C-erBb-2，VEGF和MMP-9在大腸癌中的表達(dá)及其相關(guān)意義

吳福紅　詹其林　李雪華

201500 上海市第六人民醫(yī)院金山分院

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C-erBb-2，VEGF和MMP-9在大腸癌中的表達(dá)及其相關(guān)意義

吳福紅詹其林李雪華

201500 上海市第六人民醫(yī)院金山分院

【摘要】目的探討大腸癌中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、C-erBb-2和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法選擇大腸癌組織60例和遠(yuǎn)癌大腸黏膜20例；采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)VEGF，C-erBb-2和MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)，并對(duì)其表達(dá)與大腸癌的臨床病理特征的關(guān)系以及三者間的相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果在大腸癌組織中，C-erbB-2、VEGF和MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)率分別為50%、60%、60%，明顯高于遠(yuǎn)癌腸組織(P<0.01)。大腸癌組織C-erBb-2、VEGF和MMP-9陽(yáng)性表達(dá)與年齡、性別和分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)，而與腫瘤侵襲深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分期密切相關(guān)(P<0.05)。C-erBb-2，VEGF和MMP-9在大腸癌中的表達(dá)均呈正相關(guān)；VEGF和C-erbB-2間的等級(jí)相關(guān)系數(shù)為0.461；MMP-9和VEGF間的等級(jí)相關(guān)系數(shù)為0.483，C-erbB-2和MMP-9間的等級(jí)相關(guān)系數(shù)為0.427。結(jié)論C-erBb-2，VEGF和MMP-9的表達(dá)與大腸癌組織浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)；提示可作為判定大腸癌發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后的指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】大腸癌；C-erBb-2；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；基質(zhì)金屬蛋白酶

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:526～529)

大腸癌是消化系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤，具有易種植、高轉(zhuǎn)移和易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)。隨著飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣的改變，大腸癌的發(fā)病率正逐年升高[1]；大腸癌在發(fā)病早期多無(wú)癥狀，隨著腫瘤的增大和病情的發(fā)展，其臨床癥狀才逐漸表現(xiàn)；而在臨床上已有癥狀的患者，其局部病變往往處于嚴(yán)重階段，或已是大腸癌的晚期；因此，早期發(fā)現(xiàn)是提高患者生存率的重要環(huán)節(jié)[2]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腫瘤血管生成在腫瘤組織的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用，其中VEGF是目前被認(rèn)為作用最強(qiáng)的促進(jìn)血管生成因子，可誘導(dǎo)腫瘤新生血管生成并增加血管通透性[3]；癌基因(C-erBb-2)與癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4]；基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)家族成員之一，可以有效地降解腫瘤表面的基質(zhì)和基膜的構(gòu)成蛋白[5]。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大腸癌腫瘤組織中C-erBb-2、VEGF和MMP-9的表達(dá)及三者與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系，分析其在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及相互關(guān)系，為大腸癌的診斷及預(yù)后判斷提供客觀的參考指標(biāo)。

1材料與方法

1.1一般資料

本組研究共選擇大腸癌組織60例，均為2012年1月至2014年2月間經(jīng)我院病理科確診的大腸癌組織標(biāo)本，其中女性18例，男性42例；年齡29～81歲，平均(56.7±7.6)歲；病理分期：參照Dukes分期標(biāo)準(zhǔn)制定，其中A期8例，B期18例，C期25例，D期9例；高分化12例，中分化33例，低分化15例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性28例，陽(yáng)性32例。研究組織中遠(yuǎn)癌大腸黏膜組織20例，均為大腸癌行腸切除后的遠(yuǎn)側(cè)斷端腸黏膜組織，所有斷端黏膜組織距癌組織均在10 cm以上，所有組織標(biāo)本均經(jīng)檢查顯示為正常腸黏膜。診斷標(biāo)準(zhǔn)：所有大腸癌組織標(biāo)本均經(jīng)病理檢查確診，大腸癌臨床分期、分化程度和淋巴結(jié)浸潤(rùn)參照2002年國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)標(biāo)準(zhǔn)制定[6]。大腸癌病例入選標(biāo)準(zhǔn)：①符合大腸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；②所有患者術(shù)前均未接受放化療等治療；③患者家屬均知情；病例排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他原發(fā)性腫瘤者；②合并其他疾病引起的C-erBb-2，VEGF和MMP-9升高或降低者；③在研究過(guò)程中資料遺失影響結(jié)果判斷者。

1.2免疫組化染色

試劑：濃縮型MMP-9兔抗人單克隆抗體、即用型C-erbB-2鼠抗人單克隆抗體，即用型VEGF鼠抗人單克隆抗體，DAB顯色試劑盒、即用型SP試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物科技有限公司；所有組織標(biāo)本均采取10% 的多聚甲醛固定，再行包蠟打理，組織切片，片厚4 μm，然后進(jìn)行VEGF、C-erbB-2和MMP-9的免疫組化染色和HE 染色；實(shí)驗(yàn)具體操作方法嚴(yán)格根據(jù)SP試劑盒相關(guān)說(shuō)明進(jìn)行；PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性染色結(jié)果為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3結(jié)果判斷

根據(jù)文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)[7]要求進(jìn)行；陽(yáng)性細(xì)胞均為棕色或黃色顆粒，C-erBb-2陽(yáng)性顆粒定位于細(xì)胞膜，VEGF及MMP-9陽(yáng)性染色位于細(xì)胞質(zhì)，隨機(jī)選取10 個(gè)高倍鏡下視野；細(xì)胞呈陽(yáng)性數(shù)<10%為陰性結(jié)果，細(xì)胞呈陽(yáng)性數(shù)≥10% 為陽(yáng)性結(jié)果。

1.4分析指標(biāo)

分析C-erBb-2、MMP-9和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)與患者的性別、年齡、癌組織分化程度、腫瘤組織浸潤(rùn)程度、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移等臨床病理特點(diǎn)間的關(guān)系。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS17.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料分析應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料分析應(yīng)用Spearman分析法，采取P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1大腸癌腫瘤組織中VEGF，C-erbB-2和MMP-9的表達(dá)

MMP-9 和VEGF的陽(yáng)性染色位于大腸癌組織的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核，C-erbB-2的陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞膜。60例大腸癌組織標(biāo)本中C-erbB-2，VEGF和MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)率分別為：50.0%，60.0%，60.0%，明顯高于遠(yuǎn)癌腸組織(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1　2組C-erbB-2，VEGF和MMP-9陽(yáng)性比較(例，%)

2.2C-erbB-2，VEGF和MMP-9表達(dá)與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系

大腸癌組織C-erBb-2、VEGF和MMP-9陽(yáng)性表達(dá)與年齡、性別和分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)，而與腫瘤侵襲深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分期密切相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3C-erbB-2、VEGF、MMP-9在大腸癌組織中表達(dá)相關(guān)性分析

C-erBb-2，VEGF和MMP-9在大腸癌中的表達(dá)均呈正相關(guān)。VEGF和C-erbB-2間的等級(jí)相關(guān)系數(shù)γ=0.461，P=0.016；MMP-9和VEGF間的等級(jí)相關(guān)系數(shù)γ=0.483，P=0.013；C-erbB-2和MMP-9間的等級(jí)相關(guān)系數(shù)γ=0.427，P=0.019。

3討論

惡性腫瘤以遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和局部浸潤(rùn)為最重要特征，也是惡性腫瘤致死率高的主因。以往研究表明，C-erbB-2基因的異常表達(dá)在惡性腫瘤組織的局部浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中扮演了重要角色，也是腫瘤生物學(xué)行為的重要關(guān)聯(lián)因素，是目前臨床大腸癌高度惡性的常用生物學(xué)標(biāo)志物[8]。本研究通過(guò)對(duì)60例大腸癌患者的免疫組化分析表明C-erbB-2蛋白在大腸癌患者中的陽(yáng)性表達(dá)顯著高于正常組織，C-erbB-2的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤組織浸潤(rùn)深度以及腫瘤分化程度無(wú)關(guān)，而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者其陽(yáng)性組明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組，Duke’s分期中，C+D期明顯高于A+B期，分期越高，陽(yáng)性表達(dá)越明顯；表明C-erbB-2可能在大腸癌浸潤(rùn)、發(fā)展和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等過(guò)程中起到重要介導(dǎo)作用；C-erbB-2的陽(yáng)性表達(dá)越高，大腸癌組織侵襲性越強(qiáng)。這說(shuō)明c-erbB-2在大腸癌的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移中起著非常重要的作用。

表2　C-erBb-2，VEGF和MMP-9與大腸癌組織臨床病理特征的關(guān)系

腫瘤的生長(zhǎng)浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移依賴(lài)于腫瘤的血管形成。VEGF作為糖蛋白二聚體的一種，目前也是最強(qiáng)血管通透劑之一，其主要作用為增加毛細(xì)血管壁的通透性。此外，VEGF還能夠選擇性促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂，誘導(dǎo)腫瘤組織新血管形成，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞脫落后侵入血管或鄰近組織，以上病理反應(yīng)均為腫瘤組織的浸潤(rùn)、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造了前提條件[3,9]。國(guó)內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)[10]，結(jié)腸癌組織標(biāo)本中VEGF 陽(yáng)性表達(dá)較高，且VEGF 高水平表達(dá)可促進(jìn)結(jié)直腸癌發(fā)生腫瘤組織浸潤(rùn)以及淋巴轉(zhuǎn)移。在本組研究結(jié)果中，大腸癌組織中VEGF的陽(yáng)性表達(dá)為60%，顯著高于正常結(jié)腸組織的10%，與臨床分期、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均相關(guān)，與上述報(bào)道基本一致，表明VEGF的異常陽(yáng)性表達(dá)與惡性腫瘤的發(fā)生進(jìn)程密切聯(lián)系，能夠引起惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

MMP-9作為MMPs家族的重要成員，其被激活后能夠形成Iv型膠原酶；因此，能夠降解腫瘤周?chē)M織的基質(zhì)成分，從而腫瘤細(xì)胞可與細(xì)胞外基質(zhì)粘附，然后沿著被降解的細(xì)胞外基質(zhì)浸潤(rùn)到周?chē)M織，最后實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[11]。本組結(jié)果顯示：60例大腸癌中MMP-9的陽(yáng)性反應(yīng)達(dá)到60%，明顯多于正常組織的20%，提示大腸癌細(xì)胞通過(guò)分泌MMP-9成分而降解基膜和細(xì)胞外基質(zhì)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)到深層管壁，同時(shí)侵及淋巴管引起淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，是目前評(píng)價(jià)大腸癌惡性進(jìn)程的一個(gè)有效指標(biāo)。

C-erbB-2能夠抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)或保持腫瘤細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)；C-erbB-2通過(guò)上調(diào)VEGF而促進(jìn)腫瘤新血管的形成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移等；MMP-9 是一種降解基膜的重要蛋白酶，不僅參與基膜的降解，還能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和粘附。MMP-9的主要作用包括刺激腫瘤的生長(zhǎng)，破壞局部結(jié)構(gòu)，加速腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致腫瘤新血管的生成[12]。在本研究中，VEGF、C-erbB-2和MMP-9在大腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)顯著多于正常組織，均提示這些指標(biāo)可能參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程；VEGF、C-erbB-2和MMP-9的異常表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期有密切關(guān)系，且在大腸癌腫瘤組織中表達(dá)呈正相關(guān)；證實(shí)了C-erbB-2、VEGF和MMP-9與腫瘤的惡性程度與進(jìn)展情況有關(guān)，推測(cè)其在大腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能有協(xié)同作用。因此，我們認(rèn)為聯(lián)合檢測(cè)C-erbB-2、VEGF和MMP-9在大腸癌腫瘤組織中的表達(dá)對(duì)臨床評(píng)價(jià)腫瘤的生物學(xué)特征及其預(yù)后有重要作用，以上結(jié)果為進(jìn)一步的大腸癌的基因診斷和靶向治療提供重要研究依據(jù)。

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(編輯：甘艷)

Expression of C-erBb-2，VEGF，and MMP-9 in Laryngeal Carcinoma and Its Clinical Significance

WUFuhong，ZHANQilin，LIXuehua.Shanghai6thPeople'sHospital，JinshanBranch，Shanghai，201500

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of C-erBb-2，vascular endothelial growth factor(VEGF)，and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) in laryngeal carcinoma and its correlation with clinical pathological factors.Methods60 laryngeal carcinoma tissues and 20 normal tissues of large intestine were chosen.Immunohistochemistry method was employed to detect the expression of C-erBb-2，VEGF，and MMP-9 in all tissues.The relationship between expression of C-erbB-2，VEGF，and MMP-9 with clinicopathological factors of laryngeal carcinoma tissues was analyzed，and at the same time correlation among C-erbB-2，VEGF，and MMP-9 was also analyzed.ResultsThe positive rates of C-erbB-2，VEGF，and MMP-9 in laryngeal carcinoma tissues were 50%，60%，and 60% respectively，which were obviously higher than those of normal tissues of large intestine (P<0.01).There was statistical correlation between expression of C-erBb-2，VEGF，and MMP-9 in largengeal carcinoma and tumor invasion，metastasis，and pathological grade (P<0.01，P<0.05)，but was not related with age，sex，and differentiation (P>0.05).Expression of C-erBb-2，VEGF，and MMP-9 were positive correlated in laryngeal carcinoma tissues.Coefficient of rank correlation between VEGF and C-erbB-2 was 0.461，MMP-9 and VEGF was 0.483，C-erbB-2 and MMP-9 was 0.427.ConclusionExpression of C-erBb-2，VEGF，and MMP-9 in laryngeal carcinoma tissues are significantly related to pathological grade，clinical stage，and metastasis，it can be marker evaluating occurrence，development，and prognosis of laryngeal carcinoma.

【Key words】Laryngeal carcinoma；C-erBb-2；Vascular endothelial growth factor(VEGF)；Matrix metalloproteinase-9(MMP-9)

(收稿日期2015-06-22修回日期 2015-10-08)

中圖分類(lèi)號(hào)：R735.3+4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-5930(2016)04-0526-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.04.002