外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF的表達(dá)及臨床意義

范紅偉　白鳳樓　郝國(guó)榮　李清雪

050011　河北省石家莊市第四醫(yī)院婦一科

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·論著·

外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF的表達(dá)及臨床意義

范紅偉白鳳樓郝國(guó)榮李清雪

050011河北省石家莊市第四醫(yī)院婦一科

【摘要】目的了解血管緊張素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中的表達(dá)，探討外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病的發(fā)病機(jī)制。方法采取免疫組化鏈霉素抗生物素-過氧化酶(S-P)法，觀察Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF在40例外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中的表達(dá)情況，并與20例正常外陰皮膚作為對(duì)照組。結(jié)果Ang-Ⅱ在外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中的表達(dá)顯著低于正常外陰組織(P<0.05)；MMP-9在外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中的表達(dá)顯著低于正常外陰組織(P<0.05)；VEGF在外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中的表達(dá)顯著低于正常外陰組織(P<0.05)。結(jié)論外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF的表達(dá)降低，提示局部神經(jīng)組織微血管功能障礙可能是外陰營(yíng)養(yǎng)不良的相關(guān)因素之一。

【關(guān)鍵詞】外陰營(yíng)養(yǎng)不良；血管緊張素-Ⅱ；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病是指女性外陰皮膚和黏膜組織發(fā)生變性及色素減退的一系列慢性疾病，外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病根據(jù)病理表現(xiàn)不同分為：外陰鱗狀上皮增生型、外陰硬化性苔癬型、外陰硬化性苔蘚合并鱗狀上皮增生型共三種類型。外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病晚期常伴有外陰萎縮、陰道口狹窄、同房不適等癥狀，甚至癌變。由于外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病病因不清，仍系臨床一頑癥。截至目前，此病發(fā)病機(jī)制和病因尚未清楚。有研究證實(shí)，其發(fā)病原因可能與外陰的神經(jīng)變性、微血管障礙等多種因素有一定相關(guān)性[1]。本文采用免疫組化方法研究血管緊張素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中的表達(dá)情況，探討這三種因子與外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病發(fā)生的相關(guān)性，為今后的外陰不良疾病的發(fā)生、發(fā)展、診斷及診斷及治療提供一定的參考價(jià)值。

1資料與方法

1.1一般資料收集2008年3月至2014年3月在我院住院的外陰營(yíng)養(yǎng)不良患者外陰活檢標(biāo)本中的60例作為外陰營(yíng)養(yǎng)不良組，參照1987年ISSVA和IPA討論建議的分類標(biāo)準(zhǔn)分為外陰硬化性苔蘚(LS)型30例,外陰鱗狀細(xì)胞增生(SH)型25例和外陰硬化性苔蘚及外陰鱗狀細(xì)胞增生混合型(LS、SH混合型)5例；年齡18～60歲,平均年齡(45±9)歲；取同期因其他手術(shù)獲取的正常外陰皮膚活檢標(biāo)本40例為對(duì)照(正常皮膚組)，年齡22～59歲，平均年齡(44±10)歲。2組患者年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2試劑與方法(1)試劑選?。篠P法成套免疫組織化學(xué)試劑盒、鼠抗人MMP-9單克隆抗體均購自天津中平科技有限公司，羊抗人Ang-Ⅱ多克隆抗體免疫組化試劑盒購自R&D公司，鼠抗人VEGF單克隆抗體購自天津中平科技有限公司。(2)方法：采用SP法，免疫組化程序按試劑盒說明進(jìn)行，采用免疫組織化學(xué)法進(jìn)行檢測(cè)，甲醛固定以后石蠟包埋切片，每種病理切片5張。

1.3結(jié)果判斷Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF陽性反應(yīng)為細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃至深棕色顆粒。采用雙盲方法進(jìn)行，采用高倍顯微鏡(×400)隨機(jī)選取10個(gè)視野，每個(gè)視野均計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。無陽性細(xì)胞的視野計(jì)為陰性(-)，根據(jù)選取視野中陽性細(xì)胞的百分率判斷分為：<5%(+)，5%～15%(++)，>15%(+++)。

2結(jié)果

2.1Ang-Ⅱ在外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中的表達(dá)正常皮膚組40例，Ang-Ⅱ表達(dá)陽性者36例；外陰營(yíng)養(yǎng)不良組共60例，Ang-Ⅱ表達(dá)陽性者1例；2組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中LS型組30例，表達(dá)陽性者1例，與正常皮膚組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；SH型25例，表達(dá)陽性者0例，與正常皮膚組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；LS、SH混合型組5例，表達(dá)陽性者0例，與正常皮膚組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　Ang-Ⅱ在外陰組織中的表達(dá)　例

注：與正常皮膚組比較，*P<0.05

2.2MMP-9在外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中的表達(dá)正常皮膚組與外陰營(yíng)養(yǎng)不良組MMP-9陽性者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中LS組30例，表達(dá)陽性者10例，與正常皮膚組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；SH組25例，表達(dá)陽性者8例，與正常膚組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；LS、SH混合型組5例，表達(dá)陽性者2例，與正常皮膚組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2　MMP-9在外陰組織中的表達(dá)　例

注：與正常皮膚組比較，*P<0.05

2.3VEGF在外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中的表達(dá)正常皮膚組40例，VEGF表達(dá)陽性者36例；外陰營(yíng)養(yǎng)不良組共60例，VEGF表達(dá)陽性者4例；2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中LS組 30例，表達(dá)陽性者3例，SH組 25例，表達(dá)陽性者1例，LS、SH混合型組5例，表達(dá)均為陰性，3組與正常皮膚組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3　VEGF在外陰組織中的表達(dá)　例

注：與正常皮膚組比較，*P<0.05

3討論

外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病以外陰及肛周皮膚變薄、萎縮、彈性降低、色素減退、嚴(yán)重者致陰道口狹窄、同床困難等臨床癥狀為主要特征。外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病分為：(1)外陰鱗狀上皮增生型：此種疾病類型的病理表現(xiàn)為光鏡下表層皮膚角化不全或者角化過度，及輕重不等的慢性非特異性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為特點(diǎn)；(2)外陰硬化性苔蘚型：此種疾病類型的病理表現(xiàn)為光鏡下表皮萎縮，除此之外，上皮黑素細(xì)胞減少，同時(shí)由于表皮過度角化及黑素細(xì)胞減少致使外陰皮膚外觀變淺、色素減退，甚至皮膚呈白色；(3)外陰硬化性苔蘚合并鱗狀上皮增生型：此疾病具備以上兩種病理類型，以外陰皮膚萎縮變薄伴局灶隆起、角化過度為主要特點(diǎn)。

外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病中外陰硬化苔蘚型的發(fā)病機(jī)制為外陰真皮淺層的微小血管數(shù)目較正常組織的明顯減少，使外陰真皮微循環(huán)的血供降低，表皮失去營(yíng)養(yǎng)支持而發(fā)生外陰萎縮所造成的病變；外陰鱗狀細(xì)胞增生型的病因是外陰組織細(xì)胞的變性和真皮乳頭水腫，在局部炎性細(xì)胞的刺激過程中，外陰組織毛細(xì)血管痙攣、閉塞，從而導(dǎo)致局部組織的膠原纖維生成障礙和微循環(huán)障礙，引起外陰表皮細(xì)胞發(fā)生一系列不同程度的病變[2]。有研究認(rèn)為外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病的致病因素可能與自身免疫因子、遺傳因素、HPV病毒感染、代謝紊亂等多種因素相關(guān)[3]。

外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病是指多種原因引起的外陰皮膚和黏膜營(yíng)養(yǎng)障礙而產(chǎn)生的表皮組織增生和真皮組織變性及色素脫失性疾病,其發(fā)病與上皮代謝的功能紊亂密切相關(guān)。它常常引起劇烈的、難以忍受的外陰瘙癢而嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。從幼年到老年均可發(fā)病,高峰年齡在40歲前后,3%～5%會(huì)發(fā)生癌變[1]。研究表明，外陰組織表皮的病變是繼發(fā)的,其主要的病理變化發(fā)生在外陰組織的真皮層[4]。

Ang-Ⅱ是一種促使新血管生成的誘導(dǎo)劑，Ang-Ⅱ?qū)儆诤颂呛怂崦赋易逯械囊粏T[5]。Ang-Ⅱ的蛋白中共含有123個(gè)氨基酸，其相對(duì)分子量為14.4 kD，在腫瘤細(xì)胞研究中首先發(fā)現(xiàn)，當(dāng)然，它也存在于正常細(xì)胞中，可以由多種細(xì)胞分泌，它的核糖核酸酶活性較弱。研究證實(shí)，Ang-Ⅱ可以在細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞間發(fā)揮著促進(jìn)血管生長(zhǎng)的作用[6]。并且認(rèn)為：其促進(jìn)血管生成機(jī)制為：當(dāng)Ang-Ⅱ與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面相結(jié)合時(shí)，細(xì)胞表面的肌動(dòng)蛋白(actin)隨之與Ang-Ⅱ結(jié)合，從而激發(fā)血漿纖溶酶原的活性，進(jìn)一步刺激了細(xì)胞相關(guān)的蛋白水解酶(cell associated proteolytic)的活性，溶解細(xì)胞間基質(zhì)，同時(shí)活化內(nèi)皮細(xì)胞的連接蛋白，進(jìn)而引導(dǎo)細(xì)胞遷移和侵襲[7]；另外,Ang-Ⅱ還可以刺激細(xì)胞的增殖、調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)有絲分裂原的活性、使細(xì)胞發(fā)生增生、形成管腔結(jié)構(gòu)等多種功能。本研究發(fā)現(xiàn)，外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中Ang-Ⅱ的表達(dá)較正常外陰組織降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一組鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，它與腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)的ECM降解過程密切相關(guān)[8]。MMPs是一個(gè)大家族，其中的明膠酶有兩種，明膠酶A(MMP-2)可以降解多種類型的膠原和蛋白[9]。MMPs參與機(jī)體內(nèi)一系列生理病理過程，特別是在腫瘤的轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)中發(fā)揮著不可缺少的作用[10-12]。MMP-9是MMPs家族中分子量最大的一個(gè)酶，其作用機(jī)制為通過降解 ECM，破壞基底膜屏障，破壞局部組織結(jié)構(gòu)，促進(jìn)新生血管的形成。本研究發(fā)現(xiàn)，外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中MMP-9的表達(dá)較正常外陰組織降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

VEGF是一種肝素結(jié)合因子，是作用最強(qiáng)、特異性最高的調(diào)控因子，VEGF的主要作用靶點(diǎn)為血管內(nèi)皮細(xì)胞，它和內(nèi)皮細(xì)胞上的受體高親和力完成結(jié)合后，作為內(nèi)皮細(xì)胞的特異性有絲分裂原，從而誘導(dǎo)毛細(xì)血管袢形成及內(nèi)皮細(xì)胞的增生[13]，同時(shí)，VEGF也可以誘導(dǎo)內(nèi)皮的間質(zhì)產(chǎn)生，增加微血管通透性，從而促進(jìn)體內(nèi)新生血管的生成[14]。另外，研究已證實(shí)VEGF還可以促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞的生長(zhǎng)及增殖，刺激雪旺細(xì)胞的分裂，具有營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)及保護(hù)神經(jīng)的功能與作用[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中VEGF的表達(dá)較正常外陰組織降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

綜上所述，外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF的表達(dá)較正常組織中的明顯降低，進(jìn)一步證實(shí)Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF這三種因子，在外陰營(yíng)養(yǎng)不良組織中外陰及肛周皮膚變薄萎縮、彈性降低、色素減退等一系列病情變化的發(fā)生、發(fā)展及演變過程中，發(fā)揮著重要作用，提示局部血管的微循環(huán)障礙和膠原纖維生成障礙,可能是外陰營(yíng)養(yǎng)不良的相關(guān)因素之一，在今后的外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病基因治療中，適當(dāng)上調(diào)Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF這三種因子的表達(dá)，將會(huì)緩解外陰營(yíng)養(yǎng)不良疾病的臨床癥狀，進(jìn)一步治療外陰不良疾病這一頑癥提供良好的前景。

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(收稿日期：2015-11-27)

【中圖分類號(hào)】R 711.73

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002-7386(2016)09-1383-03

通訊作者：李清雪，050011河北省石家莊市第四醫(yī)院；

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.09.033

E-mail：gangyv@126.com