不同加工方法對(duì)杜仲桃葉珊瑚苷含量的影響

劉匯麗　魏學(xué)軍　何鑫

【摘要】目的：比較不同加工方法對(duì)杜仲桃葉珊瑚苷含量的影響，為杜仲的產(chǎn)地加工提供科學(xué)依據(jù)。方法：采用高效液相色譜法測(cè)定桃葉珊瑚苷量，色譜條件：Diamonsil C18色譜柱（250 mm × 4.6mm，5 μm），流動(dòng)相甲醇-水溶液（10∶[KG-*2]90），檢測(cè)波長(zhǎng)203nm，柱溫25℃，流速1.0mL/min，進(jìn)樣量10μL。結(jié)果：不同加工方法杜仲桃葉珊瑚苷含量有差異。同一干燥方法，未發(fā)汗杜仲桃葉珊瑚苷量高于發(fā)汗杜仲；同一性狀，烘干、曬干、陰干三者間桃葉珊瑚苷量具顯著差異，以烘干最高，曬干次之，陰干最低；不同性狀，板片狀以100℃烘干、寬絲狀以 60℃烘干含量最高。結(jié)論：不同加工方法對(duì)杜仲桃葉珊瑚苷含量影響顯著，臨床應(yīng)用如以桃葉珊瑚苷的生物活性為主，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)，建議杜仲采用趁鮮切寬絲，不發(fā)汗，60℃烘干的產(chǎn)地加工方法。

【關(guān)鍵詞】 杜仲；桃葉珊瑚苷；高效液相色譜法；產(chǎn)地加工

【中圖分類號(hào)】R283.3 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）05-0010-03

Abstract：Objective：To provide scientific basis for the processing method of Eucommia ulmoides Oliv by comparing the effect of different processing methods on the content of aucubin. Methods：Determine the content of aucubin in Eucommia ulmoides Oliv（EUO） by HPLC. A Diamonsil C18 column （4. 6 mm×250 mm，5 μm） was used for the analysis. The mobile phase was methanol-water（10∶[KG-*2]90），the flow rate was 1. 0 ml/min，the detection wavelength was at 203nm，and the column temperature was 25℃. Results：Eucommia ulmoides Oliv processed by different methods， the content of aucubin in them was various. Living on the same drying methods，the content of aucubin in herbs without undergoing the diaphoretic process was higher than the herbs experienced it. Herbs in the same trait，with different drying methods，there were significant difference in the content of aucubin，and the content in the drugs dried by oven was higher than the drugs dried by exposure to the sunor inthe shade. Herbs in different trait，the content of aucubin in the plate-like EUO samples dried in the oven in 80℃and the wile-filamentous-like EUO samples dried in the oven in 60℃was both higherthan all other like samples. Conclusion：There were significant difference in the content of aucubin of different samples processed by different methods. In the clinical application，if we considered the biological activity of aucubin as a focus，we suggested the EUO should be processed in wile-filamentous-like without undergoing diaphoretic process and dried in the oven in 60℃.

Keywords：Eucommia ulmoides Oliv；Aucubin；HPLC；Origin processing

杜仲為杜仲科植物Eucommia ulmoides Oliv.的干燥樹(shù)皮，廣泛分布于我國(guó)西南部和長(zhǎng)江中上游地區(qū)，是我國(guó)的特產(chǎn)經(jīng)濟(jì)藥材，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎的功效，臨床多用于腎虛腰痛、筋骨無(wú)力、妊娠漏血、胎動(dòng)不安、高血壓癥等[1]。貴州產(chǎn)杜仲因其資源豐富，療效顯著，被業(yè)內(nèi)公認(rèn)為杜仲的地道產(chǎn)地，與天麻、靈芝組成的“貴州三寶”，是饋贈(zèng)訪友的必備之品，具有極高的藥用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。產(chǎn)地加工作為控制藥材品質(zhì)的關(guān)鍵技術(shù)，杜仲雖有《本草經(jīng)集注》“采皮陰干”、去粗皮曬干[1]和去粗皮“發(fā)汗”后曬干[2]的記載，但標(biāo)準(zhǔn)并不統(tǒng)一，質(zhì)控指標(biāo)單一?，F(xiàn)有加工方法的研究多以降壓活性成分的松脂醇二葡萄糖苷作為考察指標(biāo)[3-4]，對(duì)其他活性成分和藥理作用的影響未見(jiàn)報(bào)道。

杜仲的生物活性成分有木質(zhì)素類、環(huán)烯醚萜類、黃酮類、多糖類及苯丙素類等，其所含桃葉珊瑚苷具有抗炎抗病毒、降血脂、抗氧化、抗疲勞、降壓等廣泛的藥理作用[5-7]，是杜仲的重要活性成分之一。研究以桃葉珊瑚苷為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察不同性狀、干燥方法及是否“發(fā)汗”對(duì)桃葉珊瑚苷含量的影響來(lái)探討杜仲的產(chǎn)地加工方法，以期為全面評(píng)價(jià)和建立杜仲加工方法的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-10ATvp高效液相色譜儀（日本島津公司）；AS10200A型超聲波清洗機(jī)（杭州匯爾公司）；IKA-RV10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)IKA公司）；2.0R型低速離心機(jī)（德國(guó)HERAEUS）；DHG-9240A真空干燥箱（上海金山公司）；AE240型電子天平（瑞士METTLER）。

1.2 材料 加工所用杜仲新鮮樹(shù)皮（批號(hào)：150520）購(gòu)自當(dāng)?shù)厮庌r(nóng)杜仲種植園，樹(shù)齡均15年以上，經(jīng)本校王傳明副教授鑒定為杜仲科植物Eucommia ulmoides Oliv.的干燥樹(shù)皮。桃葉珊瑚苷對(duì)照品（批號(hào)：111761-200601，中國(guó)藥品生物制品檢定所），水為重蒸餾水，其他試劑均為AR級(jí)。

2 方法與結(jié)果

2.1樣品的制備將杜仲新鮮樹(shù)皮刮去粗皮，加工制成板片和寬絲（長(zhǎng)約 5cm，寬約 1cm）兩種性狀。分別將兩種性狀藥材按發(fā)汗和未發(fā)汗進(jìn)行處理后干燥，得樣品A1～A10（見(jiàn)表1），各樣品含發(fā)汗和未發(fā)汗兩種二級(jí)樣品，二級(jí)樣品均制備 3批次備用。

2.2 桃葉珊瑚苷的測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇-水溶液（10：90），檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm，柱溫：25℃，流速：1.0 mL/min，進(jìn)樣量：10 μL。色譜圖見(jiàn)圖 1。

2.2.2 供試品溶液的制備[8] 分別稱取各樣品不同批次杜仲藥材約2 g，剪成碎片后揉成絮狀，精密稱取0.5 g置具塞錐形瓶中，加入甲醇25 ml，超聲提取60 min，過(guò)濾，水浴揮干甲醇，加流動(dòng)相溶解，微孔濾膜濾過(guò)，定容至10 ml容量瓶中，搖勻，即得供試品溶液。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取桃葉珊瑚苷對(duì)照品12.0 mg，加流動(dòng)相定容至10ml量瓶中，搖勻后即得對(duì)照品溶液。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密取1、5、10、15、20 μl對(duì)照品溶液按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程為：Y = 111.610 1X– 37.8909，r = 0.9999。試驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)照品在0.0012 ～ 0.0240 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取桃葉珊瑚苷對(duì)照品溶液5 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)測(cè)定5次，桃葉珊瑚苷峰面積的RSD值為1.37%。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取桃葉珊瑚苷對(duì)照品溶液5 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在 0、5、10、20、30、60 min測(cè)定，桃葉珊瑚苷峰面積的RSD值為2.78%。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取 A1陰干未發(fā)汗第 1批次樣品5份，按“2.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液。取供試品溶液10 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，桃葉珊瑚苷峰面積的RSD值為3.43%。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含桃葉珊瑚苷量的A1陰干未發(fā)汗第1批次樣品5份，加入適量桃葉珊瑚苷對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液。取供試品溶液10 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，桃葉珊瑚苷平均回收率為 98.08%，RSD值為 3.14%。

2.2.9 含量測(cè)定 精密移取各樣品不同批次提取所得供試品溶液10 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件操作并計(jì)算桃葉珊瑚苷量質(zhì)量分?jǐn)?shù)，測(cè)定值為 3批次的均值。結(jié)果見(jiàn)表 1。

2.3 結(jié)果分析

2.3.1 杜仲“發(fā)汗”與“未發(fā)汗”對(duì)桃葉珊瑚苷含量的影響結(jié)果表明，兩種性狀藥材采用同一干燥方法處理，“發(fā)汗”杜仲與“未發(fā)汗”杜仲的桃葉珊瑚苷量具有顯著差異，“未發(fā)汗”高于“發(fā)汗”。究其原因，可能與植物細(xì)胞中酶的生物活性有關(guān)。同一干燥方法，“未發(fā)汗”藥材在初期均較“發(fā)汗”藥材水分的氣化速率快，隨著水分的快速散失，導(dǎo)致苷的分解酶生物活性部分失活，減少了苷類成分的分解，故桃葉珊瑚苷量較高；“發(fā)汗”藥材，在覆蓋物下保持?jǐn)?shù)日，溫度有所升高雖有利于內(nèi)部水分向外部的溢出，但水分蒸發(fā)緩慢或未蒸發(fā)，對(duì)分解酶的活性影響不大，苷類成分的分解依然保持，因而桃葉珊瑚苷量較低。

2.3.2 干燥方法對(duì)“未發(fā)汗”杜仲桃葉珊瑚苷含量的影響由表 1結(jié)果可知，兩種性狀藥材均以陰干含量最低，桃葉珊瑚苷含量整體水平依次為：烘干>曬干>陰干。分析結(jié)果表明，同一性狀藥材采用不同干燥方法處理，烘干、曬干、陰干三者間桃葉珊瑚苷量具顯著差異，原因可能與溫度對(duì)苷分解酶的破壞有關(guān)。在一定的溫度范圍內(nèi)，隨著溫度的升高，可使分解酶失活以減少苷的分解，同時(shí)對(duì)活性成分結(jié)構(gòu)破壞較少。

2.3.3 藥材性狀對(duì)杜仲桃葉珊瑚苷含量的影響兩種性狀藥材，板片狀以100℃烘干、寬絲狀以60℃烘干含量最高，分析結(jié)果表明，兩種加工方法桃葉珊瑚苷量無(wú)顯著差異。板片狀100℃烘干，一方面利于分解酶的破壞而減少苷類成分的分解，一方面由于直面高溫的暴露面積較?。ㄏ鄬?duì)于寬絲狀），因而對(duì)活性成分結(jié)構(gòu)的破壞較少。寬絲狀60℃烘干，可能既達(dá)到了殺酶保苷的目的，也減少了高溫對(duì)活性成分結(jié)構(gòu)破壞的效果。

3 討論

合理產(chǎn)地加工，可以保證藥材品質(zhì)，增強(qiáng)藥物療效。2010版藥典記載杜仲的加工方法是去粗皮，發(fā)汗后曬干。王麗楠等[3]研究表明，就降壓作用而言，杜仲采用發(fā)汗的加工方法是可行的。劉圣金等[4]研究發(fā)現(xiàn)，杜仲發(fā)汗后對(duì)不同活性成分的含量有影響，可提高醇溶性、水溶性成分含量，而松脂醇二葡萄糖苷含量降低。由于中藥活性成分較多，各活性成分的藥理作用差異較大，臨床治療癥候不同，如單一采用藥典法進(jìn)行加工，可能會(huì)影響不同活性成分含量，難以發(fā)揮各活性成分應(yīng)有的療效，因而有必要針對(duì)不同活性成分開(kāi)展加工方法研究。

本次研究結(jié)果顯示，不同性狀、干燥方法及是否發(fā)汗對(duì)杜仲桃葉珊瑚苷含量有影響。桃葉珊瑚苷含量未發(fā)汗杜仲高于發(fā)汗杜仲，表明如采用藥典法進(jìn)行發(fā)汗加工處理，則桃葉珊瑚苷含量較低。不同干燥方法，以烘干含量整體水平高，曬干次之，陰干最低，故不宜采用《本草經(jīng)集注》“采皮陰干”的加工方法。兩種性狀，板片狀以 100℃烘干、寬絲狀以 60℃烘干含量最高，兩種加工方法無(wú)顯著差異。

綜上所述，杜仲臨床應(yīng)用如以桃葉珊瑚苷類活性成分的生物活性為主，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)中新鮮藥材便于切制而生藥切制不便的特點(diǎn)及高溫對(duì)成分結(jié)構(gòu)的破壞，建議杜仲采用趁鮮切寬絲，不發(fā)汗，60℃烘干的產(chǎn)地加工方法，不宜采用藥典記載的發(fā)汗后曬干和“采皮陰干”的加工方法。實(shí)際生產(chǎn)中，考慮到設(shè)備成本、操作技術(shù)等原因，在不發(fā)汗的前提下，采用操作簡(jiǎn)單、低成本的干燥方法曬干是否可行，有待研究人員結(jié)合藥效學(xué)研究進(jìn)一步確定。

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（收稿日期：2015.12.21）