(yàn)中所有15種有機(jī)氯農(nóng)藥目標(biāo)組分的加標(biāo)回收率均滿足80%-110%之間。并以該組試驗(yàn)所對(duì)應(yīng)的操作條件制定直接提取法的最終操作步驟。

3 結(jié)果與分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢測(cè)

將15種有機(jī)氯農(nóng)藥組分配制成濃度為0.010μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，通過氣相色譜儀進(jìn)行定性定量分析。

3.2 方法檢出限

α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、ρ，ρ-DDT、ο， ρ-DDT、ρ，ρ-DDE、ρ，ρ-DDD的方法檢出限為2.0μg/kg；α-硫丹、β-硫丹、順式氯丹及反式氯丹的方法檢出限為3.0μg/kg ；七氯、艾氏劑和狄氏劑的方法檢出限為4.0μg/kg。

3.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

按照表1所制定的正交試驗(yàn)方案分別進(jìn)行9次本底試驗(yàn)及9次相對(duì)應(yīng)的加標(biāo)回收率試驗(yàn)，并通過氣相色譜儀進(jìn)行定性定量分析，最后分別計(jì)算9組試驗(yàn)的加標(biāo)回收率。計(jì)算組分回收率時(shí)，如果本底試樣檢測(cè)結(jié)果大于該組分的方法檢出限，則按照實(shí)際檢測(cè)值計(jì)算；若檢測(cè)結(jié)果小于該組分方法檢出限，則按照該組分方法檢出限進(jìn)行計(jì)算。經(jīng)計(jì)算得出，第六組試驗(yàn)方案的加標(biāo)回收率滿足所有15種有機(jī)氯農(nóng)藥組分均在80%-110%區(qū)間范圍內(nèi)（詳見表2）。

表2 6#樣品樣液測(cè)定結(jié)果

3.4 直接提取法方案確定

由正交試驗(yàn)結(jié)果可以確定直接提取法的最終執(zhí)行方案為：稱取混合水果粉試樣2g，并加入20mL正己烷震蕩提取45min；然后通過濾紙過濾，收集濾液并轉(zhuǎn)移至25mL具塞指形離心管內(nèi)，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min，取上清液上機(jī)待測(cè)。

4 結(jié)論

綜合正交實(shí)驗(yàn)、加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)及方法適用范圍驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出以下結(jié)論：（1）直接提取法的最佳實(shí)施方案：即采集試樣2g，添加提取試劑正己烷20mL，密封，并通過旋轉(zhuǎn)震蕩儀旋轉(zhuǎn)震蕩提取45min，濾紙過濾，收集濾液并以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min，提取上清液作為儀器分析樣液；（2）直接提取法的加標(biāo)回收率均能夠達(dá)到80%-110%之間，滿足檢測(cè)方法加標(biāo)回收率的一般性要求。

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