外周血5-羥色胺水平檢測在冠心病診斷中的臨床價(jià)值及其與氧化應(yīng)激的關(guān)系

李 陶 龐 琪 劉永斌

外周血5-羥色胺水平檢測
在冠心病診斷中的臨床價(jià)值及其與氧化應(yīng)激的關(guān)系

李 陶1龐 琪2劉永斌1

目的 探討外周血5-羥色胺水平在冠心病診斷中的臨床價(jià)值及其與氧化應(yīng)激水平的關(guān)系。方法 研究共納入于蘭州石化總醫(yī)院就診的具有心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)并考慮為冠心病的門診患者96例，根據(jù)影像學(xué)檢查結(jié)果，將研究對象分為冠心病組及非冠心病組。采集研究對象靜脈血標(biāo)本，制備全血標(biāo)本（WB）、乏血小板血漿標(biāo)本（PPP）及血清標(biāo)本。高效液相色譜法檢測全血標(biāo)本、乏血小板血漿標(biāo)本中的5-羥色胺水平。利用Diacron-活性氧代謝產(chǎn)物檢測試劑盒檢測血清活性氧代謝產(chǎn)物（d-ROM）水平。結(jié)果 冠心病組研究對象的PPP中的5-羥色胺水平高于非冠心病組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），高PPP/WB 5-羥色胺比值是冠心病發(fā)病的危險(xiǎn)因素。冠心病組研究對象的血清d-ROM高于非冠心病組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。冠心病研究對象PPP中的5-羥色胺水平及PPP/WB 5-羥色胺比值均與血清d-ROM水平呈正比。受試工作者曲線提示，PPP/WB 5-羥色胺比值診斷冠心病的AUG為0．658，聯(lián)合PPP/WB 5-羥色胺比值及血清d-ROM水平診斷冠心病的效能更高（AUG為0．762）。結(jié)論 外周血5-羥色胺水平可用于評估冠心病發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)，并具有診斷價(jià)值。冠心病患者的外周血5-羥色胺水平與氧化應(yīng)激水平有關(guān)，聯(lián)合氧化應(yīng)激指標(biāo)后其診斷價(jià)值更高。

冠心??；5-羥色胺；診斷；氧化應(yīng)激

5-羥色胺主要合成并分布于腸嗜鉻細(xì)胞中，可被血小板攝取和儲存，并在血小板激活時(shí)釋放到血漿中，起到收縮血管的作用［1］。存在心血管病風(fēng)險(xiǎn)的人群外周血中的5-羥色胺往往升高，可能具有預(yù)測，評估心血管疾病的潛能［2］。近期研究發(fā)現(xiàn)，外周血中5-羥色胺的水平與血管內(nèi)皮損傷程度有關(guān)，血管損傷患者乏血小板血漿（platelet-poor plasma，PPP）中的5-羥色胺水平與全血（whole blood，WB）中的5-羥色胺水平之比值（以下簡稱PPP/WB 5-羥色胺比值）增高，因此PPP/WB 5-羥色胺比值可作為血管損傷的指標(biāo)［3］。基于血管損傷是冠心病發(fā)病的關(guān)鍵病理生理學(xué)基礎(chǔ)這一共識，我們假設(shè)可以利用外周血5-羥色胺水平作為冠心病的診斷評估指標(biāo)。另一方面，血管損傷的過程中，氧化應(yīng)激扮演著重要角色［4］，因此我們還研究了外周血5-羥色胺水平與氧化應(yīng)激指標(biāo)，即活性氧代謝產(chǎn)物（reactive oxygen metabolites，d-ROM）的關(guān)系，并試圖探討二者聯(lián)合診斷冠心病的價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

本研究共納入2013年1月～2015年12月于我院就診的具有心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)并考慮為冠心病的門診患者96例，其中男性59例，女性37例，年齡（45±8）歲。研究對象納入標(biāo)準(zhǔn)為持續(xù)存在以下一種或多種心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)因素：高血壓病史；血脂異常；正在服用抗血脂異常藥物；糖尿病史；吸煙史；研究對象排除標(biāo)準(zhǔn)：中風(fēng)或心肌梗死病史；肝功能受損；血清肌酐水平≥1.5 mg/dl；惡性腫瘤；活動(dòng)性炎癥。納入研究的對象接受冠脈CT造影，心肌灌注顯影檢測。影像學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)心肌缺血或冠狀動(dòng)脈狹窄程度＞75%可診斷為冠心病。確診為冠心病的研究對象分入冠心病組，其余對象分入非冠心病組。研究對象對研究內(nèi)容知情統(tǒng)一，本研究方案經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。

1.2 血液標(biāo)本的采集，外周血5-羥色胺及d-ROM測定

于早晨空腹采集研究對象靜脈血標(biāo)本。如患者需要服用藥物，血液采集需在服藥前完成，以盡量排除藥物對試驗(yàn)結(jié)果的干擾。每個(gè)研究對象的靜脈血標(biāo)本采集量為6 ml，分別于3支EDTA2K真空采血管低溫保存，每支2 ml。分別用于PPP，全血5-羥色胺的檢測及血清d-ROM。PPP由梯度離心法制備。外周血5-羥色胺檢測采用高效液相色譜法，具體檢測方法參考Hirowatari等人［5］的報(bào)道的方法。血清d-ROM水平的檢測采用Diacron-活性氧代謝產(chǎn)物檢測試劑盒（意大利Diacron international公司）進(jìn)行檢測，檢測方法參考試劑說明書。檢測結(jié)果使用相對單位CARR表示，1 CARR相當(dāng)于0.8 mg/L H2O2。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 13.0軟件。計(jì)量資料以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）（x-±s）表示。兩組間的均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。線性回歸分析和多元回歸分析評估冠心病患者各指標(biāo)與d-ROM水平的關(guān)系。單因素分析及多因素Logistic回歸分析評估5-羥色胺及d-ROM與冠心病發(fā)病的關(guān)系。受試工作者曲線（Receiver operating curve，ROC）分析相關(guān)指標(biāo)診斷冠心病的效能。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 冠心病患者和非冠心病患者外周血5-羥色胺的水平差異

根據(jù)影像檢查指標(biāo)，50例研究對象被確診為冠心病，46例研究對象排除冠心病診斷。如圖1所示，冠心病患者的PPP5-羥色胺水平、WB羥色胺水平及PPP/WB 5-羥色胺比值均高于非冠心病患者，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 冠心病患者和非冠心病患者d-ROM水平的差異

如圖2所示，冠心病患者的d-ROM水平高于非冠心病患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示冠心病患者的氧化應(yīng)激水平較高。相關(guān)性分析可見（圖3），冠心病患者的PPP/WB 5-羥色胺比值與d-ROM水平呈正比（r=0.612，P＜0.05）。

2.3 冠心病患者外周血5-羥色胺水平與發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系

所有納入研究對象的PPP/WB 5-羥色胺比值的平均水平為（2.03±0.52），以此均值為界限，可將所有研究對象劃分為兩組：高PPP/WB 5-羥色胺比值組（51）及低PPP/WB 5-羥色胺比值組（45）。單因素分析可知（表1），高PPP/WB 5-羥色胺比值是冠心病的風(fēng)險(xiǎn)因素（OR=4.02，95%CI：2.20～7.32，P＜0.05）。進(jìn)一步利用Logistic多因素回歸模型，納入多個(gè)因素進(jìn)行分析可見：高PPP/WB 5-羥色胺比值及高d-ROM水平是冠心病的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素（表2）。

2.4 PPP/WB 5-羥色胺比值用于冠心病診斷的效能評估

圖1 冠心病患者和非冠心病患者外周血5-羥色胺的水平

圖2 冠心病患者和非冠心病患者血清d-ROM水平

圖3 冠心病患者PPP/WB 5-羥色胺比值與血清d-ROM水平的相關(guān)性

表1 PPP/WB 5-羥色胺比值與冠心病發(fā)病的單因素分析

表2 Logistic多因素回歸分析冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)因素

利用ROC曲線分析PPP/WB 5-羥色胺比值對冠心病的診斷價(jià)值可發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)使用PPP/WB 5-羥色胺比值作為診斷指標(biāo)，ROC曲線下面積AUG值為0.658，（95% CI，0.55～0.76，P＜0.05）。提示PPP/WB 5-羥色胺比值具有診斷冠心病的臨床診斷意義。當(dāng)聯(lián)合PPP/WB 5-羥色胺比值及d-ROM水平進(jìn)行診斷時(shí)，ROC曲線下面積AUG值上升為0.762，（95%CI：0.664～0.859，P＜0.05）。提示二者聯(lián)合后的診斷效能更佳。

3 討論

在血管內(nèi)皮功能紊亂的病理狀態(tài)下，5-羥色胺能夠收縮血管，造成血管痙攣，促進(jìn)血栓形成，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，使得血管內(nèi)皮功能進(jìn)一步紊亂，從而誘導(dǎo)粥樣動(dòng)脈斑塊的形成甚至破裂，最終造成心血管系統(tǒng)的疾病，如冠心?。?,6］。一些研究發(fā)現(xiàn)，具有心血管疾病高風(fēng)險(xiǎn)因素的人群，如吸煙者，其血管內(nèi)皮功能與外周血5-羥色胺水平有關(guān)，呈現(xiàn)反比例關(guān)系［7］。外周血5-羥色胺包括的5-羥色胺以及WB中的5-羥色胺，能夠反映血管損傷的程度。一般認(rèn)為乏血小板血漿中的5-羥色胺水平反映5-羥色胺的釋放，而全血（whole blood，WB）中的5-羥色胺水平反應(yīng)其儲備［5,8］。在一些血管損傷病灶，如動(dòng)脈粥樣病灶，往往存在血小板的激活，并伴隨5-羥色胺的釋放，因而儲備減少。故PPP/WB 5-羥色胺比值反映其釋放程度，能夠代表血管損傷病灶的嚴(yán)重程度［5］。一些研究指出，隨著研究對象年齡的增長，PPP/ WB 5-羥色胺比值出現(xiàn)增加，其原因在于血管損傷灶，諸如粥樣動(dòng)脈硬化灶之類隨著年齡的增長而增多［9-10］。本研究中，我們檢測了冠心病和非冠心病兩組研究對象PPP及WB中的5-羥色胺水平，同時(shí)計(jì)算了兩者的比值。結(jié)果與既往研究的預(yù)測類似，我們發(fā)現(xiàn)冠心病患者PPP中的5-羥色胺水平及PPP/WB 5-羥色胺比值高于非冠心病組的研究對象。進(jìn)一步的單因素和多因素分析均證實(shí)，較高的PPP/WB 5-羥色胺比值是冠心病的風(fēng)險(xiǎn)因素。診斷效能方面，ROC曲線評估顯示，獨(dú)立使用PPP/WB 5-羥色胺比值診斷冠心病具有一定的診斷效能。

另一方面，我們在研究中關(guān)注了外周5-羥色胺比值與氧化應(yīng)激的關(guān)系及臨床意義。氧化應(yīng)激是由自由基的產(chǎn)生和清除失衡造成的，為血管內(nèi)皮損傷的主要機(jī)制之一［11-12］。冠心病患者存在較高的氧化應(yīng)激水平是公認(rèn)的事實(shí)［13］。因此，我們認(rèn)為外周血 5-羥色胺水平可能通過血管損傷這個(gè)“橋梁”與氧化應(yīng)激產(chǎn)生聯(lián)系。本研究中我們發(fā)現(xiàn)，對比非冠心病人群，氧化應(yīng)激指標(biāo)d-ROM的水平在冠心病患者中明顯增加。更重要的是，我們發(fā)現(xiàn)在冠心病患者中，PPP/WB 5-羥色胺比值與d-ROM水平呈正比，聯(lián)合二者診斷冠心病的效能更高。

總之，本研究證實(shí)了外周血5-羥色胺水平與冠心病的關(guān)系，較高的PPP/WB 5-羥色胺比值是冠心病的危險(xiǎn)因素，PPP/WB 5-羥色胺比值具有作為冠心病診斷指標(biāo)的較大潛能。同時(shí)我們證實(shí)了冠心病患者外周血5-羥色胺水平與氧化應(yīng)激指標(biāo)d-ROM水平密切相關(guān)，兩者聯(lián)合診斷冠心病的效能更高。

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The Clinical Significance of Peripheral Serotonin in Coronary Artery Disease and its Relationship With Oxidative Stress

LI Tao1PANG Qi2LIU Yongbin11 Department of Cardiovascular，Lanzhou Petrochemical General Hospital，Lanzhou Gansu 730060，China，2 Department of Respiration

Objective To investigate the clinical significance of peripheral serotonin in the diagnose of coronary artery disease（CAD）and its relationshipwith oxidative stress． Methods 96 subjects with cardiovascular risk and suspected CAD were enrolled in the present study． According to the CT and angiography results，all subjects were divided into two group including CAD group and non-CAD group． The venous blood samples were collected and whole blood（WB），poor-plate plasma （PPP） and serum samples were prepared． Using High performance liquid chromatography detected the serotonin level in PPP and WB samples． To detected the reactive oxygen metabolites（d-ROM），a Diacron- reactive oxygen metabolites kit was uesed． Results Compared with the patients without CAD，the PPP serotonin level in patients with CAD was higher（P＜0．05）． Both unvariate and multivariate analysis indicated that higher PPP/WB serotonin ratio was a risk factor for CAD． The d-ROM was higher in patients with CAD（P＜0．05）． The PPP serrotonin level and PPP/WB serotonin ratio were proportional to d-ROM level in CAD patients． Receiver operating curves showed that the AUG of PP/WB serotonin ratio was 0．658 in the diagnose of CAD． However，after combined with d-ROM level，the AUG could reach in the diagnose of CAD（AUG=0．762）． Conclusion Peripheral serotonin could be used as a biomarker in risk estimation in CAD and also has clinical diagnose value． There is a association between peripheral serotonin and oxidative stress． Combining with the oxidative stress parameter，the diagnose value of peripheral serotonin would be imporved．

Coronary artery disease，Serotonin，Diagnosis，Oxidative stress

R541．4

A

1674-9316（2016）22-0148-04

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．22．090

1 蘭州石化總醫(yī)院心血管內(nèi)科，甘肅 蘭州730060；2 呼吸科

劉永斌，E-mail：liuybres@126．com