Fascin蛋白在原發(fā)性肺癌所致惡性胸腔積液中的表達(dá)及臨床意義

姚 欣，趙 磊，楊 進(jìn)

Fascin蛋白在原發(fā)性肺癌所致惡性胸腔積液中的表達(dá)及臨床意義

姚 欣，趙 磊，楊 進(jìn)

目的探討 Fascin蛋白在原發(fā)性肺癌所致惡性胸腔積液（MPE）中的表達(dá)及其臨床意義。方法收集 45例原發(fā)性肺癌所致 MPE和 30例肺部良性疾病所致胸腔積液標(biāo)本，ELISA法檢測(cè)胸腔積液中 Fascin蛋白的表達(dá)，分析 Fascin蛋白表達(dá)與臨床特征、療效之間的關(guān)系。結(jié)果Fascin蛋白在肺癌組胸腔積液中的濃度［（31.21±2.06）μg／L］明顯高于對(duì)照組［（9.12±0.57）μg／L］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Fascin蛋白在 MPE中的濃度在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但在不同性別、年齡、腫瘤大小、病理類型、吸煙史間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論Fascin蛋白在原發(fā)性肺癌所致 MPE中高表達(dá)，與肺癌的分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，胸腔積液中Fascin蛋白與細(xì)胞學(xué)聯(lián)合檢測(cè)可提高 MPE診斷的陽(yáng)性率，并有一定的鑒別診斷價(jià)值。

原發(fā)性肺癌；惡性胸腔積液；Fascin蛋白；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

惡性胸腔積液（malignant pleural effusion，MPE）是指原發(fā)于胸膜的惡性腫瘤或其他部位的惡性腫瘤轉(zhuǎn)移至胸膜引起的胸腔積液。繼發(fā)于原發(fā)性肺癌的胸膜轉(zhuǎn)移癌是引起 MPE最常見的病因。MPE患者的中位生存期8個(gè)月，故早期診斷及治療對(duì)延長(zhǎng)生存期、改善預(yù)后至關(guān)重要［1-2］。MPE的確診有賴于胸水脫落細(xì)胞學(xué)或胸膜活檢，胸液細(xì)胞學(xué)的敏感性為 62% ～90%，但在腫瘤細(xì)胞數(shù)目少、異形程度低及間皮細(xì)胞增生情況下診斷較為困難；而胸膜活檢對(duì) MPE診斷的敏感性低于細(xì)胞學(xué)檢查，其診斷率僅為 40% ～75%［3-4］，漏診率高。目前比較普遍使用的某些 腫瘤標(biāo)志物 如 癌 胚抗原 （carcino-embryonic antigen，CEA）、細(xì) 胞 角 蛋 白 19片 段 （cytokerantin-19-fragment，CYFRA21-1）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）等靈敏度普遍不高，特異度也沒(méi)有高到能夠滿足臨床需要的程度。因此，仍有必要研究開發(fā)出更可靠的指標(biāo)，以期提高M(jìn)PE的診斷效率。Fascin蛋白是一種肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，有保持細(xì)胞形態(tài)、調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的作用。Fascin蛋白在多種惡性腫瘤如肺癌［5-6］、乳腺癌、胃癌、結(jié)直腸癌［7］患者的血清及腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，但目前尚無(wú) Fascin蛋白在 MPE中表達(dá)情況的研究報(bào)道。該研究采用 ELISA法檢測(cè)胸腔積液中 Fascin蛋白的表達(dá)，試圖探討其在肺癌所致MPE中的作用及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集 2014年6月 ～2015年 3月安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院患者胸腔積液標(biāo)本75例，所有患者臨床資料完整。肺癌組：45例，其中男 20例，女 25例，年齡 35～80（61.82± 12.39）歲，有吸煙史 16例，均為首次就診住院期間經(jīng)細(xì)胞學(xué)或組織病理學(xué)確診；確診前未行手術(shù)、化療、放療、分子靶向藥物治療、胸腔內(nèi)藥物治療，同時(shí)排除合并其他惡性腫瘤（胃腸道、甲狀腺、乳腺、婦科腫瘤等）及嚴(yán)重疾?。ǜ文I功能異常、結(jié)締組織疾病等）患者。其中經(jīng)胸水脫落細(xì)胞學(xué)確診 24例，纖維支氣管鏡活檢確診14例、淋巴結(jié)穿刺細(xì)胞學(xué)確診2例、經(jīng)皮肺穿刺組織病理學(xué)確診 23例。其中腺癌30例，鱗癌 10例，小細(xì)胞癌癥 5例，每例肺癌所致MPE均由2～3名呼吸內(nèi)科?？漆t(yī)師（其中至少有1名為主任醫(yī)師）結(jié)合臨床癥狀及輔助檢查討論后做出最終診斷。所有肺癌組患者接受后續(xù)至少一次全身含鉑方案化療或分子靶向藥物治療，并至少隨診1個(gè)月評(píng)價(jià)療效。對(duì)照組：30例，均胸水脫落細(xì)胞學(xué)陰性且經(jīng)臨床診斷可排除惡性疾?。黄渲心?21例，女 9例，年齡 29～79（56.03±15.26）歲，有吸煙史9例，結(jié)核性胸膜炎 25例，臨床診斷符合全國(guó)結(jié)核病診斷與分類標(biāo)準(zhǔn)［8］且抗結(jié)核治療有效；低蛋白血癥2例；心力衰竭 2例；肺炎 1例。兩組患者性別、年齡分布及吸煙率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，性別和吸煙使用 χ2檢驗(yàn)（χ2=15.26、11.50），年齡使用 t檢驗(yàn)（t=1.780，P=0.079）。

1.2 主要試劑肌動(dòng)蛋白束蛋白（FSCN）檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法）購(gòu)自武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司。

1.3 標(biāo)本采集收集新鮮胸腔積液 3～5 m l，室溫，3 500 r／min離心 15 min，取上清液 1 m l分裝后放入-80℃冰箱保存。

1.4 Fascin蛋白含量檢測(cè)采用人 Fascin定 量ELISA試劑盒檢測(cè)肺癌組及對(duì)照組胸腔積液 Fascin蛋白含量：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或50倍稀釋肺癌組胸腔積液樣品或?qū)φ战M 10倍稀釋樣本 100μl，37℃孵育2 h，吸棄每孔液體，加入酶標(biāo)抗體工作液 100 μl，37℃孵育 1 h，洗板 3次，加二抗工作液 100μl，37℃孵育 30 min，洗板 5次；加底物工作液 90μl，37℃避光反應(yīng) 15～20 min，每孔加入終止液 50μl，立即用酶標(biāo)儀測(cè)定 450 nm處光密度（optical density，OD）值。肺癌組設(shè)置副孔，結(jié)果取兩孔平均值。以肺癌組胸腔積液 Fascin蛋白 OD值 ／對(duì)照組 Fascin蛋白平均 OD值≥2.1為陽(yáng)性，否則為陰性。

1.5 療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)按 WHO癌性滲液療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)療效。完全緩解（CR）：胸腔積液完全消失，持續(xù) 4周以上；部分緩解（PR）：胸腔積液減少≥50%，持續(xù) 4周以上；穩(wěn)定（SD）：胸腔積液減少 ＜50%或增加≤25%；進(jìn)展（PD）：胸腔積液增加 ＞25%或死亡；CR+PR為客觀有效（ORR）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 SPSS 10.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以 ˉx±s表示；多組之間的比較以方差分析，兩獨(dú)立樣本均數(shù)比較采用 t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)，應(yīng)用 Graphpad prism 5.0進(jìn)行圖表繪制。

2 結(jié)果

2.1 ELISA法檢測(cè)Fascin蛋白的表達(dá)在胸腔積液中，肺 癌 組 的 Fascin蛋白 含 量 ［（31.06±5.75）μg／L］明顯高于對(duì)照組［（9.33±2.48）μg／L］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=19.26，P＜0.05）。表明 Fascin與肺癌之間有良好相關(guān)性，對(duì)良惡性胸腔積液的鑒別具有意義。

2.2 Fascin蛋白表達(dá)與肺癌患者臨床特征的關(guān)系Fascin蛋白的含量與肺癌患者的年齡、性別、是否吸煙、原發(fā)腫瘤部位、T分期、病理類型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表 1。但在不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1。

表1 Fascin蛋白與肺癌患者臨床特征之間的聯(lián)系

2.3 Fascin蛋白與其他腫瘤標(biāo)志物比較肺癌患者胸腔積液中 CEA、CYFRA21-1、NSE的平均濃度均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示胸腔積液中3種腫瘤標(biāo)志物的靈敏度及特異度均低于 Fascin蛋白。進(jìn)一步相關(guān)性分析結(jié)果顯示，在 MPE中，F(xiàn)ascin蛋白與 CEA、NSE、CYFRA21-1的表達(dá)水平均無(wú)明顯相關(guān)性（rs=0.261 9、-0.029 8、-0.274 7）。

表2 良惡性胸腔積液中肺癌3項(xiàng)指標(biāo)

圖1 Fascin蛋白表達(dá)與肺癌患者臨床特征關(guān)系A(chǔ)：Fascin蛋白在肺癌組及對(duì)照組的差異；B、C、D：Fascin蛋白在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度肺癌患者的差異；與肺癌組比較：*P＜0.05；與 N0比較：＃P＜0.05；與 M1a比較：△P＜0.05；與低分化組比較：▽P＜0.05

2.4 肺癌患者胸水Fascin蛋白表達(dá)與療效關(guān)系根據(jù) WHO療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，將肺癌組患者分為完全緩解（CR）組、部分緩解（PR）組、穩(wěn)定（SD）組、進(jìn)展（PD）組，其中 CR+PR為有效緩解組。PD組 Fascin蛋白濃度［（31.55±6.01）μg／L］高于有效緩解組（CR+PR）［（31.11±5.31）μg／L］，但經(jīng)方差分析，3組蛋白的 Fascin表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 0.019，P=0.981）。

3 討論

Fascin蛋白是一種存在于細(xì)胞中的，分子量為55 ku的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，在細(xì)胞絲狀突起的形成和穩(wěn)定，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷移和侵襲的過(guò)程中發(fā)揮重要作用［9］。人類細(xì)胞中表達(dá) 3種 Fascin亞型，F(xiàn)ascin-1即通常所指的 Fascin，在大多數(shù)脊椎動(dòng)物中存在，廣泛表達(dá)于間質(zhì)組織及神經(jīng)系統(tǒng)；Fascin-2只在視網(wǎng)膜中表達(dá)，F(xiàn)ascin-3只在睪丸中表達(dá)［10］。Fascin蛋白在正常上皮中不表達(dá)或低表達(dá)，但在過(guò)去的十余年，研究［11-13］表明在膽管細(xì)胞癌、膀 胱 癌、乳 腺 癌、腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤、胃癌、結(jié)腸癌、食管癌、卵巢癌等上皮性腫瘤中 Fascin蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)，且與腫瘤的病死率、腫瘤進(jìn)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，揭示了 Fascin蛋白與人類侵襲性腫瘤之間的相關(guān)性，認(rèn)為 Fascin蛋白或可成為識(shí)別具有高度侵襲惡性的腫瘤的早期標(biāo)志物及阻止腫瘤轉(zhuǎn)移的新的治療靶點(diǎn)。

目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于 Fascin蛋白在肺癌中的研究主要集中于腫瘤組織及血清中，尚無(wú)對(duì)胸腔積液中Fascin蛋白表達(dá)的研究報(bào)道。本研究采用 ELISA法檢測(cè)良惡性胸腔積液中 Fascin蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示 Fascin蛋白在肺癌所致 MPE中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，陽(yáng)性率為 100%。既往關(guān)于肺癌患者血清的大樣本研究［6］表明 Fascin在肺癌患者血清中的陽(yáng)性率約 19%，無(wú)法達(dá)到臨床應(yīng)用的要求，而胸腔積液中 Fascin陽(yáng)性率明顯高于血清。本研究同時(shí)顯示，MPE中，CEA、CYFRA21-1、NSE的表達(dá)水平亦明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可作為良惡性胸腔積液的鑒別，但其靈敏度及特異度均低于 Fascin蛋白。進(jìn)一步分析了胸腔積液中 Fascin蛋白與 CEA、NSE等的相關(guān)性，結(jié)果分析表明胸腔積液中 Fascin蛋白與 CEA等無(wú)相關(guān)性，可作為一項(xiàng)獨(dú)立的預(yù)測(cè)因素，與 CEA、NSE等無(wú)關(guān)，對(duì)于胸腔積液 CEA、NSE等陰性的 MPE患者有一定的鑒別意義。

本研究同時(shí)分析了胸腔積液 Fascin蛋白表達(dá)與肺癌患者臨床特征間關(guān)系，表明 Fascin蛋白的表達(dá)水平與患者的年齡、性別、原發(fā)腫塊的大小、部位，病理類型、吸煙均無(wú)相關(guān)性。研究［14］表明 Fascin與區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越廣，F(xiàn)ascin的表達(dá)越高，F(xiàn)ascin可以作為獨(dú)立預(yù)測(cè)肺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物，可以作為選擇合適治療方案的新指標(biāo)。此外，F(xiàn)ascin蛋白的高表達(dá)與肺癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、組織分化程度、臨床分期密切相關(guān)。在肺癌患者血清標(biāo)本的研究［6］中也得出一致結(jié)論。而本研究亦顯示有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌患者胸腔積液Fascin蛋白含量明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性患者，在有胸膜轉(zhuǎn)移以外的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組表達(dá)水平高于無(wú)胸膜以外遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究進(jìn)一步探索了胸腔積液 Fascin含量與 MPE療效之間的關(guān)系，其中進(jìn)展組（PD）患者胸腔積液 Fascin含量高于有效緩解組（CR+PR），但兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。原因可能為病例數(shù)少、腫瘤的異質(zhì)性及個(gè)體差異，因此需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。以上結(jié)論表明 Fascin蛋白在肺癌的發(fā)病、侵襲及轉(zhuǎn)移中有重要作用，可早期識(shí)別具有高度惡性侵襲潛能的腫瘤，提示肺癌患者的預(yù)后情況，可能是肺癌的一個(gè)預(yù)后標(biāo)志物。而 Fascin蛋白促進(jìn)肺癌的轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制尚未闡明，研究［15］表 Fascin蛋白可能在肺癌細(xì)胞的遷移、侵襲、黏附以及上皮惡性轉(zhuǎn)化中起著重要的作用。

既往關(guān)于小細(xì)胞肺癌中的 Fascin表達(dá)研究較少，Pelosi et al［16］報(bào)道了 27例小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本，F(xiàn)ascin蛋白的陽(yáng)性率為 100%，而在血清中的研究［6］顯示，F(xiàn)ascin在非小細(xì)胞癌中陽(yáng)性率較低，與健康人群接近，本研究亦納入了 5例有胸腔積液的非小細(xì)胞癌患者，檢測(cè)了胸腔積液中 Fascin蛋白的表達(dá)，均有高表達(dá)，提示了 Fascin蛋白在肺癌中的表達(dá)有普遍性，其表達(dá)與病理類型無(wú)關(guān)。

綜上所述，檢測(cè)胸腔積液中 Fascin蛋白的表達(dá)可有助于良惡性胸腔積液的鑒別。與胸腔積液中傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物相比，F(xiàn)ascin蛋白是一項(xiàng)獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)，有較好的實(shí)用價(jià)值，可補(bǔ)充胸腔積液細(xì)胞學(xué)對(duì)MPE的診斷。Fascin蛋白可能參與肺癌的發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程，與肺癌的惡性程度及生物學(xué)進(jìn)展密切相關(guān)，為肺癌的預(yù)后評(píng)估提供一定的依據(jù)。

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Protein level of Fascin and its clinical significance in malignant p leural effusion associated w ith primary lung cancer

Yao Xin，Zhao Lei，Yang Jin
（Dept of Respiratory Medicine，The Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230601）

Objective To investigate the protein level of Fascin in malignant pleural effusions associated with primary lung cancer and its clinical significance.Methods 45 malignant pleural effusions associated with primary lung cancer and 30 benign pleural effusionswere collected.Specimenswere subjected to the ELISA test for the protein level of Fascin.Futhermore，the protein level of Fascin in malignant effusion and its association with clinicopathological feathers and therapeutic effectwere also analyzed.Results The protein level of Fascin in malignant pleural effusionswas（31.21±2.06）μg／L，which was higher than that in benign pleural effusions［（9.12±0.57）μg／L）］，the difference was statistically significant（P＜0.05）.The protein level of Fascin in malignant pleural effusion was statistically significant（P＜0.05）in different lymph nodemetastasis，distantmetastasis，and differentiation degree，but there was no significant difference in different gender，age，tumor size，pathological type，and smoking history.Conclusion The protein level of Fascin is high in malignant pleural effusion caused by primary lung cancer，and it is related to the differentiation of lung cancer，lymph node metastasis and distantmetastasis. Fascin protein combined with cytological examination can improve the diagnosis ofmalignant pleural effusion，and has a certain value in differential diagnosis.

primary lung cancer；malignant pleural effusion；Fascin；ELISA

R 734.2；R 561.3；R 341；R 446.6

A

1000-1492（2016）02-0239-05

時(shí)間：2016-1-20 10：32：26

http：／／www.cnki.net／kcms／detail／34.1065.R.20160120.1032.040.htm l

2015-11-17接收

國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)：81400058）

安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，合肥 230601

姚 欣，女，碩士研究生；

趙 磊，男，主 任 醫(yī) 師，碩 士 生 導(dǎo) 師，責(zé) 任 作 者，E-mail：ayefyzhaolei＠163.com