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    高效液相色譜法在獼猴桃中維生素C含量分析的應用

    2016-04-25 01:16:37郭文川侯茹平雷凱鵬杜歡歡孟怡璠
    北方農(nóng)業(yè)學報 2016年5期
    關(guān)鍵詞:勻漿獼猴桃液相

    郭文川 ,楊 杰 ,侯茹平 ,雷凱鵬 ,杜歡歡 ,孟怡璠 ,江 海 ,2,3

    (1.陜西理工大學生物科學與工程學院,陜西漢中 723000;2.陜西省資源生物重點實驗室,陜西漢中 723000;3.陜南秦巴山區(qū)生物資源綜合開發(fā)協(xié)同創(chuàng)新中心,陜西漢中 723000)

    獼猴桃(Actinidia chinensis Planch.),也稱奇異果、狐貍桃、藤梨、陽桃、木子、毛木果、麻藤果、楊湯梨等,果形一般為橢圓狀,果實內(nèi)是呈亮綠色的果肉和一排黑色或者紅色的種子,因獼猴喜食,故名獼猴桃,亦有說法是因為果皮覆毛,貌似獼猴而得名,是一種品質(zhì)鮮嫩,營養(yǎng)豐富,風味鮮美的水果。獼猴桃的質(zhì)地柔軟,口感酸甜。尤其是維生素C的含量極高,因而在世界上有“水果之王”的美譽[1-2]。

    維生素C(Vitamin C)又叫 L-抗壞血酸,是一種水溶性維生素,廣泛存在于新鮮水果中。維生素C具有保持肌膚潤滑、防止衰老、抗壞血酸等作用,是人體必需的主要維生素之一,廣泛參與機體氧化、還原等復雜代謝過程,還能促進體內(nèi)膠原蛋白和粘多糖的合成,增強機體抵抗力[3-5]。

    獼猴桃中維生素C的含量是獼猴桃品質(zhì)分析評價的一個重要指標,也是獼猴桃主要營養(yǎng)成分之一。準確測定獼猴桃中維生素C的含量可指導獼猴桃品質(zhì)分析、種植、生產(chǎn)、育種和精深加工。

    維生素C的測定方法一般有化學法、比色法、紫外分光光度法、熒光法等,這些方法都存在所需試劑較多、操作繁瑣等不足[6-9]。高效液相色譜法是目前發(fā)展較為迅速的一種方法,具有選擇性好、靈敏度高的特點。本次試驗采用高效液相色譜建立了一種測定獼猴桃中維生素C含量的方法,為獼猴桃的品質(zhì)分析、生產(chǎn)、加工提供實驗分析手段。

    1 材料和方法

    1.1 材料與試劑

    市售獼猴桃;維生素C,純度為99.8%(購自天津一方科技有限公司);分析純乙醇、甲醇、磷酸(天津市登峰化學試劑廠),色譜純甲醇(Burdick&Jackson);實驗室自制超純水。

    1.2 主要儀器設備

    榨汁機 BM252C(美的家電有限公司);萬分之一電子天平SHI-MADZU AUY220;超聲波清洗機KQ100-DA(昆山市超聲儀器有限公司);低速臺式離心機TD24(長沙湘儀器有限公司);電熱恒溫鼓風干燥箱101-3A(滬南電爐烘箱廠);高效液相色譜儀LC2000(上海天美儀器有限公司);Milli-Q Academic超純水機(美國密理博)。

    1.3 試驗方法

    1.3.1 色譜條件色譜柱為Diamonsil(鉆石)C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);檢測波長 245 nm;以甲醇∶0.5%磷酸=5∶95(V/V)為流動相,等梯度洗脫;流速為1 mL/min;柱溫為30℃;進樣量10 μL。

    1.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取11.80 mg維生素C標準品,用純水溶解,定容至25 mL棕色容量瓶中,制得472 μg/mL維生素C的標準對照母液。

    1.3.3 供試樣品溶液制備 取新鮮市售獼猴桃剝皮于勻漿機中勻漿,取3.0 g勻漿樣品,加超純水25 mL,超聲震蕩20 min后定容于50 mL棕色容量瓶中,離心后取上清液過0.25 μm微孔濾膜,得待測供試樣品溶液。

    同時取勻漿獼猴桃樣品10.0 g于烘箱中烘干至恒重,計算獼猴桃含水率,折算獼猴桃干物質(zhì)中維生素C的含量。

    1.3.4 標準曲線繪制 分別取維生素C的標準對照母液 0.1,0.2,0.4,0.6,0.8 mL,用純水定溶于 10 mL容量瓶中,得到標準系列溶液 4.72,9.44,18.88,28.32,37.76 μg/mL。在液相色譜設定條件下分別進樣10 μL,以標準溶液濃度為橫坐標,色譜峰面積為縱坐標繪制標準工作曲線。

    1.3.5 供試樣品的測定 按照供試樣品處理方法平行制備樣品5份,在色譜條件下,測定供試樣品獼猴桃中維生素C的含量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 方法學考察

    2.1.1 線性范圍考察 按照試驗方法中的色譜條件測定,以峰面積為縱坐標,進樣量為橫坐標繪制標準曲線,得回歸方程為:y=2780.1799x+146.4,r=0.999856,結(jié)果表明,進樣量在 47.2~377.6 ng范圍內(nèi)峰面積與進樣量線性關(guān)系良好,標準品色譜圖見圖1。

    2.1.2 精密度實驗 精密吸取供試樣品溶液10 μL,連續(xù)進樣5次,測定維生素C峰面積,結(jié)果分別為55426、54280、52359、52153、54361,RSD 為 2.62%(n=5)。相對標準偏差小于3%,表明精密度良好。

    2.1.3 穩(wěn)定性實驗 將制備的樣品用棕色容量瓶保存于 4 ℃冰箱中,分別在 1,2,4,8,12 h精密吸取溶液10 μL進樣,測定峰面積,測得結(jié)果分別為54653、54106、53829、53687、52989,RSD 為1.13%(n=5)。供試溶液中的維生素C峰面積隨時間延長有下降趨勢,這與維生素C在空氣中易分解氧化有關(guān),但在12 h內(nèi)穩(wěn)定性相對標準偏差小于3%。

    2.1.4 重復性實驗 取同一材料,按制備方法平行制備5份供試溶液,依液相色譜設定條件測定維生素C的峰面積,測得結(jié)果分別為53270、54241、52796、53984、55203,計算得 RSD 值為1.72%(n=5)。相對標準偏差小于3%,表明重復性良好。

    2.1.5 回收率實驗 采用加樣回收實驗。按維生素C分析供試樣品溶液制備方法,取同一已測定的維生素C獼猴桃樣品,加入維生素C標準品240.00 μg,測定其加標回收率,結(jié)果見表1。

    表1 獼猴桃中維生素C回收率測定結(jié)果

    2.2 維生素C測定結(jié)果

    按照實驗條件,上機檢測其中維生素C含量,平行測定5次,最后測得新鮮市售獼猴桃勻漿汁液100 g含維生素C 97.35±3.35 mg,獼猴桃樣品色譜圖見圖2。

    稱取10.1570 g獼猴桃勻漿,60℃烘干至恒重,質(zhì)量為1.6590 g,獼猴桃含水量為83.7%。由此計算出獼猴桃干物質(zhì)中100 g維生素C含量為597.23±20.55 mg。

    3 結(jié)論與討論

    維生素C具有多種生理功能,是維持機體正常生理功能的重要維生素之一,廣泛參與機體氧化、還原等復雜代謝過程,促進機體內(nèi)膠原蛋白和粘多糖的合成,增強機體抵抗力[10],如保持含硫基的物質(zhì)的還原型,參與造血、促進膠原蛋白的合成,解毒作用,參與體內(nèi)兒茶酚胺生成,幫助膽固醇轉(zhuǎn)化為皮質(zhì)激素的作用等等[5,11]。維生素C廣泛存在于植物組織中,不同植物中維生素C含量各不相同,但獼猴桃是所有蔬菜水果中維生素C含量最高的水果。

    本次實驗所用的獼猴桃為非當季的市售獼猴桃,測得的鮮果汁中100 g維生素C含量為97.35±3.35 mg,較趙昕梅等[8]、董珊等[9]報道的獼猴桃中維生素C總體含量略低,但在正常范圍之內(nèi)。主要原因可能是實驗的時間是5、6月份,不是獼猴桃成熟季節(jié),獼猴桃中的維生素C會隨儲藏時間延長逐漸降低。另外,通過實驗計算獼猴桃干物質(zhì)中維生素C含量,表明獼猴桃干品中維生素C含量會更高,后續(xù)可以考慮以獼猴桃為原料,生產(chǎn)獼猴桃果干,使其成為一種補充維生素C的有益水果加工品。

    維生素C見光易分解,在穩(wěn)定性實驗中其峰面積也有隨時間延長逐漸減小的趨勢。因此,在實驗過程中應盡量避光,采用棕色玻璃儀器可有效避免見光分解。同時,分析實驗需在短時間內(nèi)完成(12 h內(nèi))。維生素C同樣具有熱不穩(wěn)定性,因此,實驗標準品和樣品最好存放在4℃冰箱中,以保證實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)一性。

    參考文獻:

    [1]百度百科.獼猴桃[EB/OL].http://baike.baidu.com/item/獼猴桃/282710,HTM,2016-06-20.

    [2]魏明英.紅陽獼猴桃中VC含量測定方法研究[J].食品研究與開發(fā),2014,35(23):115-117.

    [3]閻樹剛,韓 濤.果蔬及其制品中維生素C測定方法的評價[J].中國農(nóng)學通報,2002,18(4):110-112.

    [4]吳春艷.水果中維生素C含量的測定及比較[J].武漢理工大學學報,2007,29(3):90-91.

    [5]丁 焱.維生素C的功能和應用[J].宿州師專學報,2002(9):61-62.

    [6]江 海,吳今人,李新生,等.陜西柑橘主產(chǎn)區(qū)13種推廣品種維生素C含量分析[J].氨基酸和生物資源,2014,36(2):59-63.

    [7]李會靜,張建利,王 亮.高效液相色譜法測定獼猴桃中維生素 C 含量[J].煤炭與化工,2013(8):140-141.

    [8]趙昕梅,遠凌威,陳世鋒,等.高效液相色譜法測定果蔬中維生素C含量[J].信陽師范學院學報(自然科學版),2013(1):49-53.

    [9]董 珊,姜 波,劉長建.獼猴桃中維生素C的高效液相色譜分析[J].中央民族大學學報(自然科學版),2010,19(3):21-23.

    [10]孫 義.水果和蔬菜中維生素C含量的測定方法綜述[J].天津化工,2008,22(3):58-59.

    [11]張 昉,高 蓉.維生素C檢測方法研究進展[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2009,19(2):457-461.

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