ABO血型正反定型與交叉配血實(shí)驗(yàn)結(jié)果及影響因素分析

龐衛(wèi)花　徐娜　楊敬芳　安和兵　李金巍

075100　河北省張家口市，河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科(龐衛(wèi)花、楊敬芳、安和兵、李金巍)，婦產(chǎn)科(徐娜)

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·論著·

ABO血型正反定型與交叉配血實(shí)驗(yàn)結(jié)果及影響因素分析

龐衛(wèi)花徐娜楊敬芳安和兵李金巍

075100河北省張家口市，河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科(龐衛(wèi)花、楊敬芳、安和兵、李金巍)，婦產(chǎn)科(徐娜)

【摘要】目的分析ABO血型正反定型與交叉配血實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并探討其影響因素。方法選擇3 000例血清標(biāo)本，采用微柱凝膠法行ABO正反定型及Rh血型鑒定，并與異型血進(jìn)行交叉配血。對(duì)78例ABO正反定型與交叉配血不合的標(biāo)本，采用2-Me處理被患者自身冷抗體凝集的紅細(xì)胞，凝聚胺法及微柱凝膠法行血型不規(guī)則抗體篩選及特異性鑒定，氯喹放散法測定自身抗體所掩蓋的同種抗體等，分析ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因。結(jié)果3 000例經(jīng)正定型檢測的血清標(biāo)本，其中紅細(xì)胞定型為A型879例，676例檢出抗B，203例未檢出抗B，抗B檢出率76.9%(676/879)；紅細(xì)胞定型為B型1 034例，762例檢出抗A，272例未檢出抗A，抗A檢出率73.7%(762/1 034)；紅細(xì)胞定型為O型1 087例，770例同時(shí)檢出抗A和抗B，抗A和抗B檢出率70.8%(770/1 087)，76例僅檢出抗A，抗A檢出率7.0%(76/1 087)，60例僅檢出抗B，抗B檢出率5.5%(60/1 087)，181例未檢出抗A和抗B。選擇反定型完全沒出現(xiàn)凝集反應(yīng)的800例血清標(biāo)本，采用微柱凝膠法進(jìn)行交叉配血實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，78例出現(xiàn)凝集反應(yīng)，配血不合。經(jīng)分析，ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因主要有：自身冷抗體21例(26.9%)、血型不規(guī)則抗體14例(17.9%)、血型抗原性減弱11例(14.1%)、血型抗體效價(jià)減弱9例(11.5%)、自身抗體陽性9例(11.5%)、實(shí)驗(yàn)方法學(xué)原因6例(7.7%)，此外，肝素影響及血標(biāo)本細(xì)菌污染也為重要原因。結(jié)論ABO血型鑒定中正反定型大部分一致，而出現(xiàn)正反定型不符與交叉配血不合的原因有多種，其中自身冷抗體、血型不規(guī)則抗體、血型抗原性減弱、血型抗體效價(jià)減弱、自身抗體陽性占較大比例，臨床輸血前應(yīng)采取多種血型血清學(xué)檢測方法進(jìn)行相互驗(yàn)證，確保臨床輸血安全，保障患者安全。

【關(guān)鍵詞】ABO血型；正反定型；交叉配血；微柱凝膠法

對(duì)于失血性休克、貧血及重癥感染、燒傷等危重患者，數(shù)學(xué)為臨床常用重要干預(yù)手段之一。目前，臨床雖提倡成分輸血，安全性較高。但研究表明，輸血在挽救患者生命同時(shí)，也帶來一定不良反應(yīng)，如免疫抑制、溶血性輸血反應(yīng)等，嚴(yán)重時(shí)可影響患者生命安全[1]。有文獻(xiàn)報(bào)道，ABO血型正反定型不符可致急性溶血性貧血等發(fā)生，給患者生命安全帶來嚴(yán)重威脅[2]。本研究檢測我院2012年4月至2014年4月共3 000例患者、送檢血樣及獻(xiàn)血員標(biāo)本，并對(duì)一些ABO血型正反定型不符標(biāo)本進(jìn)行交叉配血實(shí)驗(yàn)，探討ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因及對(duì)處理方式進(jìn)行探討，以期為臨床安全輸血提供建議。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年4月至2014年4月我院3 000例患者、送檢血樣及獻(xiàn)血員標(biāo)本，送檢驗(yàn)科進(jìn)行ABO血型鑒定。其中男1 800例，女1 200例；年齡5～85歲，平均年齡(39±12)歲。包括白血病患者325例，多發(fā)性骨髓瘤患者91例，骨髓纖維化患者24例，貧血患者288例，腸癌患者164例，消化道出血患者270例，外科手術(shù)患者269例，以及其他相關(guān)疾病患者1 569例。篩選出ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的78例患者作為研究對(duì)象，其中男41例，女37例；年齡20～65歲，平均年齡(46±9)歲。本研究均經(jīng)患者及家屬知情同意，且均符合醫(yī)院倫理委員會(huì)基本要求。

1.2試劑所用試劑抗A、抗B、抗A+B、抗H、抗A1、抗D、抗c等均購自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，反定型后細(xì)胞懸液由長春博德生物制品研究所提供；微柱凝膠卡及專用離心機(jī)購自達(dá)亞美公司。

1.3儀器免疫微柱離心機(jī)、卡式專用離心機(jī)、免疫微柱孵育箱購自達(dá)亞美公司。

1.4血型鑒定方法

1.4.1ABO血型正反定型:使用長春博訊ABO、RhD血型定型試劑卡將全體血樣標(biāo)本進(jìn)行ABO血型正反定型，篩選出正反定型不符的標(biāo)本。對(duì)此初次出現(xiàn)正反定型不符的標(biāo)本重新采集，并嚴(yán)格按照微柱凝膠卡操作規(guī)程重復(fù)試驗(yàn)，以排除人為因素及技術(shù)失誤。對(duì)重新采集的血樣，留取唾液做進(jìn)一步的血型物質(zhì)鑒定。

1.4.2交叉配血:將患者血清及紅細(xì)胞放置37℃水浴中預(yù)溫10 min，再采用微柱凝膠法進(jìn)性交叉配血實(shí)驗(yàn)。

1.4.3ABO血型正反定型與交叉配血不符的進(jìn)一步鑒定:應(yīng)用2-Me處理被患者自身冷抗體凝集的紅細(xì)胞，凝聚胺法及微柱凝膠法行血型不規(guī)則抗體篩選及特異性鑒定，氯喹放散法測定自身抗體所掩蓋的同種抗體。

1.5鑒定標(biāo)準(zhǔn)鑒定檢測均參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》和《臨床輸血診療技術(shù)》進(jìn)行。

2結(jié)果

2.1血清ABO血型抗體檢測結(jié)果選取3 000例經(jīng)正定型檢測的血清標(biāo)本，其中紅細(xì)胞定型為A型879例，676例檢出抗B，203例未檢出抗B，抗B檢出率76.9%(676/879)，正反定型不相符率4.2%(37/879)；紅細(xì)胞定型為B型1 034例，762例檢出抗A，272例未檢出抗A，抗A檢出率73.7%(762/1 034)，正反定型不相符率4.2%(43/1 034)；紅細(xì)胞定型為O型1 087例，770例同時(shí)檢出抗A和抗B，抗A和抗B檢出率70.8%(770/1 087)，正反定型不相符率1.8%(20/1 087)76例僅檢出抗A，抗A檢出率7.0%(76/1 087)，60例僅檢出抗B，抗B檢出率5.5%(60/1 087)，181例未檢出抗A和抗B。見表1。

表1　3 000例血清標(biāo)本ABO抗體檢出情況

2.2血清反定型與反應(yīng)時(shí)間的關(guān)系選取正定型為A型、反定型為B性的血清標(biāo)本各1 000例進(jìn)行反定型檢測，結(jié)果顯示，隨著反應(yīng)時(shí)間延長，出現(xiàn)凝集反應(yīng)的標(biāo)本數(shù)逐漸增多。見表2。

表2　正定型為A、B型血清標(biāo)本各1 000例反定型實(shí)驗(yàn)檢測情況　例(%)

2.3交叉配血實(shí)驗(yàn)選擇反定型完全沒出現(xiàn)凝集反應(yīng)的800例血清標(biāo)本，采用微柱凝膠法進(jìn)行交叉配血實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，78例出現(xiàn)凝集反應(yīng)，配血不合。

2.4ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因分析經(jīng)ABO正反定型、吸收放散試驗(yàn)、抗人球蛋白試驗(yàn)及血型不規(guī)則抗體篩選等，整理分析得出造成ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因主要有：自身冷抗體、血型不規(guī)則抗體、血型抗原性減弱、血型抗體效價(jià)減弱、自身抗體陽性等。見表3。

表3　ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因分析

3討論

輸血對(duì)于失血性休克等危重患者具有重要臨床價(jià)值，有文獻(xiàn)報(bào)道，輸血前有部分患者ABO血型正反定型不符及交叉配血不合，導(dǎo)致無法確認(rèn)患者血型，影響輸血搶救，不利于臨床治療[3,4]。正因如此，探討ABO血型正反定型不符及交叉配血不合相關(guān)原因具有重要價(jià)值。

本研究采用微柱凝膠法結(jié)合血清學(xué)方法檢測ABO血型正反定型，并與異型血進(jìn)行交叉配血實(shí)驗(yàn)，篩選出其中ABO血型正反定型與交叉配血不合病例。本結(jié)果顯示，879例紅細(xì)胞定型為A型的標(biāo)本正反定型不相符率4.2%(37/879)，1 034例紅細(xì)胞定型為B型的標(biāo)本正反定型不相符率4.2%(43/1 034)，1 087例紅細(xì)胞定型為O型的標(biāo)本正反定型不相符率1.8%(20/1 087)，說明3 000例標(biāo)本中大部分患者ABO血型正反定型一致。交叉配血實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，800例標(biāo)本中有78例出現(xiàn)凝集反應(yīng)，配血不合。我們分析其原因，主要影響因素：(1)自身冷抗體：為影響ABO血型正反定型不符及交叉配血不合最為常見原因之一。健康人群冷凝集素效價(jià)一般低于1∶16，其活性在0～4℃時(shí)最強(qiáng)，能夠與紅細(xì)胞結(jié)合引起凝集反應(yīng)[5]。但在支原體肺炎、自身免疫性貧血、傳染性單核細(xì)胞增多癥、某些惡性腫瘤等病理情況下，患者血清中具有高效價(jià)冷凝激素，影響檢測結(jié)果[5,6]。此種情況下，需加做自身對(duì)照并結(jié)合冷抗體效價(jià)檢測、冷抗體吸收試驗(yàn)、直接抗人球蛋白試驗(yàn)等一系列實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定。本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)此類患者將血清及紅細(xì)胞置于37°C孵育15 min行離心觀察，于凝固狀態(tài)下使用2-Me處理紅細(xì)胞，后進(jìn)行ABO正定型，有助于準(zhǔn)確判斷。(2)血型不規(guī)則抗體：血型不規(guī)則抗體為ABO血型不合另一重要原因，有研究表明，血型不規(guī)則抗體檢出率為0.3%～2.0%，為引起較差配血不合及輸血反應(yīng)的重要原因之一。在自身對(duì)照為陰性情況下，若反定型與O型細(xì)胞凝集反應(yīng)呈陽性，則應(yīng)該考慮血型不規(guī)則抗體出現(xiàn)的可能性[7]。針對(duì)于此種原因時(shí)，可通過細(xì)胞及譜細(xì)胞篩選出血型不規(guī)則抗體并進(jìn)行特異性鑒定，從而選擇合適血液進(jìn)行輸血搶救。(3)血型抗原性減弱：血型抗原減弱為ABO血型不符及交叉配血不合發(fā)生的另一重要原因。相關(guān)研究表明，白血病及惡性腫瘤患者由于外周血出現(xiàn)大量原始及幼稚細(xì)胞，引起血型抗原性減弱，從而導(dǎo)致血型誤定現(xiàn)象發(fā)生[8, 9]。此時(shí)，加大試劑血清劑量，延長放置時(shí)間后再行離心試驗(yàn)觀察則有助于判斷。(4)血型抗體效價(jià)下降：血型抗體減弱臨床應(yīng)重視。有研究表明，若僅為抗體減弱，延長抗原抗體反應(yīng)時(shí)間或者加大血清劑量有助于評(píng)估[6]。(5)自身抗體陽性：自身抗體陽性主要指機(jī)體收到自身血型抗原刺激后，機(jī)體所產(chǎn)生的免疫性抗體，可采取抗人球蛋白法進(jìn)行判斷。(6)血漿蛋白異常：血漿蛋白異常為ABO血型正反定型不符及交叉配血不合的重要因素，肝臟疾病、多發(fā)性骨髓瘤等患者血清中存在異常球蛋白，且部分疾病可引起纖維蛋白水平增高等可致定型困難[10]。(7)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)原因：在使用微柱凝膠法檢測ABO血型時(shí)，如果血標(biāo)本抗凝效果差或者離心時(shí)間過短等原因?qū)е卵欣w維蛋白含量升高進(jìn)而出現(xiàn)假性凝集反應(yīng)[11]。因此，臨床檢測過程中應(yīng)嚴(yán)格按照步驟進(jìn)行操作，盡量消除血中纖維蛋白對(duì)結(jié)果的影響。(8)血樣污染：細(xì)菌污染能夠激活紅細(xì)胞上的T抗原，從而與供血者血清中的抗T抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集反應(yīng)，這也是造成假陽性結(jié)果的原因之一。臨床進(jìn)行血型鑒定及交叉配血工作時(shí)，應(yīng)盡量選擇新鮮的血標(biāo)本，保障臨床輸血安全。

綜上所述，正確的ABO血型正反定型及交叉配血是保證臨床安全輸血的關(guān)鍵和前提，引起正反定型不符及交叉配血不合的原因有多種，其中自身冷抗體、血型不規(guī)則抗體、血型抗原性減弱、血型抗體效價(jià)減弱、自身抗體陽性等均為重要原因，針對(duì)于不同情況，我們可采取針對(duì)性措施以降低其發(fā)生，保障臨床輸血安全。

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(收稿日期：2015-12-11)

【中圖分類號(hào)】R 446.11

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002-7386(2016)09-1366-03

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.09.027