藥食兼用植物白苞蒿莖段的組培快繁途徑

班加駿+劉洋+李程+李保國+齊國輝+顧玉紅+舒榮志+顧仁菲

摘要： 為縮短白苞蒿的繁殖周期、提高增殖系數(shù)，以白苞蒿帶芽莖段為外植體，運(yùn)用組織培養(yǎng)技術(shù)，從培養(yǎng)基的配方、生根方法、移栽等環(huán)節(jié)進(jìn)行優(yōu)化，建立周期短、繁殖系數(shù)高的2條快速繁殖途徑：途徑一，在MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+GA 0.5 mg/L上初代培養(yǎng)20 d，在MS+6-BA 1 mg/L上繼代培養(yǎng)10 d，在MS+NAA 1 mg/L或MS+6-BA 1 mg/L+NAA 1 mg/L+GA 0.5 mg/L上生根培養(yǎng)7 d，將生根組培苗移栽到濕沙中在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2 d后，移栽到大田蔭棚中7 d的成活率為100%；途徑二，繼代培養(yǎng)后的莖段用誘導(dǎo)生根的試劑處理，扦插到濕沙中，在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)10 d，生根率為90%，移栽到大田中，成活率為100%。2條快繁途徑的繁殖周期為1.5～2.0個(gè)月，莖段增殖系數(shù)為6，成活率為100%。

關(guān)鍵詞： 白苞蒿；莖段；組織培養(yǎng)；激素；移栽；快速繁殖

中圖分類號： S188；Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2016）03-0069-03

白苞蒿（Artemisia lactiflora Wall）別稱明日葉、白花苞、四季菜等，系菊科（Compositae）蒿屬多年生草本植物[1]，主要分布于我國秦嶺以南各省區(qū)的中、低海拔地區(qū)的山坡、路旁、林緣等地[2]，收載于《中國藥典》2010年版一部附錄中，是劉寄奴的基原藥材之一[3]，以全草入藥，具有清熱、解毒、止咳、消炎、活血、健胃等功效，可用于慢性肝炎、肝硬化、腎炎等肝、腎疾病的治療，也有用于血絲蟲病的治療[4]。明日葉中還含有一種揮發(fā)油，對喘息型慢性氣管炎有治療效果[5]。在當(dāng)今競爭激烈、生物多樣性等環(huán)境下植物內(nèi)生真菌能更好地產(chǎn)生次生代謝物[6]。錢一鑫等發(fā)現(xiàn)，白苞蒿內(nèi)生真菌次生提取物對人前列腺癌細(xì)胞系（PC-3）、人骨髓白血病細(xì)胞系（HL-60）和[JP2]人乳腺癌細(xì)胞系（ MCF-7）生長可能具有抑制活性作用[7]。在溫度適宜，土壤潤濕時(shí)，明日葉生長迅速、產(chǎn)量高、葉片肥厚嫩綠、質(zhì)量好，并且明日葉能耐5～7 d的土壤積水[8]。植物的無性繁殖方式包括組織培養(yǎng)[5]、扦插[9-12]、嫁接[13]等，能實(shí)現(xiàn)植物的快速繁殖，且子代保持母本的優(yōu)良性狀。本研究以白苞蒿帶芽莖段為外植體，運(yùn)用組織培養(yǎng)技術(shù)，優(yōu)化培養(yǎng)基配方和煉苗方法，使莖段不經(jīng)過愈傷組織而直接增殖，建立利用白苞蒿莖段直接高效快繁的途徑，為生產(chǎn)提供技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料

以盆養(yǎng)的白苞蒿植株為試驗(yàn)材料。

1.2 方法

1.2.1 外植體的選取與消毒 從長勢良好的白苞蒿植株上取長3 cm左右的帶芽莖段，去掉葉片；將莖段用洗衣粉漂洗3 min，流水沖洗10 min，然后在超凈工作臺(tái)上用70%乙醇浸泡10 s，再用0.1% HgCl2滅菌10 min，最后用無菌水沖洗5～8 次，用無菌濾紙吸干材料上的水分。

1.2.2 白苞蒿帶芽莖段的初代培養(yǎng)基的篩選 將莖段接種于MS+蔗糖30 g/L+瓊脂7.0 g/L的培養(yǎng)基上，添加不同濃度的6-芐基腺嘌呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）、赤霉素（GA）（表1），培養(yǎng)基pH值 5.8～6.0，培養(yǎng)溫度（25±2） ℃，光強(qiáng) 2 000～3 000 lx，光照時(shí)間14 h/d，接種后20 d統(tǒng)計(jì)染菌莖段數(shù)、活莖段數(shù)、生根莖段數(shù)、繁殖芽數(shù)、繁殖莖段數(shù)，計(jì)算染菌率（染菌率=染菌莖段數(shù)/接種莖段數(shù)×100%）、成活率（成活率=活莖段數(shù)/接種莖段數(shù)×100%）、莖段增殖系數(shù)（莖段增殖系數(shù)=繁殖莖段數(shù)/接種莖段數(shù)）、芽增殖系數(shù)（芽增殖系數(shù)=繁殖芽數(shù)/接種芽數(shù)）、生根率（生根率=生根莖段數(shù)/接種莖段數(shù)×100%），照相，最后篩選出適宜的初代培養(yǎng)基。

1.2.3 白苞蒿組培莖段的繼代培養(yǎng)

將初代培養(yǎng)后20 d的白苞蒿莖段接種到4號培養(yǎng)基（MS+6-BA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂7 g/L）上，pH值5.8～6.0，培養(yǎng)溫度（25±2） ℃，光強(qiáng)2 000～3 000 lx，光照時(shí)間14 h/d，培養(yǎng)后10 d計(jì)算莖段增殖系數(shù)、芽增殖系數(shù)、生根率并照相。

1.2.4 白苞蒿組培莖段生根培養(yǎng)基的篩選

將未生根的白苞蒿組培莖段接種于MS+蔗糖30 g/L+瓊脂7.0 g/L的培養(yǎng)基上，添加不同濃度的6-BA、NAA、GA（表2），以篩選出適宜白苞蒿組培莖段生根的激素組合，培養(yǎng)基pH值 5.8～6.0，培養(yǎng)溫度（25±2） ℃，光強(qiáng)2 000～3 000 lx，光照時(shí)間 14 h/d，接種后7 d計(jì)算生根率。

1.2.5 白苞蒿組培苗的移栽

1.2.5.1 已長根的白苞蒿組培苗的移栽

2014年5月12日，將根系發(fā)達(dá)、生長健壯的白苞蒿組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽于沙土中，澆足水，在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度（25±2） ℃，光照度8 000～10 000 lx，光照時(shí)間14 h/d，培養(yǎng)2 d后移栽到大田蔭棚中，株行距20 cm ×20 cm，白天溫度25～30 ℃，夜間溫度15～18 ℃，空氣相對濕度70%～90%，適當(dāng)開棚通風(fēng)，移栽后7 d計(jì)算成活率。

1.2.5.2 未長根白苞蒿組培莖段的移栽

2014年5月14日將未長根的白苞蒿組培莖段從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉培養(yǎng)基，用誘導(dǎo)生根的試劑處理，扦插到沙土中，澆足水，在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7、10 d后計(jì)算生根率。2014年5月30日即在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)后16 d移栽到大田蔭棚，移栽后7 d計(jì)算成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素配比對白苞蒿帶芽莖段初代培養(yǎng)的影響

由表3、圖1可知，3種培養(yǎng)基中白苞蒿莖段的染菌率均為0，成活率均為100%，說明外植體消毒徹底，3種培養(yǎng)基均適合白苞蒿莖段生長；其中，3號培養(yǎng)基的莖段、芽增殖系數(shù)分別為2.7、3.2，生根率為65%，明顯高于1號和2號培養(yǎng)基，可見3號培養(yǎng)基更適合進(jìn)行白苞蒿帶芽莖段的初代培養(yǎng)。

2.2 不同初代培養(yǎng)基來源的白苞蒿莖段繼代培養(yǎng)的生長情況

不同初代培養(yǎng)基來源的白苞蒿莖段繼代培養(yǎng)的生長情況見表4、圖2，來自1號、2號、3號初代培養(yǎng)基的白苞蒿莖段在繼代培養(yǎng)基上的莖段增殖系數(shù)比初代培養(yǎng)分別高3.6、3.6、3.3，芽增殖系數(shù)分別比初代培養(yǎng)高4.6、4.1、4.0，生根率分別比初代培養(yǎng)高0、6%、22%，綜合認(rèn)為，4號培養(yǎng)基適合進(jìn)行白苞蒿莖段的繼代增殖培養(yǎng)，同時(shí)，因?yàn)閬碓从?號培養(yǎng)基的莖段根系發(fā)達(dá)、生根率最高，進(jìn)一步說明3號培養(yǎng)基適合白苞蒿莖段的初代接種。

2.3 不同激素配比對白苞蒿組培莖段生根的影響

白苞蒿組培莖段在5號至8號培養(yǎng)基中培養(yǎng)后10 d的生根率依次為73%、46%、53%、66%，可見5號、8號生根培養(yǎng)基的生根率高于6號、7號生根培養(yǎng)基，而5號、8號生根培養(yǎng)基中是1 mg/L NAA，6號、7號生根培養(yǎng)基中是0.5 mg/L NAA，因此，1 mg/L NAA比0.5 mg/L NAA更適合用于誘導(dǎo)白苞蒿組培莖段生根。

2.4 長根的白苞蒿組培苗的煉苗移栽

長根白苞蒿組培苗移栽到濕沙中在培養(yǎng)箱培養(yǎng)2 d時(shí)的成活率為100%，從培養(yǎng)箱移栽到大田蔭棚后7 d時(shí)的成活率為100%，生長良好（圖3）。

2.5 未長根的白苞蒿組培莖段的煉苗移栽

未長根的白苞蒿組培莖段用誘導(dǎo)生根的試劑處理后，移栽到濕沙中在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)后7 d的生根率為50%，培養(yǎng)后10 d的生根率為90%，且生根后的白苞蒿生長更好；將生根的白苞蒿從培養(yǎng)箱中移栽到大田蔭棚后7 d的成活率為93% （圖4）。

3 結(jié)論與討論

目前，關(guān)于白苞蒿組織培養(yǎng)方面的報(bào)道很少。江洪如等利用白苞蒿外植體在附加有生長素的MS培養(yǎng)基中能誘導(dǎo)出愈傷組織，呈疏松狀的愈傷組織對芽的分化有利，不同濃度和組合的激素對器官分化有一定的影響，再生植株的移栽成活率達(dá)90%以上[5]。為簡化繁殖技術(shù)，本研究以白苞蒿帶芽莖段為外植體，從培養(yǎng)基的配方、生根方法、煉苗移栽等環(huán)節(jié)進(jìn)行優(yōu)化，在初代培養(yǎng)基中加入0.5 mg/L赤霉素，加速了白苞蒿莖段的伸長生長；莖段不經(jīng)過愈傷組織而直接增殖；建立了將組培莖段不在組培瓶內(nèi)誘導(dǎo)生根，而是從培養(yǎng)瓶中取出洗掉培養(yǎng)基，直接用誘導(dǎo)生根的試劑處理后，扦插到濕沙中，在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，然后移栽到大田蔭棚中的生根方法；莖段不經(jīng)過愈傷組織而直接增殖；建立了組培苗洗凈根部培養(yǎng)基后移栽到濕沙中利用培養(yǎng)箱煉苗的方法，解決了在組培瓶中煉苗容易污染的問題；進(jìn)而建立了繁殖周期為1.5～2.0個(gè)月、繁殖系數(shù)為6.0的高效快速的繁殖途徑，降低了成本。

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