小花棘豆中毒對(duì)大鼠下丘腦—垂體—卵巢軸α-甘露糖苷酶的影響

王　帥, 賈琦珍, 陳根元, 程　勇, 張　玲, 馬春暉,3

(1.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 阿拉爾 843300；2.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300；3.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆 石河子 832000)

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小花棘豆中毒對(duì)大鼠下丘腦—垂體—卵巢軸α-甘露糖苷酶的影響

王帥1,2, 賈琦珍1, 陳根元1, 程勇1,2, 張玲1,2, 馬春暉1,3

(1.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 阿拉爾 843300；2.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300；3.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆 石河子 832000)

摘要:將144只雌性大鼠隨機(jī)分為4組，即對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組.將小花棘豆全草粉碎后，按Ⅰ組添加15%(含苦馬豆素30 mg·kg(-1))、Ⅱ組添加30%(含苦馬豆素60 mg·kg(-1))、Ⅲ組添加45%(含苦馬豆素90 mg·kg(-1))的比例制作混合飼料，飼喂至典型中毒癥狀出現(xiàn)為止.攻毒后每7 d每組隨機(jī)采集4只大鼠的下丘腦、垂體和卵巢，檢測其AMA活性及表達(dá)的變化.結(jié)果表明，試驗(yàn)及對(duì)照大鼠下丘腦—垂體—卵巢軸高爾基體α-甘露糖苷酶Ⅱ(AMA1)和溶酶體α-甘露糖苷酶(AMA2)均有表達(dá)，但各試驗(yàn)組表達(dá)轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組差異顯著，試驗(yàn)Ⅰ組大鼠HPOA的AMA1及AMA2的表達(dá)均與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)，但試驗(yàn)Ⅱ組大鼠HPOA的AMA1以及試驗(yàn)Ⅲ組大鼠HPOA的AMA1、AMA2相對(duì)表達(dá)均顯著低于對(duì)照(P<0.05)，而且隨著試驗(yàn)的進(jìn)行抑制效果愈加明顯.結(jié)果表明，小花棘豆中毒可影響大鼠HPOA中AMA的活性及其基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá).

關(guān)鍵詞:小花棘豆; 苦馬豆素; α-甘露糖苷酶; 下丘腦—垂體—卵巢軸

小花棘豆(OxytropisglabraDC)是新疆南疆地區(qū)分布最為廣泛的有毒植物，具有耐旱、耐貧瘠、返青早、生命力強(qiáng)、繁殖系數(shù)高等多種特性，現(xiàn)已嚴(yán)重危害新疆草原畜牧業(yè)的發(fā)展[1].目前僅新疆阿克蘇地區(qū)天然草場分布面積就超過20%，每年因采食小花棘豆而中毒的家畜占放牧家畜總數(shù)的5%-10%，其中約50%的中毒家畜死亡.中毒家畜表現(xiàn)為機(jī)體的廣泛性損傷，其中尤以神經(jīng)系統(tǒng)和繁殖系統(tǒng)損傷最為明顯[2].國內(nèi)外研究表明，苦馬豆素(Swainsonine, SW)是小花棘豆的主要毒性成分[3]，可通過抑制α-甘露糖苷酶(α-mannosidase, AMA)活性，導(dǎo)致機(jī)體甘露糖代謝發(fā)生異常而發(fā)揮毒性作用[4,5].研究表明，AMA是動(dòng)物小花棘豆中毒特異性最強(qiáng)的指標(biāo)[6]，小花棘豆中毒動(dòng)物的AMA活性受到顯著抑制，但對(duì)其轉(zhuǎn)錄、翻譯、加工修飾等的影響尚不清楚，中毒動(dòng)物繁殖系統(tǒng)AMA活性及表達(dá)的變化未見報(bào)道.本試驗(yàn)通過ELISA、免疫組化和熒光實(shí)時(shí)定量PCR法，研究小花棘豆攻毒對(duì)大鼠下丘腦—垂體—卵巢軸(hypothalamus-pituitary-ovarian axis, HPOA)AMA活性及分布、表達(dá)的影響，為小花棘豆中毒機(jī)制的研究提供依據(jù).

1材料與方法

1.1材料

小花棘豆2013年8月采集于阿克蘇市烏什縣奧特貝希鄉(xiāng)，由塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院草業(yè)科學(xué)學(xué)科組鑒定.取植株的地上部分，陰干、保存?zhèn)溆?

AMA檢測試劑盒，南京建成生物技術(shù)有限公司；S-P超敏組化試劑盒，福州邁新生物技術(shù)有效公司；AMA抗體及抗體免疫組化稀釋液，Abcam(上海)貿(mào)易有限公司；低分子質(zhì)量Marker(DL2500)，總RNA提取試劑(D9108)，反轉(zhuǎn)錄試劑盒(DRR047A)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒(DRR081)，均為TAKARA(大連)有限公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純，實(shí)驗(yàn)室用水為超純水.

5331型PCR儀，Realplex2型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，德國Eppendorf；PowerWave XS型全波長酶標(biāo)儀，美國BIO-RAD；DYY-Ⅱ型電泳儀，北京六一；PRO250型組織勻漿儀，美國PRO Scientific；GELDOC-IT型凝膠成像分析儀，美國UVP.

1.2試驗(yàn)動(dòng)物分組與處理

3月齡雌性SPF級(jí)Wistar大鼠144只，體質(zhì)量(200±10 g)，購自塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)站.隨機(jī)分為對(duì)照組，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組，每組36只，分籠飼養(yǎng).自由采食和飲水.對(duì)照組飼喂大鼠飼料，其組成為：面粉300 g·kg-1，玉米粉290 g·kg-1，豆餅200 g·kg-1，麩皮100 g·kg-1，魚粉50 g·kg-1，酵母粉10 g·kg-1，植物油10 g·kg-1，魚肝油10 g·kg-1，食鹽10 g·kg-1，骨粉10 g·kg-1，礦物質(zhì)添加劑9 g·kg-1.維生素添加劑1 g·kg-1[2]；試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組分別飼喂小花棘豆質(zhì)量分?jǐn)?shù)為150、300和450 g·kg-1的混合飼料.根據(jù)氣相色譜法測定結(jié)果[7]，相當(dāng)于SW添加量為30、60和90 mg·kg-1.試驗(yàn)持續(xù)63 d.試驗(yàn)每7 d每組隨機(jī)取4只大鼠，剖殺后分別取下丘腦、垂體和卵巢，各項(xiàng)組織部分進(jìn)行免疫組化染色分析，部分利用冰生理鹽水制備10%組織勻漿液用于檢測AMA活性，部分組織液氮保存用于檢測mRNA水平表達(dá)的影響.所有解剖工具及凍存管均預(yù)先用DEPC水處理.

1.3AMA在小花棘豆中毒大鼠HPOA組織中分布的測定

試驗(yàn)鼠丘腦、垂體和卵巢組織均使用4%多聚甲醛固定，梯度酒精脫水，二甲苯透明后進(jìn)行石蠟包埋.包埋組織進(jìn)行連續(xù)切片，片厚6 μm，二甲苯脫蠟，梯度酒精復(fù)水，然后按照試劑盒說明操作，其中抗體稀釋比為1/100，DAB顯色，使用PBS為陰性對(duì)照.常規(guī)脫水，透明，封片，觀察組織病理學(xué)變化，采用Image-Pro Plus 6.0軟件對(duì)免疫組化獲得照片進(jìn)行分析.

1.4小花棘豆中毒大鼠HPOA組織中AMA活性的測定

1.5小花棘豆中毒大鼠HPOA AMA在mRNA表達(dá)水平的測定

1.5.1引物設(shè)計(jì)與合成根據(jù)GenBank中大鼠高爾基體α-甘露糖苷酶Ⅱ(AMA1)、溶酶體α-甘露糖苷酶(AMA2)和β-actin基因的核苷酸序列，采用Beacon Designer軟件設(shè)計(jì)引物，引物由TAKARA(大連)有限公司合成(表1).

1.5.2總RNA提取與cDNA合成參照TAKARA公司說明書提取大鼠卵巢總RNA，然后用核酸蛋白檢測儀測定其D260 nm和RNA濃度，用10 g·L-1瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的完整性.將合格RNA利用gDNA Eraser去除基因組DNA，反應(yīng)條件：42 ℃，2 min.以除去基因組DNA的RNA為模板采用兩步法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)體系如下：5×Prime Script?Buffer 4.0 μL，Prime Script?RT Enzyme MixⅠ1.0 μL，RT Primer Mix 1.0 μL，去除DNA的RNA 液10.0 μL，RNase Free dH2O 4.0 μL，總體積20.0 μL，以上步驟均在冰上進(jìn)行.反應(yīng)條件：37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s.

表1　引物設(shè)計(jì)

1.5.3普通PCR及基因測序PCR反應(yīng)體系如下：TaqPCR Master Mix (2×)12.5 μL，模板cDNA 2.0 μL，上、下游引物(10 μmol·L-1)各2.0 μL ，ddH2O 6.5 μL，合計(jì)25.0 μL.其反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性5 min， 94 ℃變性20 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，反應(yīng)30個(gè)循環(huán)，72 ℃最終延伸10 min.PCR產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳鑒定，擴(kuò)增陽性者送TAKARA(大連)有限公司測序.

1.5.4實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測大鼠HPOA中AMA的相對(duì)表達(dá)采用SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR操作，反應(yīng)體系如下：SYBR?Premix Ex TaqTM(2×)10.0 μL，上、下游引物(10 μmol·L-1)各0.8 μL，ROX Reference Dye Ⅱ(50×) 0.4 μL，1.5.2所得cDNA溶液2.0 μL，RNase Free dH2O 6.0 μL，總體積25.0 μL，以上步驟均在冰上進(jìn)行.反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 sec， 95 ℃變性5 s，60 ℃退火34 s，反應(yīng)40個(gè)循環(huán)，PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束.按反應(yīng)體系及反應(yīng)條件進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，得到各部分Ct值，采用雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)所得實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果進(jìn)行分析.

1.6數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件中One-Way ANOVA方法進(jìn)行單因素方差分析.

2結(jié)果與分析

2.1AMA在大鼠HPOA組織中的分布

由圖1可見，AMA在大鼠的丘腦旁中央核、丘腦室旁核、丘腦背內(nèi)側(cè)核、丘腦腹內(nèi)側(cè)核、垂體前葉、垂體后葉、垂體正中隆起、卵巢上皮細(xì)胞、絨毛細(xì)胞、顆粒層細(xì)胞等區(qū)域均有分布.而小花棘豆攻毒大鼠丘腦背內(nèi)側(cè)核細(xì)胞、丘腦室旁核、垂體前葉、垂體后葉、卵巢上皮細(xì)胞及卵巢顆粒層細(xì)胞中AMA的染色明顯變淡，其中試驗(yàn)Ⅰ組與對(duì)照組差異不明顯，但試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組下降明顯，其中試驗(yàn)Ⅲ組在攻毒第42 d后AMA免疫組化染色極淡，表明其已經(jīng)幾乎不表達(dá).

2.2引物的可靠性驗(yàn)證

由圖2可知，β-actin在約100 bp出現(xiàn)條帶，AMA1和AMA2基因分別在在100和200 bp間出現(xiàn)2條清晰條帶，與試驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的條帶相符，表明引物設(shè)計(jì)良好.

2.3試驗(yàn)期內(nèi)大鼠HPOA中的AMA活性變化

由圖3可知，在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)對(duì)照組大鼠HPOA中的AMA活性無明顯變化，試驗(yàn)組大鼠HPOA中的AMA活性均有一定程度下降.攻毒第7 d時(shí)試驗(yàn)組大鼠所有指標(biāo)與對(duì)照組差異均不顯著(P>0.05)；第14 d時(shí)試驗(yàn)Ⅲ組大鼠HPOA中的AMA活性均顯著低于對(duì)照(P<0.05)；第35 d時(shí)試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組大鼠HPOA中的AMA活性均極顯著低于對(duì)照(P<0.01)，并持續(xù)到試驗(yàn)結(jié)束.攻毒第63天時(shí)試驗(yàn)Ⅰ組下丘腦AMA活性顯著低于對(duì)照(P<0.05)，但垂體、卵巢AMA活性與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05).試驗(yàn)表明，長時(shí)間、高劑量的攝食小花棘豆可顯著影響大鼠HPOA中的AMA活性，其中小花棘豆中毒對(duì)下丘腦的影響最為明顯.

2.4試驗(yàn)期內(nèi)大鼠HPOA AMA1表達(dá)水平的變化

由圖4可知，各試驗(yàn)組大鼠HPOA中AMA1均有表達(dá).與對(duì)照組相比，第28 d的試驗(yàn)Ⅲ組大鼠下丘腦中AMA1 mRNA表達(dá)量顯著下降(P<0.05)，但其它試驗(yàn)組均與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05).第42 d的試驗(yàn)Ⅲ組大鼠HPOA中AMA1 mRNA表達(dá)量均極顯著低于對(duì)照(P<0.01)；試驗(yàn)Ⅱ組大鼠丘腦和垂體AMA1 mRNA表達(dá)量極顯著低于對(duì)照(P<0.01)，卵巢AMA1 mRNA表達(dá)量顯著低于對(duì)照(P<0.05).第63 d的試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組大鼠HPOA中的AMA1 mRNA表達(dá)量均極顯著低于對(duì)照(P<0.01)，但試驗(yàn)Ⅰ組HPOA中AMA1 mRNA表達(dá)量仍與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05).試驗(yàn)結(jié)果表明大劑量、長時(shí)間的飼喂小花棘豆可顯著影響大鼠HPOA中的AMA1在mRNA的表達(dá)水平.

2.5試驗(yàn)期內(nèi)大鼠HPOA AMA2表達(dá)水平的變化

試驗(yàn)結(jié)果見圖5.試驗(yàn)開始至第35 d的各試驗(yàn)組AMA2 mRNA表達(dá)量均與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)；第42 d的僅試驗(yàn)Ⅲ組大鼠下丘腦中AMA2 mRNA表達(dá)量顯著低于對(duì)照(P<0.05)，但其余試驗(yàn)組均與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)；第49 d的試驗(yàn)Ⅲ組大鼠HPOA中的AMA2 mRNA表達(dá)量均顯著低于對(duì)照(P<0.05)，并持續(xù)至試驗(yàn)結(jié)束；第63 d的試驗(yàn)Ⅱ組大鼠下丘腦和垂體AMA2的mRNA表達(dá)量顯著低于對(duì)照(P<0.05)，但卵巢AMA2的mRNA表達(dá)量與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05).試驗(yàn)表明小花棘豆中毒對(duì)大鼠HPOA中的AMA2 mRNA表達(dá)量的影響較弱.

2.6試驗(yàn)期內(nèi)大鼠HPOA組織AMA基因序列的影響

經(jīng)DNAStar軟件分析及NCBI BLAST比對(duì)，試驗(yàn)Ⅰ組大鼠下丘腦、垂體、卵巢AMA與公布的基因序列重合率均在99%以上，其中垂體和卵巢AMA與公布序列完全一致，表明低劑量小花棘豆中毒對(duì)大鼠HPOA中的AMA活性及表達(dá)無明顯影響.試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組大鼠HPOA中的AMA與公布的基因序列均有較大差異，試驗(yàn)第63 d的試驗(yàn)Ⅲ組大鼠下丘腦、垂體、卵巢AMA1與公布的基因序列重合率分別只有88%、90%和90%，但各試驗(yàn)組大鼠下丘腦、垂體、卵巢AMA2與公布的基因序列重合率均在95%以上，表明大劑量的小花棘豆中毒對(duì)大鼠AMA1有顯著影響.

3討論

3.1小花棘豆中毒對(duì)大鼠HPOA中的AMA活性影響

SW是小花棘豆的主要毒性成分，其結(jié)構(gòu)與甘露糖類似，可強(qiáng)烈的、特異性的與AMA結(jié)合，從而使機(jī)體甘露糖代謝發(fā)生異常，導(dǎo)致甘露糖大量蓄積于細(xì)胞內(nèi)而造成細(xì)胞空泡變性，最終導(dǎo)致細(xì)胞損傷[8,9].王帥等[2]研究表明小花棘豆中毒可導(dǎo)致試驗(yàn)鼠腦組織與性腺損傷，而且腦指數(shù)和性腺指數(shù)均與小花棘豆中毒均極顯著相關(guān)(P<0.01).丁伯良等[10]研究認(rèn)為甘肅棘豆(主要毒性成分為SW)中毒山羊卵巢組織細(xì)胞的空泡變性與AMA活性下降有關(guān)，陳根元等[6]發(fā)現(xiàn)小花棘豆中毒家兔AMA活性顯著下降.本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)AMA在大鼠HPOA中均有分布，而且中毒大鼠HPOA中的AMA活性顯著下降，并與時(shí)間-劑量呈正相關(guān)，表明小花棘豆毒性成分SW可通過影響AMA導(dǎo)致動(dòng)物中毒.

3.2小花棘豆中毒對(duì)大鼠HPOA中的AMA在mRNA表達(dá)水平的影響

AMA在機(jī)體糖蛋白合成和代謝方面具有重要的作用，可在N-糖基化過程中對(duì)甘露糖進(jìn)行加工.該過程與蛋白的折疊、運(yùn)輸、成熟、構(gòu)象維持、半衰期及生物活性密切相關(guān).AMA既是N-聚糖成熟的必要酶，也參與N-聚糖的降解[11].賈琦珍等[5]、宋巖巖[12]研究發(fā)現(xiàn)SW可顯著影響中毒鼠AMA在腦組織中的相對(duì)表達(dá)，張建軍等[13]研究發(fā)現(xiàn)小花棘豆中毒可顯著影響小鼠肝臟組織內(nèi)AMA的相對(duì)表達(dá).本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，小花棘豆中毒可顯著影響大鼠HPOA中高爾基體α-甘露糖苷酶Ⅱ和溶酶體α-甘露糖苷酶在mRNA水平的表達(dá)，而且對(duì)高爾基體α-甘露糖苷酶Ⅱ的影響更為顯著，該結(jié)果與賈琦珍等[5]、宋巖巖[12]、張建軍等[13]的研究結(jié)果一致.另外免疫組化試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小花棘豆中毒大鼠HPOA中AMA蛋白表達(dá)均有一定程度的下降，而且各試驗(yàn)組見差異顯著，高劑量小花棘豆攻毒可導(dǎo)致大鼠HPOA中的AMA蛋白表達(dá)受到顯著抑制.α-甘露糖苷酶按其在亞細(xì)胞器的分布可分為高爾基體α-甘露糖苷酶Ⅱ、溶酶體α-甘露糖苷酶和細(xì)胞質(zhì)α-甘露糖苷酶，動(dòng)物小花棘豆中毒時(shí)主要抑制哪種AMA尚不明確，對(duì)其轉(zhuǎn)錄、翻譯、加工修飾是否產(chǎn)生影響還不清楚.本試驗(yàn)研究表明小花棘豆毒性成分可從mRNA水平和蛋白表達(dá)水平影響AMA的表達(dá)，從而為揭示小花棘豆中毒的作用機(jī)理奠定了基礎(chǔ).

3.3小花棘豆中毒對(duì)大鼠HPOA中的AMA基因序列的影響

AMA活性受到抑制可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)糖蛋白的N-糖基化合成、加工、轉(zhuǎn)運(yùn)等過程發(fā)生變化，臨床上表現(xiàn)為生殖功能、內(nèi)分泌和免疫功能紊亂[14].試驗(yàn)表明中、高劑量小花棘豆攻毒可對(duì)大鼠HPOA中的AMA活性與表達(dá)產(chǎn)生顯著影響，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)高劑量攻毒組大鼠下丘腦、垂體、卵巢AMA1基因序列與NCBI公布的正常大鼠基因序列重合率分別只有88%、90%和90%.張建軍等[13]的研究發(fā)現(xiàn)高劑量小花棘豆中毒組小鼠肝臟AMA基因與正常對(duì)照的重合率較低，本試驗(yàn)結(jié)果與之一致.丘腦和垂體是動(dòng)物內(nèi)分泌的控制中心，并分泌大量與生殖相關(guān)的激素，卵巢是多種性激素的受體.HPOA任何部位出現(xiàn)功能紊亂或病變，都會(huì)影響動(dòng)物性激素的分泌，從而導(dǎo)致一系列的臨床病癥出現(xiàn).國內(nèi)外研究表明小花棘豆中毒可顯著影響動(dòng)物的繁殖機(jī)能，導(dǎo)致母畜性欲下降、不孕、流產(chǎn)、畸形、難產(chǎn)等，嚴(yán)重時(shí)發(fā)生死胎，但其具體作用機(jī)制尚不明確.本研究發(fā)現(xiàn)小花棘豆中毒可通過影響AMA的活性及表達(dá)從而導(dǎo)致HPOA損傷，而HPOA與動(dòng)物性激素的分泌密切相關(guān)，小花棘豆中毒動(dòng)物繁殖機(jī)能的下降是否與HPOA損傷導(dǎo)致的性欲下降有關(guān)，還有待于進(jìn)一步研究.

4結(jié)論

小花棘豆中毒可導(dǎo)致大鼠HPOA中的AMA活性與表達(dá)水平顯著下降，而且下降趨勢(shì)與小花棘豆攝入量呈現(xiàn)極顯著的正相關(guān).小花棘豆中毒對(duì)AMA1的影響較為顯著，其可通過mRNA水平和蛋白表達(dá)水平影響AMA1在機(jī)體中的作用.

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(責(zé)任編輯:吳顯達(dá))

Toxicity ofOxytropisglabraDC on α-mannosidase of hypothalamus-pituitary-ovarian axis in rats

WANG Shuai1,2, JIA Qizhen1, CHEN Genyuan1, CHENG Yong1,2, ZHANG Ling1,2, MA Chunhui1,3

(1.Key laboratory of Tarim Animal Husbandry Science and Technology, Xinjiang Production & Construction Corps, Alar,Xinjiang 843300, China; 2.College of Animal Science, Tarim University, Alar, Xinjiang 843300, China;3.College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi, Xinjiang 832000, China)

Abstract:In order to investigate the toxicity mechanism of Oxytropis glabra DC, 144 3-month female rats were randomized into 4 groups (control group and experimental groupⅠ,Ⅱ,Ⅲ) and fed with mixture of O. glabra DC (fully ground above-ground part) and swainsonine (0, 30, 60 and 90 mg·kg(-1)) accordingly, until typical toxicity symptoms occurred. Then rats were selected randomly from each group every 7 d until the 63rd day. Hypothalamus, pituitary and ovary were collected, and contents of AMA Ⅰ, Ⅱ and its mRNA expression in different encephalic regions were measured. Golgi AMA I and lysosomal AMA Ⅱ were detected in HPOA in four experimental groups. And the concentration of AMA1 and AMA2 mRNA decreased as doses of O. glabra DC increased. The difference was not significant in group Ⅰ and the control group in HPOA (P>0.05), but AMA1 and AMA2 mRNA were significantly lower in experimental group Ⅱ and Ⅲ than the control group(P<0.05). And the inhabitation effect intensified as the study proceeded. To summarize, O. glabra DC reduces the concentration and transcriptional expression of AMA in female rat HPOA.

Key words:Oxytropis glabra DC; swainsonine; α-mannosidase; hypothalamus-pituitary-ovarian axis

DOI:10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2016.01.012

中圖分類號(hào):S856.9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

文章編號(hào):1671-5470(2016)01-0070-07

作者簡介:王帥(1984-)，男，實(shí)驗(yàn)師，碩士.研究方向：動(dòng)物毒理學(xué).Email：wangshuaidky@126.com.通訊作者馬春暉(1966-)，男，教授，博士，博士生導(dǎo)師.研究方向：牧草生產(chǎn)與加工利用.Email：chunhuima@126.com.

基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金(31460678)；兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題(HS201207).

收稿日期：2015-04-01修回日期：2015-06-26