18258例抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體檢測(cè)的臨床分析

羅清，鞠北華

(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，江西南昌330006)

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18258例抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體檢測(cè)的臨床分析

羅清，鞠北華

(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，江西南昌330006)

摘要:目的探討抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(ANCA)在臨床就診患者中的陽性分布趨勢(shì)及在血管炎中的應(yīng)用價(jià)值。方法應(yīng)用間接免疫熒光(IIF)法對(duì)18258例患者（男女比例為1：1.03，平均年齡49歲）進(jìn)行血清ANCA檢測(cè)，陽性者再加用PR3、MPO特異性線性印跡檢測(cè)作為確證試驗(yàn)。分析ANCA在不同性別、年齡(≤20歲組、21～49歲組、≥50歲組)患者和科室中的陽性率、熒光模式及靶抗原的分布。選取2013.6－2014.6有明確診斷的ANCA陽性住院病人診斷結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果在18258份檢測(cè)標(biāo)本中，ANCA陽性率為5.05%，其中男性為3.6%，女性為6.5%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=77.72，P<0．01)。不同年齡組間ANCA陽性患者的陽性率差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(≤20歲組5.2%、21～49歲組4.1%、≥50歲組5.8%，χ2=25.036，P<0．01)。ANCA陽性患者熒光模式及靶抗原分析表明，不同熒光模式的靶抗原分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=175.453，P<0.01），以PANCA（70.1%）為主，其靶抗原主要為MPO（68.7%）。各科室ANCA陽性顯示，中醫(yī)科（7.3%）、風(fēng)濕免疫科（6.9%）、干部病房（7.8%）和腎內(nèi)科（7.1%）ANCA陽性率較高?；仡櫡治?013.6－2014.6月份住院病人ANCA陽性181例患者疾病類型發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性血管炎37例，占總陽性率的20.4%，繼發(fā)性血管炎144例，占總陽性率的79.6%。在ANCA陽性的繼發(fā)性血管炎中，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（23.6%），類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（18.1%）最高。結(jié)論臨床就診患者中ANCA的陽性率在不同性別、年齡組間存在差異；不同熒光模式ANCA其靶抗原存在差異；不同科室及相關(guān)疾病ANCA陽性率不同，檢測(cè)ANCA不僅對(duì)血管炎的早期診斷與治療具有重要意義，對(duì)SLE和RA等其他合并有血管損害的繼發(fā)性血管炎診斷及治療具有指導(dǎo)意義，因此臨床檢驗(yàn)工作中應(yīng)重視ANCA在疾病診斷中的臨床價(jià)值。

關(guān)鍵詞：ANCA；抗－MPO；抗－PR3；臨床分析

抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(ANCA)是一組以人中性粒細(xì)胞胞漿成分為靶抗原，與系統(tǒng)性血管炎密切相關(guān)的一類自身抗體。ANCA作為系統(tǒng)性壞死性小血管炎的血清學(xué)標(biāo)志性抗體已得到國(guó)際廣泛認(rèn)同，并對(duì)其病情緩解、復(fù)發(fā)具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。自從ANCA及其靶抗原檢測(cè)被廣泛應(yīng)用于臨床后，發(fā)現(xiàn)血管炎絕不是一種罕見疾病，而且近年來發(fā)現(xiàn)在我國(guó)血管炎發(fā)病率呈逐步增高趨勢(shì)，并且在系統(tǒng)性斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等許多自身免疫性疾病患者血清中陸續(xù)檢測(cè)到ANCA，而臨床上將這一類歸入為繼發(fā)性血管炎。筆者應(yīng)用間接免疫熒光法(IIF)和線性印跡法對(duì)18258例患者血清進(jìn)行了ANCA檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料回顧統(tǒng)計(jì)分析江西省南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院2007年6月至2014年6月住院和門診共18258例患者ANCA檢測(cè)結(jié)果以及2013年6月至2014年6月ANCA陽性住院患者臨床診斷，其中血管炎符合血管炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，SLE符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ACR）1997年制訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]， RA符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ACR）的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，其他疾病診斷依據(jù)相應(yīng)診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1 ANCA熒光模型檢測(cè)使用間接免疫熒光法（IIF），實(shí)驗(yàn)試劑購(gòu)自德國(guó)歐蒙實(shí)驗(yàn)診斷公司，每個(gè)反應(yīng)區(qū)包括4種抗原基質(zhì)：HEp－2細(xì)胞、鼠肝組織冰凍切片、乙醇固定和甲醛固定的人中性粒細(xì)胞胞。在第一次溫育時(shí)，已稀釋的血清(按試劑盒要求進(jìn)行1：10稀釋)標(biāo)本與固定在載片反應(yīng)區(qū)上生物薄片中細(xì)胞反應(yīng)，如果標(biāo)本陽性，特異性抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合。在第二次溫育時(shí)，結(jié)合的抗體與熒光素標(biāo)記的羊抗人IgG抗體反應(yīng)，然后在熒光顯微鏡下觀察特異性的熒光模式，嚴(yán)格按照試劑操作說明書操作。

1.2.2 ANCA靶抗原髓過氧化物酶（MPO)和蛋白水解酶3（PR3)確證使用線性印跡法，檢測(cè)試劑盒由德國(guó)歐蒙診斷公司生產(chǎn)，每根反應(yīng)膜條包括MPO 和PR3 2種抗原。在第一次溫育時(shí)，已稀釋的血清(按試劑盒要求進(jìn)行1：100稀釋)標(biāo)本與固定在膜條上的靶抗原反應(yīng)，如果標(biāo)本陽性，特異性抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合。在第二次溫育時(shí)，結(jié)合的抗體與辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgG抗體反應(yīng)，加入底物顯色，肉眼直接觀察結(jié)果，嚴(yán)格按試劑盒說明書要求操作。

1.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 18258例患者的ANCA總陽性率在18258例患者中，ANCA陽性者為922例，陽性率為5.05% (922/18258)。其中，男性ANCA陽性者為324例，陽性率為3.6%(324/8990)；女性ANCA陽性者為599例，陽性率為6.5%(599/9268)，且兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=77.72，P<0.01)。

2.2不同年齡組中ANCA陽性率分析在922例ANCA陽性患者中≥50歲組的陽性率最高(5.8%)，與≤20歲組(5.2%)和21～49歲組(4.1%)比較，陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=25.036，P<0.01)。且≤20歲組(男0.9%，女10.1%)、2l～49歲組(男2.2%，女5.6%)、≥50歲組(男5%，女6.7%)中的不同性別間ANCA陽性率差異同樣有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=60.067、54.641、12.624，P均<0.01)，見表1。

表1　ANCA陽性患者在不同性別各年齡組中ANCA陽性率比較

2.3 922例ANCA陽性者的熒光模式及其靶抗原分布在922例ANCA陽性患者中P-ANCA陽性率最高，為70.1%（646/922），靶抗原以MPO為主（68.7%）；a-ANCA為14.6%（135/922），靶抗原以MPO為主（35.6%）；C-ANCA為15.3%（141/922），靶抗原以PR3為主（40.4%）。三種ANCA熒光模型靶抗原分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=l75.453，P<0.01）。見表2。

表2　ANCA熒光模型靶抗原分布

2.4 922例ANCA陽性者的科室分布在各科室的ANCA送檢標(biāo)本中，泌外科和普外科的陽性率最高，這可能與其送檢標(biāo)本數(shù)較少有關(guān)。中醫(yī)科（7.3%），風(fēng)濕免疫科（6.9%），干部病房（7.8%），腎內(nèi)科（7.1%）ANCA陽性率較高。見表3。

表3　922例ANCA陽性者的科室分布

2.5 181例ANCA陽性分型及臨床診斷結(jié)果分析在181例ANCA陽性患者中，原發(fā)性血管炎37例，占總陽性率的20.4%，繼發(fā)性血管炎144例，占總陽性率的79.6%。在ANCA陽性的繼發(fā)性血管炎中，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（23.6%），類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（18.1%）最高。見表4。

3　討論

本次回顧性分析的均為本院ANCA的IIF和線性印跡確認(rèn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)數(shù)據(jù)。近7年來，本院18258份臨床就診患者ANCA檢測(cè)標(biāo)本中的陽性率為5.05%，其中女性與男性的陽性率比為1.81：1。ANCA總體陽性率與國(guó)內(nèi)的報(bào)道結(jié)果一致[4]。

利用乙醇固定的中性粒細(xì)胞可以明確區(qū)分兩種ANCA核型[5]，即C-ANCA和P-ANCA。表現(xiàn)為C-ANCA的，可產(chǎn)生布滿整個(gè)胞漿區(qū)域的粗顆粒樣熒光，且在核小葉之間熒光增強(qiáng)，其靶抗原以PR3為主，P-ANCA的熒光表現(xiàn)則是圍繞核周邊的連續(xù)絲帶樣熒光，且在核小葉間可見熒光增強(qiáng)，其靶抗原以MPO為主，而不典型ANCA(a-ANCA)熒光表現(xiàn)介于兩者之間。本研究發(fā)現(xiàn)a-ANCA的靶抗原以MPO為主，這與很多實(shí)驗(yàn)室會(huì)將其納入PANCA范疇是相符的。

本研究表明ANCA陽性的患者不只來源于風(fēng)濕免疫科，在其他科室也有較高的ANCA陽性率，尤其是干部病房（7.8%）、中西醫(yī)結(jié)合科（7.3%）和腎內(nèi)科（7.1%）。這主要是由于本院在風(fēng)濕免疫科成立之前，自身免疫性疾病納入中西醫(yī)結(jié)合科就診，腎內(nèi)科ANCA陽性率高是由于ANCA與壞死性新月體腎炎、腎小球壞死等腎病相關(guān)[6]。臨床工作者應(yīng)關(guān)注ANCA檢測(cè)，以防漏診。

本研究中20.4%ANCA陽性者為原發(fā)性血管炎，79.6% ANCA陽性者為繼發(fā)性血管炎，靶抗原都以MPO為主，陽性率分別為94.6%和61.1%，這與報(bào)道相似[7]。在繼發(fā)性血管炎中，以SLE（23.6）和RA（18.1）來源最高，這與報(bào)道基本一致[8]，SLE出現(xiàn)ANCA陽性表明其處于活動(dòng)期，代表多系統(tǒng)損害，提示SLE病情相對(duì)復(fù)雜，可以作為臨床上判斷病情嚴(yán)重性的參考指標(biāo)[9，10]。此外，ANCA陽性還可出現(xiàn)于腎病、間質(zhì)性肺炎、炎癥性腸炎和甲亢等疾病。據(jù)綜述分析[11]，ANCA可作為炎癥性腸炎的分子標(biāo)志物，尤其PR3-ANCA在炎癥性腸炎中的重要性，這與本文的報(bào)道是一致的。研究[7，12]報(bào)道間質(zhì)性肺炎可出現(xiàn)ANCA陽性，并且有可能發(fā)展為血管，本文發(fā)現(xiàn)以間質(zhì)性肺炎ANCA陽性率5.5%，主要表現(xiàn)為MPO-ANCA。早在1997年就有文獻(xiàn)[13]報(bào)道丙基硫氧嘧啶治療甲亢患者可引起ANCA陽性，近年來也不斷報(bào)道甲亢治療可引起ANCA陽性[14]。本文也發(fā)現(xiàn)在甲亢患者中可出現(xiàn)ANCA陽性，并且陽性率為3.5%。由于PR3-ANCA可在血管炎病變尚未嚴(yán)重影響肺、腎功能前出現(xiàn)，MPOANCA強(qiáng)烈提示壞死性血管炎，因此ANCA的檢測(cè)有利于血管炎的早期診斷和療效觀察[15，16]。隨著對(duì)ANCA研究的深人與其相關(guān)的疾病越來越多，其對(duì)疾病的診斷鑒別及預(yù)后判定的價(jià)值受到醫(yī)學(xué)界的重視，但ANCA無嚴(yán)格的特異性，故臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查對(duì)疾病進(jìn)行診斷鑒別及預(yù)后判定。

另外，在181例ANCA陽性患者中有32例抗PR3與抗MPO均為陰性，表明存在除MPO、PR3以外的靶抗原，包括彈性蛋白酶、組織蛋白酶、溶菌酶、乳鐵蛋白和通透性殺菌蛋白等，需進(jìn)一步用其他特異性靶抗原加以證實(shí)，臨床上有待于進(jìn)一步開展此類抗體的檢測(cè)。

表4　181例ANCA陽性分型及臨床診斷結(jié)果[n（%）]

通過本次分析，了解了ANCA在臨床就診患者中的總體分布及在不同科室和疾病中的陽性率、熒光模式及靶抗原的分布。臨床就診患者中ANCA的陽性率在不同性別、年齡組間存在差異；不同熒光模式ANCA其靶抗原存在差異；不同科室及相關(guān)疾病ANCA陽性率不同，檢測(cè)ANCA不僅對(duì)原發(fā)性血管炎的早期診斷與治療具有重要意義，對(duì)SLE和RA等其他合并有血管損害的繼發(fā)性血管炎診斷及治療具有指導(dǎo)意義，因此臨床檢驗(yàn)工作中應(yīng)重視ANCA在疾病診斷中的臨床價(jià)值。

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(收稿日期2015-10-08；修回日期2016-03-02)

DOI：10.3969/j.issn.1674－1129.2016.02.034

中圖分類號(hào)：R446.62，R593.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1674－1129(2016)02－0223－04