多發(fā)性骨髓瘤與系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血漿 IL-2、TNF-α檢測

葉倩舲，翟志敏，王會平，秦 慧，張家奎

多發(fā)性骨髓瘤與系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血漿 IL-2、TNF-α檢測

葉倩舲，翟志敏，王會平，秦 慧，張家奎

目的檢測多發(fā)性骨髓瘤（MM）（“免疫過度受抑”疾病）與系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）（“免疫過度激活”疾?。┗颊哐獫{白細胞介素-2（IL-2）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平，并對結(jié)果進行分析。方法SLE、MM患者和健康對照均于清晨空腹抽取靜脈血 3 m l，酶聯(lián)免疫法測定血漿 IL-2、TNF-α水平。結(jié)果與對照者比較，MM 患者、SLE患者血漿 IL-2水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義；MM患者 TNF-α水平顯著低于對照者（P＜0.05），SLE患者 TNF-α水平顯著高于對照者（P＜0.05）。MM患者血漿 IL-2、TNF-α水平顯著低于 SLE患者（P=0.01，P＜0.01）。年齡 ＜55歲組 MM 患者血漿 IL-2、TNF-α均顯著高于≥55歲組（P＜0.01，P=0.03）；腎功能不全 MM患者血漿 IL-2水平顯著高于腎功能正常 MM患者（P =0.01）。有與無首診盤形紅斑的 SLE患者之間，其血漿 IL-2、TNF-α水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.02，P=0.02）。結(jié)論TNF-α在體內(nèi)微環(huán)境的生理失衡是 MM患者的“免疫過度受抑”與 SLE患者“免疫異常激活”的原因之一，IL-2的影響作用則有待進一步深入。

多發(fā)性骨髓瘤；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；白細胞介素-2；腫瘤壞死因子-α；血漿

多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是以骨骼破壞、腎損害、血鈣過量為主要表現(xiàn)的惡性漿細胞克隆增生性腫瘤［1］，其惡性增生的漿細胞是不再具有分化能力的 B細胞，呈現(xiàn)“免疫過度受抑”。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是典型的系統(tǒng)性自身免疫性疾病，患者體內(nèi)自身反應(yīng)性T、B淋 巴 細 胞 異 常 活 化［2］，表 現(xiàn) 為 “免 疫過 度 激活”。白細胞介素-2（interleukin-2，IL-2）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factorα，TNF-α）是反映機體免疫功能的重要細胞因子，參與體內(nèi)微環(huán)境的生理平衡，它們一旦失衡（如上升或下降），則會誘發(fā)相應(yīng)的免疫紊亂與異常。IL-2和 TNF-α參與了 MM發(fā)病過程［3］及 SLE免疫病理損傷過程［4］。該研究旨在同時檢測與比較 MM（免疫過度受抑）和 SLE（免疫過度激 活）患者體內(nèi) IL-2、TNF-α的血漿 水平。

1 材料與方法

1.1 病例資料17例 MM患者，其中男 8例，女 9例；年齡 30～84（61.06±11.49）歲，均為安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院血液內(nèi)科住院患者。所有患者符合中國 2013最新 MM診斷標準（滿足全部 3條標準）［5］。依據(jù)國際分期系統(tǒng)（international staging system，ISS）β2-微球蛋白（β2-microglobulin，β2-GM）檢驗值分組，β2-GM＜3.5 mg／L為Ⅰ期，β2-GM＞5.5 mg／L為Ⅲ期，介于兩者之間為Ⅱ期［5］。其中，年齡＞55歲12例，＜55歲者 5例；Ⅲ期患者 9例，Ⅰ期和Ⅱ期患者 8例；腎功能異常者7例，腎功能正常者10例。

16例 SLE患者，均為女性，年齡 11～53（28.63 ±8.11）歲，為安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院、安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院與安徽省立醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診及住院患者。所有患者符合美國風(fēng)濕病學(xué)會（A-merican College of Rheumatology，ACR）1997年修訂的 SLE分類標 準［6］。SLE疾病活動評分依據(jù) SLE活動指數(shù)（systemic lupuserythematosus disease activity index，SLEDAI）量表進行判定［7］，將評分 ＜10分者判定為非活動期患者，≥10分者判定為活動期患者。其中，首診顴部紅斑 9例（56.2%）、首診盤形紅斑 5例（31.2%）、腎損 7例（43.7%）、關(guān)節(jié)炎 6例（37.5%）為主，其后依次為口腔潰瘍、光敏感、胸膜炎。SLEDAI評分 ＞10分者 5例，SLEDAI評分 ＜10分者11例。

MM對照者 6例，其中男 3例，女 3例，年齡 30～76（49.67±4.41）歲；SLE對照者 13例，均為女性，年齡 17～45（33.54±9.13）歲。對照來自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院、安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院體檢中心健康檢驗者和安徽醫(yī)科大學(xué)研究生健康個體健康獻血員，無心、肝、肺、腎等重要臟器疾患，血常規(guī)及肝腎功能檢查均正常，且不具備 MM或SLE診斷標準中的任何一條。

1.2 主要試劑檢測人血漿 IL-2、TNF-α的 ELISA試劑盒購自上海中亞科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1血液標本采集 得到受試對象或其家屬知情同意后，SLE、MM患者和對照者于清晨空腹抽取靜脈血 3 m l，置于抗凝管，4 h內(nèi)分離血漿（1 500 r／min，5 min），留存于 -80℃低溫冰箱中，操作過程中避免反復(fù)凍融。

1.3.2ELISA測定血漿 IL-2、TNF-α 采用雙抗體一步夾心法 ELISA定量測定 IL-2、TNF-α含量。嚴格按照說明書步驟操作：往預(yù)先包被 IL-2／TNF-α抗體的包被微孔中，依次加入標準品、標本、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌；用底物 TMB顯色，TMB經(jīng)過氧化物酶的催化后轉(zhuǎn)化呈藍色，并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)化成的黃色；顏色的深淺和樣品中的 IL-2／TNF-α濃度呈正 相 關(guān)；用酶標儀在 450 nm波長下測定吸光度（optical density，OD）值，IL-2／TNF-α的 OD值單位均為 pg／m l，根據(jù) OD值得出標準曲線，剔除極值，計算得出樣品濃度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理采用 SPSS 10.01統(tǒng)計軟件進行分析，數(shù)據(jù)以 ˉx±s表示；組間比較用 Student t（方差齊采用）或 Satterthwaite t檢驗（方差不齊采用）。檢驗水準 α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 血漿IL-2、TNF-α水平比較MM 患者血漿IL-2水平與對照者比較，Satterthwaite t檢驗，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，TNF-α水平顯著低于對照組（P＜0.05），見表 1。SLE患者血漿 IL-2水平與 對照比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但 TNF-α水平顯著高于對照組（P＜0.05），見表 2。MM與 SLE患者血漿 IL-2、TNF-α水平差 異 有 統(tǒng) 計 學(xué) 意 義 （Satteithwaite t= 2.82，P=0.01；t=3.98，P＜0.01）。

表1 MM 患 者與對 照 IL-2、TNF-α水平的 比較 （ˉx±s，pg／ml）

表2 SLE患 者與對 照 IL-2、TNF-α水平的 比較 （ˉx±s，pg／m l）

2.2 MM患者年齡、臨床分期及主要臨床檢測指標血漿IL-2、TNF-α水平年齡 ＜55歲 MM患者血漿 IL-2、TNF-α顯著高于≥55歲患者（P＜0.01，P= 0.03）。Ⅰ、Ⅱ期患者血漿 IL-2、TNF-α與Ⅲ期患者差異無統(tǒng)計學(xué)意義。腎功能不全 MM患者血漿 IL-2水平顯著高于腎功能正常 MM患者（P=0.01）；但TNF-α水平與腎功能正常 MM患者，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 血 紅 蛋 白 （hemoglobin，Hb）、血 小 板 計 數(shù)（platelets，PLT）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）與尿 β2-GM分組后，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。見表3。

2.3 SLE主要臨床表現(xiàn)血漿IL-2、TNF-α水平SLE患者有、無首診盤形紅斑，其 IL-2、TNF-α血漿水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.02，P=0.02）。首診出現(xiàn)顴部紅斑、出現(xiàn)腎損、光敏感、口腔潰瘍、胸膜炎、關(guān)節(jié)炎（陽性組，+）與無上述相應(yīng)首診臨床表現(xiàn)分組（陰性組，-），血漿 IL-2、TNF-α水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表4。

3 討論

細胞因子網(wǎng)絡(luò)成員在體內(nèi)的失衡與疾病的免疫紊亂 密 切 相 關(guān)。本實驗檢測 了 IL-2和 TNF-α在MM和 SLE患者血漿水平，為進一步研究這兩個重要的細胞免疫調(diào)節(jié)因子在 MM的“免疫過度受抑”和 SLE的“免疫過度激活”中的作用奠定基礎(chǔ)。

IL-2是一種 T細胞生長因子，主要是由輔助性T細胞產(chǎn)生，小部分是由 CD8+T細胞、NK細胞和NKT細胞產(chǎn)生［8］。IL-2可以通過與其受體結(jié)合并傳遞信號對各免疫細胞產(chǎn)生不同影響，并特異性獲得靶細胞的定向分化和功能活性［9］；某些免疫細胞功能的差異取決于 IL-2濃度及靶細胞表面 IL-2受體的構(gòu)型和強度等［10］。與對照血漿 IL-2比較，MM患者偏高，SLE患者偏低，且 MM患者 IL-2水平顯著低于 SLE患者，說明 MM患者由于 B淋巴細胞分化增殖終末階段—漿細胞大量惡性增生，抑制 IL-2的產(chǎn)生與分泌，促使患者表現(xiàn)“免疫過度受抑”；SLE患者體內(nèi) IL-2可能參與并促進自身 T、B細胞的異?；罨^程，是患者表現(xiàn)免疫過度激活的因素之一。但 MM、SLE血漿 IL-2與對照比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，這或許由于受到免疫網(wǎng)絡(luò)其它相關(guān)細胞因子調(diào)控或是 IL-2受體等的影響，MM、SLE患者 IL-2水平上升或下降至接近基線（對照組）水平。但本次研究病例與對照的樣本量較少，且未對其它細胞因子與 IL-2受體進行檢測，提示 IL-2對免疫相關(guān)疾病的影響作用有待于進一步深入。

表3 MM 患者臨床檢測指標血漿 IL-2、TNF-α水平（ˉx±s，pg／m l）

表4 SLE患者 主要臨 床表 現(xiàn) IL-2、TNF-α水平（ˉx±s，pg／m l）

TNF-α是一種主要由巨噬細胞和單核細胞產(chǎn)生，在促炎、抗腫瘤與自身免疫調(diào)節(jié)方面有著重要作用的免疫調(diào)節(jié)因子［11］；被認為是迄今發(fā)現(xiàn)的抗腫瘤作用最強的細胞因子，其抗腫瘤效能主要是通過對腫瘤細胞的毒性作用和調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能發(fā)揮。SLE等自身免疫性疾病患者 TNF-α水平較高［12］，被認為是 TNF-α抑制 T細胞信號傳導(dǎo)、促進 B細胞和樹突狀細胞的生長以及誘導(dǎo)凋亡分子的產(chǎn)生等，參與自身免疫性疾病的發(fā)病機制［13］。血漿 TNF-α水平，MM患者顯著低于對照，SLE顯著高于對照，MM患者血漿 TNF-α水平遠低于 SLE患者血漿 TNF-α水平，這表明 TNF-α作為與 IL-2一樣的 Th1型細胞因子，在 MM患者免疫過度受抑和 SLE患者免疫過度激活中發(fā)揮著作用，且這種作用效應(yīng)比 IL-2更為獨立。血漿 TNF-α水平或可作為免疫性疾病 MM、SLE患者的臨床檢測指標。

MM高年齡患者生存期短、預(yù)后差［14］，本研究根據(jù)我國發(fā)病中位年齡 55歲［15］將 MM患者分為兩組，＜55歲組血漿 IL-2、TNF-α濃度水平高于≥55歲組，這提示：年齡不同患者體內(nèi)這兩個細胞因子的不同可能是年齡影響預(yù)后的原因之一，且有必要動態(tài)追蹤觀察 MM患者、尤其是高齡 MM患者血漿 IL-2、TNF-α水平，更好地改善其生存與預(yù)后。腎損MM患者血漿 IL-2水平高于腎功能正常 MM患者，是因為 IL-2作為一種促炎性因子在 MM 腎功能損害的進展中可能起到了一定的作用。首診盤形紅斑SLE患者的血漿 IL-2、TNF-α水平均顯著高于首診無盤形紅斑 SLE患者，說明 IL-2、TNF-α可能介入了 SLE患者盤形紅斑的形成。

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Detection on p lasma IL-2 and TNF-αin patientsw ith m ultiplem yeloma and w ith system ic lupus erythematosus

Ye Qianling，Zhai Zhimin，Wang Huipin，et al
（Dept of Hematology，The Second Hospital of AnhuiMedical University，Hefei 230601）

Objective To detect plasma level of interleukin-2（IL-2）and tumor necrosis factor-α（TNF-α）in patients with multiplemyeloma（MM）（which is an abnormal immunosuppressive disease）and with systemic lupus erythematosus（SLE）（which is a disorder characterized by abnormal immuno-activation and further discuss based on the analyses of the results.Methods Fasting venous blood samples（3ml）were taken from MM，SLE patients and healthy controls.Plasma IL-2 and TNF-αwere detected with the enzyme-linked immunosorbent.Resu lts Plasma IL-2 level didn′t show significance between MM or SLE patients and controls.Compared with their healthy controls respectively，plasma TNF-αlevel of patientswith MM was significantly lower（P＜0.05）and that of patients with SLE was significantly higher（P＜0.05）.Compared with patientswith SLE，patientswith MM had statistically lower plasma IL-2 and lower plasma TNF-α（P=0.01，P＜0.01）.Plasma IL-2 and TNF-αof MM patients in group age less than 55 were significantly higher than in group agemore than 55（P＜0.01，P=0.03）.Plasma IL-2 level ofMM patientswith renal insufficiency，was significantly higher than MM patientswith normal renal function，the difference was statistically significant（P=0.01）.Between SLE patients that just first diagnosed with and without disc-shaped erythema，the plasma IL-2 and TNF-αlevel were statistically significant（P=0.02，P=0.02）.Conclusion The imbalance ofmicroenvironment caused by the increasing or declining of the cytokine TNF-α，could account for the abnormal immuno-suppression ofMM and the abnormal immuno-activation of SLE.Further studies on the effectof IL-2 are needed.

multiple myeloma；systemic lupus erythematosus；interleukin-2；tumor necrosis factor-α；plasma

R 593

A

1000-1492（2016）02-0255-04

時間：2016-1-20 10：32：27

http：／／www.cnki.net／kcms／detail／34.1065.R.20160120.1032.048.htm l

2015-12-08接收

安徽醫(yī)科大學(xué)?？蒲谢穑ň幪枺?015xkj032）

安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院血液科，合肥 230601

葉倩舲，女，住院醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士；

翟志敏，女，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：zzzm889＠163.com