AG490抑制DOCI-LY8和Raji細(xì)胞生長(zhǎng)及與STAT3信號(hào)的關(guān)系*

李品浩，楊文秀，陳　琴，裴媛媛

(貴州醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，貴州貴陽　550004)

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AG490抑制DOCI-LY8和Raji細(xì)胞生長(zhǎng)及與STAT3信號(hào)的關(guān)系*

李品浩，楊文秀＊＊，陳琴，裴媛媛

(貴州醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，貴州貴陽550004)

［摘要］目的:研究AG490對(duì)伯基特淋巴瘤(BL) Raji細(xì)胞和彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL) OCI-LY8細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及分子機(jī)制。方法:用不含AG490(對(duì)照組)和不同濃度(25、50、75及100 mg/L) AG490(試驗(yàn)組)分別培養(yǎng)Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞24、48及72 h，用MTT法檢查2株細(xì)胞的代謝生長(zhǎng)情況，RT-qPCR檢測(cè)對(duì)照組和各試驗(yàn)組培養(yǎng)48 h時(shí)2株細(xì)胞STAT3、TIMP-1的mRNA表達(dá);用Western blot檢測(cè)AG490 50 mg/L培養(yǎng)48 h時(shí)Raji細(xì)胞的STAT3、p-STAT3及TIMP-1蛋白的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)2株細(xì)胞的細(xì)胞周期變化。結(jié)果:在2株細(xì)胞中加入AG490后，細(xì)胞生長(zhǎng)較對(duì)照組明顯減弱(P＜0.05) ;與相應(yīng)對(duì)照組比較，AG490試驗(yàn)組的Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞的G1期細(xì)胞都明顯增多(P＜0.05)，處于S期的Raji細(xì)胞無明顯改變、而OCI-LY8細(xì)胞則明顯減少(P＜0.05)，G2-M期的Raji細(xì)胞明顯減少(P＜0.05)、G2-M期的OCI-LY8細(xì)胞亦有減少的趨勢(shì); STAT3和TIMP-1的mRNA表達(dá)明顯降低，且呈現(xiàn)出藥物濃度依賴關(guān)系(P＜0.05) ; 2株細(xì)胞內(nèi)TIMP-1與STAT3的mRNA表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(Raji r = 0.744，P = 0.034; OCI-LY8 r = 0.984，P = 0.000) ; AG490組Raji細(xì)胞中p-STAT3、STAT3和TIMP-1蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯降低。結(jié)論: AG490對(duì)Raji細(xì)胞和OCI-ly8細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯抑制作用，TIMP-1的表達(dá)可能與SATA3的活化有關(guān)，STAT3活化及其下游靶基因TIMP-1的上調(diào)表達(dá)可能是AG490影響2株細(xì)胞生長(zhǎng)的重要分子機(jī)制。

［關(guān)鍵詞］淋巴瘤，B細(xì)胞;伯基特淋巴瘤;信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子;基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1; AG490;生長(zhǎng)抑制物

＊＊通信作者E-mail: ypq1964@163.com

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間: 2016－02－23網(wǎng)絡(luò)出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160223.2003.026.html

侵襲性的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)和高侵襲性的伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma，BL)的發(fā)生和演進(jìn)過程是一個(gè)多分子事件，涉及到很多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducers and activators of transcriptions，STATs)是胞漿蛋白家族［1］，它可被不同的細(xì)胞因子受體激活，轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)與相應(yīng)DNA靶點(diǎn)結(jié)合，具有轉(zhuǎn)錄調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的雙重功能，STAT3則是該家族的重要成員。臨床研究發(fā)現(xiàn)STAT3活性的高頻率異?；罨诙喾N惡性腫瘤中存在，且活化程度與腫瘤的不良預(yù)后有關(guān)［2－8］。STAT3持續(xù)性的激活可誘導(dǎo)與細(xì)胞增殖、分化、凋亡密切相關(guān)的一系列基因的異常高表達(dá)，是EGFR、IL-6/JAK、Src等多個(gè)致癌性酪氨酸激酶信號(hào)通道的匯聚焦點(diǎn)［9］，與抗凋亡基因Bcl-xl和Mcl-1、細(xì)胞周期調(diào)控基因CyclinD1和cmyc、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子編碼基因VEGF等都密切相關(guān)。阻斷STAT3轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可以阻斷多種導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的相關(guān)機(jī)制，這是腫瘤治療研究所關(guān)注的熱點(diǎn)［10］。有研究發(fā)現(xiàn)部分BL和DLBCL中均發(fā)現(xiàn)STAT3分子的異常高表達(dá)，但其活化對(duì)BL和DLBCL影響的分子機(jī)制尚未完全清楚［11－12］。本研究通過觀察STAT3特異性抑制劑AG490對(duì)BLRaji細(xì)胞和DLBCL-OCI-LY8細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，探討STAT3和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1，TIMP-1)的活化是否與AG490對(duì)兩種淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用有關(guān)，為尋找臨床治療BL和DLBCL的基因靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

BL-Raji細(xì)胞株購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫，DLBCL-OCI-LY8細(xì)胞株由復(fù)旦大學(xué)腫瘤醫(yī)院周曉燕教授惠贈(zèng)。細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI1640購自Hyclone公司，總RNA試劑盒購自上海碧云天公司，RTPCR試劑盒購自Invitrogen公司，抗STAT3(單克隆抗體)、抗TIMP-1和抗β-actin抗體購自Santa Cruz公司，抗p-STAT3抗體購自CST公司，，IL-6購自Pepro TECH公司，PCR引物由上海生工合成。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)和分組分別將Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞置于RPMI1640培養(yǎng)液(10%胎牛血清和1%青霉素/鏈霉素)及混合培養(yǎng)基(10%胎牛血清、90% IMDM和1%雙抗)中，在37℃、5% CO2飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2～3 d換液1次，待細(xì)胞計(jì)數(shù)＞1×106/mL時(shí)，按1∶2～1∶3傳代培養(yǎng)。收集細(xì)胞并調(diào)節(jié)濃度為2×105/mL，2株細(xì)胞分別加入不含AG490(對(duì)照組)和不同濃度的AG490(不同濃度AG490組，AG490分別為25、50、75及100 mg/L)中，繼續(xù)培養(yǎng)24、48及72 h。

1.2.2檢測(cè)細(xì)胞活力用MTT法檢測(cè)Raji和OCI-LY8細(xì)胞生長(zhǎng)活力。分別于培養(yǎng)24、48及72 h時(shí)收集對(duì)照組和不同濃度AG490試驗(yàn)組的Raji和OCI-ly8細(xì)胞于無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h，同步化后于96孔板布板。每孔加入0.5% MTT 20 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，加入三聯(lián)溶劑(SDS 10 g、異

丁醇5 mL和10 mol/L HCl 0.1 mL，用雙蒸水溶解配成100 mL溶液) 150 μL，置搖床上低速振蕩10 min。鏡下觀察結(jié)晶物溶解后，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490 nm處檢測(cè)各孔的吸光值A(chǔ)，每組5個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3檢測(cè)STAT3和TIMP-1的mRNA提取細(xì)胞mRNA，測(cè)定RNA260/280光密度比值。逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR循環(huán)參數(shù):95℃10 min、90℃15 s、60℃1 min，40個(gè)循環(huán)。結(jié)果用2－ΔΔCT表示，用β-actin作為內(nèi)參照。mRNA相對(duì)表達(dá)量2－ΔΔCt= 2－［實(shí)驗(yàn)組(Ct目的基因－Ct管家基因)－對(duì)照(Ct目的基因－Ct管家基因)］。PCR引物序列和產(chǎn)物見表1。

表1　RT-qPCR引物序列及相應(yīng)產(chǎn)物Tab.1 Primer sequence of RT-qPCR and corresponding products

1.2.4檢測(cè)STAT3，p-STAT3和TIMP-1蛋白檢測(cè)

收集加入AG490(最佳濃度取50 mg/L)培養(yǎng)48 h的Raji細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌3次，加入一定量的細(xì)胞裂解液及蛋白酶抑制劑，冰上充分裂解30 min，12 000 r/m離心5 min后取上清液。蛋白樣品采用BCA法進(jìn)行定量，加入Loading Buffer變性之后進(jìn)行PAGE凝膠電泳。上樣量為每孔30 mg，10%聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜上，p-STAT3用5% BSA封閉，其他目的蛋白用5%脫脂牛奶封閉后，分別加一抗孵育過夜(稀釋度: 抗STAT3、抗p-STAT3、抗TIMP-1均為1∶500，抗βactin 1∶1 000)，二抗稀釋比例為1∶5 000，洗膜，再加辣根過氧化酶偶聯(lián)的二抗孵育1.5 h，再洗膜。加ECL發(fā)光液顯色，暗室曝光，得到STAT3、p-STAT3及TIMP-1的條帶膠片，膠片掃描后用Gelpro32軟件分析。

1.2.5檢測(cè)細(xì)胞周期分別將Raji細(xì)胞和OCILY8細(xì)胞以70 000/mL接種于6孔板中，加入AG490(濃度為50 mg/L)培養(yǎng)細(xì)胞48 h后收集Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件包。STAT3，TIMP-1 的mRNA及蛋白表達(dá)水平采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，藥物作用的多組間比較采用單因素方差分析，多組間均數(shù)的兩兩比較采較用SNK q檢驗(yàn)，多組均數(shù)與一個(gè)對(duì)照樣本均數(shù)比較采用Dunnett t檢驗(yàn)。各藥物濃度組間兩分子表達(dá)的關(guān)系及分子表達(dá)與藥物濃度的相關(guān)性關(guān)系采用Pearson相關(guān)性分析，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1細(xì)胞活力

與相應(yīng)的對(duì)照組比較，Raji和OCI-ly8細(xì)胞490 nm處吸光度值在加入AG490后明顯降低(P ＜0.05)，Raji和OCI-ly8細(xì)胞吸光度值與AG490呈現(xiàn)出藥物濃度依賴關(guān)系，r和P依次為(－0.984，0.030)和(－0.978，0.004)。見圖1。

2.2 STAT3、TIMP-1的mRNA表達(dá)

mRNA的A260/A280光密度比值為1.8～2.0，符合后續(xù)試驗(yàn)要求。RT-qPCR結(jié)果顯示，與相應(yīng)的對(duì)照組比較，2株細(xì)胞的STAT3和TIMP-1在試驗(yàn)組中表達(dá)明顯降低，不同AG490濃度試驗(yàn)組Raji細(xì)胞和OCI-ly8細(xì)胞的之間STAT3和TIMP-1的mRNA表達(dá)有顯著差異(P＜0.05)，且2種基因mRNA表達(dá)都呈現(xiàn)出藥物濃度依賴關(guān)系(Raji細(xì)胞AG490與STAT3 r =－0.976，P = 0.024，AG490與TIMP-1 r =－0.990，P = 0.010; OCI-ly8細(xì)胞AG490與STAT3 r =－0.987，P = 0.013，AG490與TIMP-1 r =－0.994，P =0.006)。2株細(xì)胞TIMP-1與STAT3的mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r =0.744，P =0.034; r =0.984，P =0.000)。見表2。

2.3 Raji細(xì)胞p-STAT3、STAT3、TIMP-1蛋白表達(dá)

與對(duì)照組比較，Raji細(xì)胞的p-STAT3，STAT3 及TIMP-1蛋白在AG490組明顯降低(P分別為0.001，0.017，0.002)。見圖2。

2.4細(xì)胞周期

與相應(yīng)對(duì)照組比較，AG490試驗(yàn)組Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞的G1期細(xì)胞都明顯增多(P = 0.026、P =0.018)。S期Raji細(xì)胞細(xì)胞無明顯改變(P =0.967)，而S期OCI-LY8細(xì)胞明顯減少(P = 0.045)。G2-M期的Raji細(xì)胞明顯減少、G2-M期的OCI-LY8細(xì)胞亦有減少的趨勢(shì)(P = 0.02、P = 0.09)。見表3。

表2　AG490培養(yǎng)48 h時(shí)Raji和OCI-LY8細(xì)胞中STAT3 mRNA和TIMP-1mRNA表達(dá)(±s)Tab.2 mRNA expression of STAT3 and TIMP-1 in Raji and OCI-LY8 cells treated with AG490 for 48 h

表2　AG490培養(yǎng)48 h時(shí)Raji和OCI-LY8細(xì)胞中STAT3 mRNA和TIMP-1mRNA表達(dá)(±s)Tab.2 mRNA expression of STAT3 and TIMP-1 in Raji and OCI-LY8 cells treated with AG490 for 48 h

組別STAT3TIMP-1 Raji　OCI-LY8Raji　OCI-LY8對(duì)照組1111 AG490濃度(mg/L) 25　0.813±0.026　0.806±0.024　0.935±0.042　0.927±0.044 50　0.669±0.022　0.650±0.027　0.825±0.028　0.808±0.030 75　0.345±0.019　0.386±0.017　0.619±0.022　0.612±0.021 100　0.262±0.011　0.284±0.014　0.396±0.0170.420±0.019

表3　50 mg/L AG490培養(yǎng)Raji和OCI-LY8細(xì)胞48 h的細(xì)胞周期變化Tab.3 Cell cycle changes of Raji and OCI-LY8 cells treated with 50 mg/L AG490(±s)

表3　50 mg/L AG490培養(yǎng)Raji和OCI-LY8細(xì)胞48 h的細(xì)胞周期變化Tab.3 Cell cycle changes of Raji and OCI-LY8 cells treated with 50 mg/L AG490(±s)

(1)與對(duì)照組比較，P＜0.05

細(xì)胞　　分組　　細(xì)胞周期細(xì)胞(%) G1　S　G2/M Raji　 AG490 51.95±2.21(1)44.37±1.84　 3.68±0.33(1)Control 46.51±2.03　 44.31±1.01　 9.18±1.90 OCI-LY8　 AG490 63.31±2.21(1)26.68±1.31 10.01±0.73(1)Control 55.74±2.55　 30.42±2.27 13.88±0.40

圖1　AG490對(duì)Raji、OCI-LY8細(xì)胞生長(zhǎng)的影響Fig.1 The effects of AG490 at different concentrations on the growth of Raji and OCI-LY8 cells

圖2　Raji細(xì)胞中STAT3，p-STAT3，TIMP-1蛋白表達(dá)Fig.2 The protein expression of STAT3，p-STAT3 and TIMP-1 of Raji cells

3　討論

由于DLBCL的高度異質(zhì)性，聯(lián)合化療只能使約40%左右的患者達(dá)到持續(xù)緩解。高侵襲的BL臨床過程和預(yù)后很差，而且成人患者治療效果更不好。這些情況都說明淋巴瘤的發(fā)生和發(fā)展是多種病因和分子遺傳學(xué)改變的結(jié)果。針對(duì)不同的病因和遺傳學(xué)異常采用不同的治療方法是腫瘤治療的發(fā)展趨勢(shì)。有研究發(fā)現(xiàn)，JAK/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在多種淋巴瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，該通路持續(xù)激活可導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖或惡性轉(zhuǎn)化，但具體機(jī)制并不明確［13－15］。TIMPs是基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)的內(nèi)源性特異性抑制因子?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)脊椎動(dòng)物TIMPs家族由四個(gè)結(jié)構(gòu)相關(guān)的成員組成，即TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4。其中TIMP-1是一個(gè)由184個(gè)氨基酸和6個(gè)分子間二硫鍵組成的糖蛋白，其分子質(zhì)量為28 kDa。TIMP-1分兩個(gè)功能區(qū)，其N端功能區(qū)的半胱氨酸殘基與MMPs的鋅離子活性中心結(jié)合，C端功能區(qū)與MMPs的其他部位結(jié)合，以1∶1的比例形成MMP-TIMP復(fù)合體，從而阻斷MMPs與底物結(jié)合，抑制MMPs的活化及其對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的降解，抑制ECM中相關(guān)凋亡蛋白的釋放，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)［16］。TIMP-1也被看作是一種MMPs基因轉(zhuǎn)錄的抑制劑。關(guān)于TIMP-1研究還有不同的報(bào)道［17－19］: TIMP-1基因位于JAK/STAT信號(hào)通路的下游，其蛋白表達(dá)水平受JAK/STAT信號(hào)通路調(diào)控; JAK/STAT信號(hào)通路可通過上調(diào)TIMP-1的表達(dá)而抑制大鼠腎小球系膜細(xì)胞的調(diào)亡; TIMP-1和JAK/STAT的表達(dá)在人紅白血病細(xì)胞存在雙向調(diào)控作用;敲除STAT3基因之后，CCl4引起的肝纖維化模型中TIMP-1的高表達(dá)消失。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)TIMP-1可以由淋巴瘤細(xì)胞自分泌或旁分泌產(chǎn)生，通過B細(xì)胞生長(zhǎng)分化因子IL-10以及原癌基因bclxL來抑制細(xì)胞程序性死亡，從而延長(zhǎng)正常扁桃體B細(xì)胞、Burkitt淋巴瘤細(xì)胞的壽命［20］。另外還有研究發(fā)現(xiàn)TIMP-1與非霍奇金淋巴瘤的臨床分級(jí)相關(guān)［21］。

AG490是一種苯亞甲基丙二腈的脂類衍生物，是JAK/STAT通路的特異性抑制劑［22］。通過和受體酪氨酸激酶競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合位置，作用于多種腫瘤細(xì)胞而發(fā)揮抗瘤作用的研究陸續(xù)見諸報(bào)道。本研究在培養(yǎng)的Raji和OCI-LY8細(xì)胞中加入不同濃度AG490后，發(fā)現(xiàn)2株細(xì)胞生長(zhǎng)活力均降低，呈現(xiàn)出藥物濃度依賴關(guān)系。細(xì)胞周期檢測(cè)發(fā)現(xiàn)AG490處理后G1期Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞都明顯增多，在S期Raji細(xì)胞細(xì)胞無明顯改變但OCI-LY8細(xì)胞明顯減少，G2-M期的Raji細(xì)胞明顯減少，G2-M期的OCI-LY8細(xì)胞亦有減少的趨勢(shì)。結(jié)果表明，AG490對(duì)Raji和OCI-LY8細(xì)胞的生長(zhǎng)活力和細(xì)胞周期產(chǎn)生都產(chǎn)生明顯的影響。由于有部分DLBCL 和BL中存在STAT3的異?；罨茰y(cè)在DLBCL發(fā)生過程中TIMP-1可能是STAT3作用的下游靶基因之一。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，用AG490處理的兩細(xì)胞株中STAT3和TIMP-1基因的mRNA表達(dá)水平均顯著降低，且STAT3和TIMP-1的mRNA表達(dá)都呈現(xiàn)出藥物濃度的依賴關(guān)系。與對(duì)照組相比，Raji細(xì)胞內(nèi)p-STAT3，STAT3和TIMP-1蛋白表達(dá)在AG490組顯著降低，且STAT3，p-STAT3與TIMP-1蛋白變化趨勢(shì)表現(xiàn)出一致性，提示TIMP-1的蛋白表達(dá)可能與STAT3的活化有關(guān)。研究結(jié)果表明，用JAK/ STAT的特異性抑制劑AG490處理細(xì)胞后能明顯抑制Raji及OCI-LY8細(xì)胞的生長(zhǎng)代謝和阻斷細(xì)胞周期的運(yùn)行，其機(jī)制可能與AG490抑制STAT3的活化有關(guān)。AG490抑制了細(xì)胞內(nèi)STAT3活化后，其下游靶基因TIMP-1分子表達(dá)受到影響，從而抑制了淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。因此，TIMP-1的表達(dá)下調(diào)可能是腫瘤細(xì)胞內(nèi)STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化的結(jié)果。STAT3的活化抑制及其下游靶基因TIMP-1表達(dá)降低可能是AG490抑制DOCI-LY8和Raji細(xì)胞生長(zhǎng)的重要分子機(jī)制。

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(2015－12－13收稿，2015－12－31修回)

中文編輯:戚璐;英文編輯:趙毅

·專題研究(二)·

AG490 Inhibition Effect on Growth of DABCL and Burkitt Lymphoma Cells and the Correlation with Activation of STAT3

LI Pinhao，YANG Wenxiu，CHEN Qin，PEI Yuanyuan
(Department of Pathology，Guizhou Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China)

［Abstract］Objective: To investigate the effect and molecular mechanism of AG490 on the growth of Burkitt lymphoma (BL) cell line Raji and Diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) cell line OCILY8.Methods: Raji and OCI-LY8 cells were cultured by non AG490 (control group) and varied concentration AG490 experiment group(25，50，75 and 100 mg/L) for 24，48 and 72 h.Cell viability was assayed by MTT.The expressions of STAT3 and TIMP-1 at mRNA level were detected by real time RT-PCR.STAT3，pSTAT3 and TIMP-1 protein expression of Raji cell cultivated by AG490 50 mg/L for 48 h were detected by Western blotting.2 strains of cell cycle was examined by flow cytometry.

［Key words］lymphoma，B cell; Burkitt lymphoma; single transducer and transcription activator-3; tissue inhibitors of metalloproteinase-1; AG490; growth inhibitor

*［基金項(xiàng)目］國家自然科學(xué)基金(No.81160299) ;貴州省優(yōu)秀人才省長(zhǎng)基金(No.2011.125)

［中圖分類號(hào)］R559; R34

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1000-2707(2016) 02-0130-05

Results: Comparing with corresponding control group，cell viability was decreased in the two cell strains treated with AG490(P＜0.05).The opposite change was found in AG490 experiment group，Raji cells and OCI-LY8 cells of phase G1 had a trend to significantly increase(P＜0.05) ; the OCILY8 cells of phase S decreased significantly(P＜0.01)，while Raji cells had no obvious change (P＜0.01) ; Raji cells of phase G2-M decreased significantly(P＜0.01)，OCI-LY8 cells showed tendency of reducing; mRNA expression of STAT3 and TIMP-1 reduced significantly and indicated concentration-dependence relationship(P＜0.05) ; mRNA expressions of STAT3 and TIMP-1 in 2 strains of cell presented positive correlation (Raji r = 0.744，P = 0.034; OCI-LY8 r = 0.984，P = 0.000) ; p-STAT3，STAT3 and TIMP-1 protein expression of AG490 group were obviously reduced compared with those of control group.Conclusions: AG490 obviously inhibits the growth of Raji and OCI-LY8 cells.The expression of TIMP-1 may be associated with STAT3 activation.The activation of STAT3 and upregulated expression of TIMP-1 might be the essential molecular mechanism of AG490 influence over the growth of 2 strains of cells.